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少孢节丛孢菌XJ-A1几丁质酶基因AO-190的克隆、表达及其酶活性的测定 总被引:1,自引:0,他引:1
捕食线虫性真菌少孢节丛孢菌在侵染线虫的过程中分泌几丁质酶,为了弄清少孢节丛孢菌几丁质酶基因AO-190的分子特征和功能,对少孢节丛孢菌新疆分离株XJ-A1几丁质酶AO-190进行克隆及分子特征分析,构建原核表达载体p ET32a-AO-190进行表达,并利用镍柱纯化技术纯化重组几丁质酶后,使用几丁质酶ELISA检测试剂盒测定酶活性。结果显示,XJ-A1几丁质酶AO-190基因全长1 574 bp,有4个内含子序列,序列中包含1个1 251 bp的开放阅读框(ORF),编码416个氨基酸,与少孢节丛孢菌标准株(ATCC 24927)的几丁质酶AO-190基因序列的同源性为93. 33%,氨基酸序列的同源性为92. 55%;有信号肽以及1个精氨酸富集区、1个双向核定位信号、1个N-糖基化位点、4个PKC磷酸化位点、6个N-酰基化位点、8个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、1个酰胺化位点、1个低复杂度区,且含有糖苷水解酶18家族几丁质酶保守的底物结合位点SLGG和催化活性位点VDGVDLDLE,属于糖苷水解酶18家族几丁质酶;其二级结构元件有无规则卷曲、α螺旋和β折叠,三级结构为(α/β)8圆桶形结构;系统进化分析表明,AO-190与能产生短柄黏球的Dactylellina haptotyla的几丁质酶(EPS43772. 1)以及能产生收缩环的Drechslerella stenobrocha(EWC46603. 1)几丁质酶亲缘关系最接近,与昆虫和脊椎动物的几丁质酶存在显著的进化距离;经SDS-PAGE和Western Blot分析,原核表达获得的重组蛋白酶分子量约为63 ku,与预期大小一致,且能与小鼠抗少孢节丛孢菌多克隆抗体发生特异性血清学反应;几丁质酶酶联免疫分析(ELISA)检测,经镍柱纯化技术纯化后的重组几丁质酶活性浓度为222 IU/L。 相似文献
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[目的]分析云南省不同产地和不同采收时间对铁皮石斛品质的影响.[方法]通过对云南省3个栽培基地所生产的铁皮石斛进行为期一年的跟踪调查,检测其多糖含量以及醇溶液浸出物含量,分析云南省不同产地生产的铁皮石斛之间品质差异,以及同一产地生产的铁皮石斛品质与采收时期之间的相关性.[结果]同一地点两年生铁皮石斛在全年各个采收期中采收时,其多糖和醇溶液浸出物的含量有所差异,3个地区的多糖含量和醇溶液浸出物含量在全年中都呈现出稳定的、相似的趋势.3个地区大棚产铁皮石斛的多糖含量在春季、冬季出现显著性差异,其醇溶液浸出物含量在春、秋、冬季都有显著性差异.[结论]该研究为铁皮石斛栽培选址的选择以及采收品质的控制提供参考. 相似文献
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人工栽培滑子蘑一般都用阔叶树锯木屑作原料。为了解决发展滑子蘑锯木屑不足的矛盾,我们试用了木屑和大豆秸粉混合料栽培滑子蘑。一、材料和方法 (一)培养料配方配料比例为粉碎大豆秸35%,阔叶树锯木屑45%,麸皮20%。按比例拌和,再喷水拌匀,含水量60%。 (二)栽培方法栽培容器为木板箱(规格60×40×10cm)。每只箱要衬一块100厘米见方的无毒聚乙烯塑料薄膜(用前要经3%来苏儿液浸30分钟)。培养料采取常压灭菌(100℃2小时),灭菌后料的含水量为63%。装箱时料温不低于70℃(接种时料温18~20℃)。每箱装干料12斤,厚7~8厘米。在无 相似文献
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橡实淀粉的湿热处理研究 总被引:2,自引:0,他引:2
通过对湿热处理淀粉粘度的测定,揭示了湿热处理对橡实淀粉改性的影响规律,结果表明:湿热处理的时间、温度和含水率等因素对橡实淀粉的改性的程度达到极显著水平,各因素影响程度的大小依次为:时间、温度、含水率,湿热处理淀粉的改性程度大小随处理时间、温度和含水率增加而加强。 相似文献
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近年来,山西省林业生态建设取得了非常显著的成效。而且,积累了许多宝贵的经验。根据山西省林业建设积累的成功经验和反映出来的问题,结合当前和今后一段时期我国林业建设实际,建议:抓紧编制实施《全国森林抚育经营实施方案(2011—2020年)》;每年在一个省召开一次全国造林绿化现场会;设立右玉林业发展科研专项;调整管理思路,转变管理手段;加大林业生态建设投入力度。 相似文献
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