H9N2亚型禽流感病毒冷适应株的培育及SPF鸡胚感染后的免疫应答分析

H9N2亚型禽流感病毒(H9N2AIV)冷适应疫苗可以弥补灭活疫苗临床保护效果的不足。为明确宿主对冷适应疫苗的免疫应答效应,本研究将H9N2AIV(A/chicken/Shandong/903/2013,CK/903/2013)接种10日龄SPF鸡胚连续降温传代,获得在25℃能够稳定复制的冷适应株Ca30。实验结果显示:Ca30株具备冷适应性和温度敏感性,在传代过程中病毒HA蛋白出现多个位点的氨基酸突变,在25℃传代20次后已经获得稳定的氨基酸突变。动物感染试验结果显示,以106.0EID50的剂量鼻腔感染1周龄SPF鸡,Ca30株仅在喉气管中低水平复制,病毒接种后第3周SPF鸡血清针对Ca30株、异源病毒株1167的血凝抑制效价均达到最高,分别为8.2log2和5.8log2,接种后第4周针对母本病毒CK/903/2013的血凝抑制效价达到最高值7.6log2。qPCR检测结果显示,Ca30在25℃时能够在鸡胚肺脏、肝脏和心脏中复制,对肺脏的亲和力最强。利用qPCR检测冷适应株Ca30接种鸡胚后各脏器细胞因子的转录水平,结果显示,Ca30株感染鸡胚后,引起鸡胚肺脏中IL-1β、IL-6、IL-12、IL-8、OAS和MDA5转录水平上调,上调4.18~16.47倍;感染后8h引起鸡胚心脏中IL-1β、IL-6、IL-12、IL-8、OAS和MDA5的转录水平上调,之后降低甚至下调;72h时引起鸡胚肝脏中IL-1β、IL-6、IL-8和OAS转录水平上调,上调4.28~6.53倍;在鸡胚脑组织中,各类细胞因子的转录水平变化无明显的规律。本研究培育了一株H9N2AIV冷适应毒株Ca30,为深入研究冷适应弱毒疫苗的免疫保护机制提供了素材。     

进口白羽肉种鸡J亚群禽白血病病毒的全基因组序列分析

为研究引起我国部分地区进口白羽肉种鸡发生禽白血病疫情的病毒来源及其变异趋势,本研究对从进口白羽肉种鸡分离的8株J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的全基因组序列进行测序分析。8株ALV-Jgp85氨基酸遗传演化分析显示,其与ALV-J肉鸡分离株(包括ALV-J原型病毒株HPRS-103、美国肉鸡ALV-J分离株、国内肉鸡分离株)及蛋鸡分离株氨基酸序列同源性均低于92.5%,而与国内2014年父母代白羽肉种鸡ALV-J分离株GD14J2同源性较高,为93.5%~95.1%,处于同一分支。8株ALV-J的3'非编码区(3'UTR)在rTM区缺失203bp,DR-1区缺失7bp,E元件位置缺失125bp,仅保留了22个碱基,这一缺失特征与GD14J2一致。8株ALV-J的3'LTRU3区序列与ALV-J肉鸡分离株及蛋鸡分离株的相应基因序列同源性均低于91.5%,而与GD14J2病毒株的同源性较高,为94.3%~96.3%。序列分析发现U3区存在连续11bp缺失和164位碱基突变(C/T),该突变形成2个新的转录调控元件AIBREP1、AIBREP2。综合gp85、3'UTR和U3区序列特征,推测引起本次进口白羽肉种鸡禽白血病的ALV-J与国内2014年父母代白羽肉种鸡ALV-J分离株GD14J2为同一来源。但本次分离到的ALV-J病毒株也有新的变异趋势,这些变异是否与ALV-J致病性相关,还需进一步研究。本研究为ALV-J有效防控和净化提供数据支持。     

苜蓿假盘菌及其生物学特性研究

研究了苜蓿假盘菌及其生物学特性 ,用常规方法分离培养苜蓿假盘菌较困难 ,试验应用离心稀释分离法获得纯菌株。培养基为V-8碳酸钙琼脂培养基 ,适宜子囊孢子萌发和菌落生长的pH为 3～8和 4～6(最适为5)。在人工培养基上病菌生长缓慢 ,生长 40d的菌落直径只有 2.5～3.5mm ,在培养基上经过20d后才能形成成熟的子囊盘。苜蓿假盘菌子囊孢子萌发温度为 6～25℃ ,最适温度为 15～20℃。芽管生长温度为 10～30℃ ,最适温度为20℃。不同菌株间致病力存在显著差异(p<0.05)。     

仔猪腹泻的原因分析及防治措施

仔猪腹泻发病率高、传染快、死亡率高,严重制约着生猪产业的健康发展,给养殖户以及规模化猪场造成了严重的经济损失。本文从仔猪的病理、生理、应激以及饲养管理等方面查找引起仔猪腹泻的原因,并从母猪饲养、疫苗预防、提高仔猪抵抗力、消毒和药物防治等方面提出了综合防治措施,以期降低仔猪的发病率和死亡率,促进养猪业的健康发展。     

