浙江丽水16个柑橘特色品种的RAPD分析

以浙江省丽水市生产的16个柑橘品种为试验材料,利用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对其亲缘关系进行研究.用21个引物扩增出了216个RAPD位点,平均每个引物10.29个位点,其中多态性位点达96.76%.每个引物不同的品种能扩增出0～10个条带.引物S13信息量最少,扩增出了48个条带,而引物S317信息量最大,扩增出了143个条带.文旦Citrus grandis var.wentanyu是最特殊的品种,21个PCR扩增引物中有8个引物未扩增出任何条带.UPGMA聚类结果是瓯柑类、椪柑类、温州蜜柑类及柚类基本上能聚在一起;南香Citrus unshiu × Citrus clementina与天草Citrus hybrid在遗传上与温州蜜柑类接近;属于杂柑的胡柚Citrus paradisi‘Changshanhuyou’与红肉脐橙Citrus sinensis var.brasiliensis在遗传上接近.另外,用引物S304可以区分无籽瓯柑Citrus suavissima ‘Seedless'与普通瓯柑C.suavissima,用S356可以区分无籽柑Citrus poonensis‘Seedless’与普通椪柑C.poonensis.研究结果表明,这些柑橘不仅在DNA水平上是有差异的,而且RAPD标记技术可用于柑橘DNA水平的鉴别.图4表1参8     

油茶果实含油率影响因子研究

油茶Camellia oleifera果实、种子含油率（出油率）是油茶的重要经济性状。多年多点的调查和采样分析表明,影响油茶含油率的因素有遗传品质、种子成熟度、结果数量和油茶林地的成土母质。实生繁殖的油茶林内个体之间果实、种子的含油率变异大而且相对稳定;种子充分成熟是采种的最适期;对果实及种子含油率影响最大的因子是结果多少,结果越多,含油率越低;果实发育期的气候条件与含油率之间,除个别极端干旱年度外,未见有显著相关;首次发现分布于石灰土和含钙丰富的紫砂土上油茶种子含油率相对较高,与国内外有关油料作物（树种）喜钙的结论相一致。图2表4参11     

香榧ISSR-PCR扩增条件的优化和引物筛选

以香榧Torreya grandis ‘Merrillii’基因组DNA为材料,对影响简单序列重复区间扩增?鄄聚合酶链式反应（ISSR-PCR）的Taq酶用量、Mg²⁺浓度、模板DNA用量、磷酸碱基脱氧核苷酸（dNTPs）浓度和引物浓度等进行了优化试验。优化后的香榧ISSR-PCR扩增体系为：总容积20 μL,包括30 ng模板DNA,16.67 nkat Taq酶,0.350 μmol·L -1引物,1.625 mmol·L^-1 Mg²⁺,0.250 mmol·L^-1 dNTPs,10 × PCR buffer 2 μL。PCR扩增程序：94 ℃变性5.0 min;35个循环：94 ℃变性30 s,退火45 s,退火温度视引物而定,72 ℃延伸1.5 min;最后72 ℃延伸7.0 min,4 ℃保温。在此基础上,从77个ISSR引物中筛选出34个适合香榧ISSR分析的引物,且通过梯度PCR确定了各自最适的退火温度。研究结果为香榧遗传图谱构建打下了基础。图4表1参12     

油茶丰产林土壤肥力与林分结构调查

为探明油茶丰产原因,并为低产林改造提供依据,对以往调查研究认为典型的17块油茶丰产林的土壤肥力、林分结构进行了调查和研究。结果表明:丰产林产茶油180～540 kg/hm2,是一般油茶林的4～10倍,其中0.67 hm2以下的小面积丰产林平均产油量高达420 kg/hm2以上。丰产林的土层厚度、土壤全氮和速效磷、钾肥的含量均显著高于对照林,土壤有效钙含量和盐基饱和度与油茶产量密切相关。丰产林的郁闭度为0.81～0.94,叶面积指数为2.36～5.37,叶效指数为7.15～16.57 g/m2;坡地油茶林及树高、冠幅变异大的油茶林透光性好,受光面积大,叶效指数高。      

