黑核桃体细胞胚状体发生及其基因转化系统的建立

以我国种植的优良品种黑核桃 (JuglansnigiaL .)幼胚和幼叶为外植体诱导出体细胞胚状体 ,通过根癌农杆菌介导将nptⅡ和gus基因导入体细胞胚 ,同时研究了激素、体细胞胚的发育时期及预培养等对转化率的影响 ,建立了黑核桃体细胞胚基因转化系统 ,还分析了体细胞胚胎转化系统的特点和潜力。     

苦参对鸡大肠杆菌的抑菌作用及其机理研究

【目的】阐明苦参的抑菌作用及机理，为生产实践提供理论依据。【方法】采用牛津杯法及液体倍比稀释法对鸡大肠杆菌等常见致病细菌进行了敏感性试验；通过电镜观察，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对蛋白表达的研究，生长曲线的绘制以及流式细胞仪对菌体细胞周期的分析，对苦参碱粗提物的抑菌作用及机理进行研究。【结果】苦参对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌均有明显抑制作用，抑菌谱广；药物是通过抑制鸡大肠杆菌功能蛋白的表达，从而影响菌体的细胞周期，使I期菌数增加，R期菌数下降，最终菌体不能达到正常对数生长期而直接进入衰亡期；菌体形态结构发生明显变化，表现为菌体缢缩变形，中间凹陷呈规则元宝状，细胞质固缩，质壁分离，最终细胞壁破损，内容物泄漏而使菌体死亡。【结论】苦参碱对鸡大肠杆菌抑菌机理是抑制调控细菌生长、分裂相关蛋白的合成，阻滞其分裂和生长，并且与细胞内的蛋白质结合，细胞质固缩、解体而死亡。     

甘薯体细胞胚状体及其在脱毒、扩繁中的应用

通过甘薯徐薯18茎尖体细胞培养诱导胚性愈伤组织和胚状体,建立了体细胞无性系.胚性愈伤和胚状体诱导培养基为MS附加0.5～2.0mg/L 2,4-D、0.5mg/L NAA、0.1mg/L BA及100mg/L HL.研究结果表明:采用茎尖体细胞胚胎发生途径能够同时实现试管苗的深度脱毒及大幅度提高扩繁量,脱病毒率达95%,扩繁量达382.9倍.田间种植该脱病毒种苗能     

草莓果实特异表达基因annfaf 在E. coli 中的表达及抗血清的制备

摘要：将草莓?穴Fragaria ananassa Duch. ?雪果实中特异表达的膜联蛋白基因annfaf的cDNA连接重组到pET-30a质粒中，构建了融合和非融合蛋白表达载体。annfaf 基因转化大肠杆菌(E. coli )后以包含体形式得到了高效表达，同时研究了annfaf基因表达的影响因素。实验结果表明, 最佳培养温度是37 ℃ ，培养时间为4 h，当培养液中加入利福霉素时可明显提高表达量中目的蛋白的含量。SDS-PAGE检测表明该蛋白分子量为35 kD，与目的蛋白相同。以表达的蛋白作抗原免疫家兔，制备了抗Annfaf蛋白的抗血清。ELISA检测及Western印迹表明，制备的抗血清可与其免疫抗原发生特异的免疫学反应，且具有较高的效价。该实验结果为进一步研究Annfaf蛋白在草莓果实细胞中的定位及其生理功能奠定了基础。     

甘薯花青素的提取及其抑菌效果分析

 建立了甘薯块根花青素（sweetpotato anthocyanin,SPAC）的大孔树脂吸附制备技术，分析了其抑菌作用和机理。结果表明，在0.8%柠檬酸、物料比1∶200，60℃温水浴提取2 h的条件下可获得最大的提取率3.81 mg·g-1。 粗提物经AB-8大孔树脂过柱纯化后可获得色价为225.1E的纯品，色价提高6倍。研究发现SPAC对3种常见致病菌均有抑菌作用，并与其浓度呈正相关。通过电镜观察、SDS-PAGE分析及生长曲线比较表明，SPAC抑菌机理是通过SPAC与细胞中的蛋白或酶结合，使其变性失活，抑制对数生长期的细胞分裂，而后使细胞质固缩、解体，导致细胞死亡。SPAC具有色素和抑菌双重功能，是理想的功能性天然色素。     

