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加工番茄为呼吸跃变型果实,伴随呼吸跃变产生大量乙烯,即系统Ⅱ乙烯,易使番茄果实过熟,腐烂变质。 SlACS2 是番茄系统Ⅱ乙烯合成的限速酶,旨在通过 CRISPR-Cas9 基因组编辑系统修饰该基因,调控系统Ⅱ乙烯过量表达,以迟滞番茄过熟腐烂。利用 CRISPR/Cas9 系统定点编辑加工番茄 SlACS2基因,在 SlACS2的第2外显子区域设计 2个靶位点,构建双靶点的CRISPR/Cas9 敲除载体,通过农杆菌介导法转化加工番茄,再生培养获得T0代转基因幼苗,通过PCR 扩增卡那霉素抗性基因获得阳性株系。为进一步获得纯合突变,对T1代植株的双靶位点区域进行PCR 扩增和测序分析,鉴定 SlACS2突变类型。结果发现,从阳性植株的T1后代中鉴定出6种在两个靶位点发生纯合突变类型植株,其中靶位点1突变类型较为丰富,分别发生单碱基的插入及1个、4个、5个和9个碱基的缺失;靶位点2则只有7个碱基的缺失一种编辑类型。结果表明,已成功在加工番茄体内实现对内源 SlACS2的定点敲除,获得的基因编辑植株,为进一步筛选耐贮突变体提供材料基础。 相似文献
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[目的]筛选出理想的药剂种类及浓度,为落叶松鞘蛾种群的调控和科学防治探索新思路。[方法]采用4种不同的无公害药剂对落叶松鞘蛾幼虫进行毒力测定,并利用2种药剂和1种烟剂进行林间防治试验。[结果]25%除虫脲可湿性粉剂2 000倍液、3 000倍液、5 000倍液的校正死亡率平均值分别为89.43%、76.45%、64.91%;5%吡虫啉乳油的500倍液、1 000倍液、2 000倍液的校正死亡率平均值分别是96.32%、84.14%、71.16%;0.5%苦参碱水剂的500倍液、1 000倍液、1 500倍液的校正死亡率平均值分别是92.79%、86.06%、77.41%;5%高氯·甲维盐的2 500倍液、5 000倍液、10 000倍液的校正死亡率平均值分别为80.29%、94.23%、75.96%。[结论]吡虫啉500倍液、苦参碱500倍液和高氯·甲维盐5 000倍液对落叶松鞘蛾的死亡率都达90%以上。除虫脲5 000倍液对落叶松鞘蛾毒杀效果最不显著。林间防治试验结果表明,0.5%苦参碱和5%吡虫啉乳油500倍液地面喷雾防治效果分别达71.18%和67.37%;1.2%苦参碱烟剂对落... 相似文献
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