油茶开花习性的观察研究

对油茶Camellia oleifera花期变异、授粉习性、落花落果过程及其影响因子的多年多点试验研究表明：①影响油茶花期因子有遗传因子和气候因子,前者决定花期类型,如早、中、晚花类型,性状稳定;气候因子主要是9月平均气温决定“入秋”早迟和花期早迟,进而影响授粉条件和次年产量。②油茶自花不孕．辅助授粉坐果率普遍高于自然授粉,随着花期推迟两者差距越大,说明开花授粉受花期气候和授粉媒介双重影响。不同单株间双列交配,出现一些平均坐果率高的母本、父本植株和坐果率高的特殊交配组合．说明单株间花粉活力和交配亲和力存在差异。③油茶花期长,在正常情况下,花后10d开始落花,高峰在花后30d内。早、中花类开花时气温高,花期集中,坐果率高,落花也集中：晚花类相反．花期长,坐果率低。落花分散。3—10月为落果期,前期落果主要为受精不良、胚珠发育停滞;8-10月为后期落果高峰期,落果数可占总落果量的50％,对产量影响极大,主要是病害引起。     

利用AFLP进行榧树雌雄株鉴定的初步研究

为了解决榧树Torreya grandis苗期雌雄株鉴别的问题,利用已建立的扩增片断长度多态（AFLP）体系及T-A克隆测序,就榧树的雌雄株开展了研究。结果从15对引物中用引物对E-AGC/M-CAT得到了一条雌性榧树特异的条带。这条榧树雌性性别特异条带,仅在雌株、雌雄同株的个体中有,雄株中没有,推测榧树雌雄同株由雌性榧树变异而来。GenBank序列比对结果发现,数据库没有与此特异条带相匹配的序列。     

榧树种质资源调查与评价

榧树(Torreya grandis Fort.ex Lindl)种子是我国特有的著名干果,为了对榧树种质资源进行有效保护和开发利用,采用实地调查、采集标本、室内烤种、成分分析等方法,对浙江、安徽、江西、福建等榧树分布区的种质资源进行了系统研究。结果表明,榧树资源分布不均,仅少数地方资源保存较好;榧树种内性状变异复杂,不同单株间种子的单粒质量、种核单粒质量、出核率、核形指数及营养成分等变异大,存在一些综合性状优良、品质达到或超过香榧的优株;将香榧和榧树中的优良株系、类型分归于7个主要品种和类型。在榧树中应主要收集一些种子具有综合优良性状、特殊性状和有潜在利用价值的单株;香榧则重点在于收集种子高产、稳产、优质和具特殊性状的优株,对古树及古树群也应加以保护。     

山核桃子代甲基化分析及其与薄壳山核桃甲基化的比较

为了研究山核桃的遗传,本研究采用MSAP (Methylation sensitive amplification polymorphism)标记分析了山核桃30个半同胞子代群体及薄壳山核桃29个无性系,并在山核桃亲子代间及山核桃与薄壳山核桃间比较了遗传及甲基化水平。研究发现,山核桃半同胞子代群体非甲基化遗传位点(Non-methylation loci,NML)的比例较高,占33.69%,随后依次是内部胞嘧啶甲基化位点(15.18%)、半甲基化位点(9.25%);其遗传多样性(0.110 3±0.028 4)极显著地小于表观遗传多样性(0.568 5±0.112 3)(p<0.000 1);半同胞子代群体间存在显著的遗传与表观遗传分化,且大部分遗传变异和表观遗传变异存在于群体内,说明亲本间存在遗传差异。甲基化水平在山核桃亲子代间无显著差异(p>0.05),说明甲基化存在代际遗传。山核桃中NML的比例远大于薄壳山核桃,两物种表观遗传多样性相当,但薄壳山核桃的遗传多样性要高于山核桃;两物种遗传和表观遗传差异极显著(p<0.000 1),供试个体基于物种的遗传位点可以分别聚类,说明两物种各自个体间有遗传差异。甲基化敏感位点(Methylation-sensitive loci, MSL)及NML在两物种间存在极显著差异,且变异主要存在于物种内,两物种有明显的分化,但从各遗传参数值来讲,两物种又十分相像,正反交基于亲缘关系可行。不同于山核桃,薄壳山核桃遗传位点对甲基化位点影响极显著。     

山核桃AFLP实验技术体系的建立

以充分展开的山核桃Carya cathayensis嫩叶为材料、利用改良CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）法与CTAB裂解一硅珠吸附法提取山核桃总DNA,对适合于山核桃叶片的AFLP（扩增片段长度多态性）分析体系进行了摸索。结果表明：①改良CTAB法适用于从山核桃叶中提取高质量的DNA,提取的DNA可用于AFLP的分析;②采用EcoR I/Mse I 酶切组合,酶切连接一步法与两步法的效果没有明显的差异,但一步法操作更为简便;③适合于山核桃叶AFLP分析的引物组合为E-ACT＋M-CAT,E-ACT＋M-CTG,E-ACG＋M-CAT,E-ACG＋M-CTG。扩增产物经60g·L^-1变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后进行银染,条带信号强度一致性好,条带分布均匀、清晰,分辨率较高。