紫甘薯红色素的研究进展

紫甘薯红色素(PSPC,purplesweetpotatocolor)是从薯肉呈深紫红色的甘薯品种———“紫甘薯”的块根中浸提出来的一种天然红色素。它色泽鲜艳自然,无毒,无特殊气味,具有多种营养、药理和保健功能,是一种珍稀的天然食用色素资源。目前,国外尤其是日本对PSPC的提取、鉴定和理化性质等已作了一些研究。国内学者陆国权等1996年即开始对该色素进行系统的研究,现已取得显著进展。1　甘薯红色素(PSPC)的分离提纯关于甘薯红色素(PSPC)的分离提纯,已有许多学者做过系统的研究。虽方法各异,但鉴于PSPC特定的结构特点及理化性质,其本质是一…     

樱桃砧木叶片再生系统建立及抗菌肽基因转化

 以优良樱桃砧木新品系98-1、Colt、大青叶为试材进行叶片离体再生及根癌农杆菌介导遗传转化，建立了高频率再生系统，并获得抗菌肽转基因植株。诱导叶片再生的最佳培养基为MS附加BA 1.0—2.0 mg/L、NAA 0.3—0.5 mg/L、GA 0.5 mg/L、AgNO3 5.0—10.0 mg/L。农杆菌及受体感受态是影响转化的关键，延迟筛选可提高叶片中转化细胞对卡那霉素的抗性而利于再生。PCR及Southern Blot检测为阳性，表明抗菌肽基因已整合到樱桃砧木98.1基因组。     

天南星的抑菌作用及其机理研究

以天南星块茎的醇提物对革兰氏阴性菌，大肠埃希氏菌、鸡大肠杆菌、猪大肠杆菌和革兰氏阳性菌，金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、腊状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌进行了敏感性实验。结果表明：天南星醇提物对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有明显的抑制作用，抑菌谱广；其抑菌活性主要成分为皂甙。扫描电镜观察，天南星醇提物对大肠埃希氏菌的菌体结构造成破坏，菌体缢缩变形。直至其缢缩成为颗粒状残体而死亡；透射电镜观察，药物作用下大肠埃希氏菌的细胞质固缩，导致质壁分离，并随药物作用时间增长细胞质解体出现空腔，部分细胞壁缺失，细胞膜破裂；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明在此醇提物作用下，大肠埃希氏菌表达的总蛋白含量下降，而且大分子蛋白下降尤为明显，有些蛋白谱带消失(如R1，R6)；绘制出正常大肠埃希氏菌和药物作用下菌的对比生长曲线，可见这种抑菌作用主要发生在对数生长期，其机理可能是抑制细胞的分裂；实验发现，天南星醇提物对鸡大肠杆菌和猪大肠杆菌的抑制作用强烈，有代替抗生素防治鸡大肠杆菌病和猪大肠杆菌病的应用潜力。     

抗虫基因(CpTI)辣椒转化的初步研究

以辣椒叶片为外植体，通过比较基因型、培养基成分等因素对不定芽分化的影响，建立了具有较高分化频率的再生系统。有农杆菌介导把豇豆胰蛋白酶抑制剂（CpTI）基因导入辣椒。在筛选培养基上获得抗性植株，经Southern斑点杂交检测，初步证实外源基因已整合到辣椒基因组中。     

番茄转果聚糖合酶基因获得抗寒植株

 从枯草芽孢杆菌毖Bacillus subtilis中分离克隆果聚糖合酶(levansucrase)基因sacB,构建置于CaMV35s启动子调控下的表达载体,通过农杆菌介导,将sacB基因导入番茄栽培品种碧娇。Southern杂交证明,目的基因已经整合到番茄基因组中。RT-PCR分析表明,sacB基因在转基因植株中获得转录。在含50mg·ml-1卡那霉素生根培养基中转化植株生根良好。抗冻试验、叶片电导率测定、多糖含量测定的试验结果均表明,果聚糖合酶基因赋予转基因番茄良好的抗寒性状。