不同工艺转光膜对日光温室环境及番茄生长发育的影响

在日光温室栽培条件下,以番茄品种金棚荣耀为试材,研究加入同种转光剂、采用不同加工工艺的消雾无滴转光膜的透光性、保温性及对番茄植株生长、果实品质和产量的影响。结果表明:与多层共挤和内添加型棚膜相比,涂覆型棚膜的透光性及保温性均有所提高,明显促进番茄植株生长,显著提高产量和果实番茄红素、VC含量。     

祁连山区黑土滩人工草地对春季模拟放牧的响应

该研究于2018年牧草返青期以刈割模拟家畜采食行为,对祁连山区黑土滩人工草地进行了放牧强度(刈割率)为0、30%、50%、70%、90%的5级模拟放牧试验研究。结果表明,春季休牧(未刈割)和放牧强度(刈割率)为30%时,对黑土滩人工草地垂穗披碱草的后期生长发育没有影响,而随着放牧强度(刈割率)加大,垂穗披碱草的后期生长发育将会受到严重制约,当放牧强度(刈割率)达到90%时,垂穗披碱草的盖度、高度、牧草产量和种子产量分别较休牧降低了41.0%、73.0%、87.4%和88.9%,研究结果认为返青期过度放牧利用会引起黑土滩人工草地的快速退化。     

鸭源多杀性巴氏杆菌对磺胺类药物的耐药性检测及耐药基因分析

为明确鸭源多杀性巴氏杆菌对磺胺类药物的耐药性及耐药基因的分布特征,试验采用琼脂二倍稀释法对分离自福建、广东和江西等地的89株鸭源多杀性巴氏杆菌进行甲氧苄啶/磺胺甲噁唑的耐受性检测,用PCR法检测各耐药菌株的磺胺类耐药基因(sul1、sul2和sul3),并利用多位点序列分型(MLST)分析耐药菌株间的亲缘关系。结果显示,33株鸭源多杀性巴氏杆菌对甲氧苄啶/磺胺甲噁唑耐受,耐药率为37.1%(33/89);在耐药菌株中,sul1、sul2和sul3基因检出率分别为100%(33/33)、97.0%(32/33)和21.2%(7/33),其中sul1和sul2基因同时检出率为97.0%(32/33),sul1、sul2和sul3基因同时检出率为21.2%(7/33);所有耐药菌株均属于ST129型。以上结果表明,鸭源多杀性巴氏杆菌对磺胺类药物具有一定的耐药性,其中的耐药菌株都属于同一序列型ST129,均携带有sul1耐药基因,且绝大多数耐药菌株同时携带sul1与sul2两种耐药基因,提示在福建、广东和江西等地需慎用磺胺类药物来防治该细菌的感染。     

12株H9N2亚型禽流感病毒与Sia-α-2,6-唾液酸受体结合力的变化研究

为分析H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)对Sia-α-2,6-唾液酸受体(Sia-α-2,6-Gal)结合力的变化趋势,选择2001~2013年分离自山东省的12株H9N2 AIV进行研究。利用同源建模、分子动力学和分子对接等计算方法,对12株H9N2 AIV的HA蛋白与Sia-α-2,6-Gal之间相互作用进行系统研究,筛选HA蛋白中与Sia-α-2,6-Gal结合的关键氨基酸,并对关键氨基酸进行饱和突变研究。结果显示:随着分离年代临近,H9N2 AIV对Sia-α-2,6-Gal亲和能力有增强趋势,Thr198、Leu234、Met235位点的某种氨基酸突变能够大幅提高HA蛋白与Sia-α-2,6-Gal的结合能力。推测H9N2 AIV对哺乳动物感染能力呈逐渐增强趋。     

绵羊鲜精超长时间保存技术研究

为了研究精液稀释液对绵羊鲜精超长时间保存效果的影响,试验选择萨福克和杜泊公羊精液分别在不同季节采用专用稀释液处理并在0℃冰水混合物状态下保存,检测不同时间的鲜精顶体完整性及精子活率,同时进行人工授精,统计受胎率。结果表明:萨福克公羊精子活率在1~15 d缓慢下降;而杜泊公羊精子活率在保存第6天和第15天有一个相对快速下降的过程;5~9 d内萨福克公羊精子活率变化较为平缓,精子活率均在0.70以上;0~3 d精子顶体完整性高于6~12 d,但差异不显著(P0.05);第15天精子顶体完整性显著低于0~12 d(P0.05)。春季第9天和第12天保存的精子活率显著高于秋季(P0.05)。利用0~12 d保存的精液人工授精后,绵羊受胎率可达到70%以上,保存15 d的精液受胎率显著下降(P0.05)。说明专用稀释液能超长时间(12 d)保证精子活率,并且在春季保存效果优于秋季,受胎率得到保证。     

动物科学专业嵌入式虚拟仿真实验教学的研究与应用

嵌入式虚拟仿真教学是当前互联网、人工智能、云计算、大数据等现代信息技术大背景下,学科专业与信息技术深度融合的产物。它能有效地解决动物科学专业学生生产实习中时间纵深、空间跨度、生产管理制约等方面的矛盾,并达到全方位、全过程、可持续的教学实习目标,实现了虚实结合的实验教学模式的创新。