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根据已发表的分离自麻鸡的新城疫病毒SX-1株F基因序列,采用PCR体外定点突变技术,设计2对引物,引物中含有突变位点.应用重叠PCR延伸法,分3次PCR扩增F基因,从而得到突变后的F基因,命名为F基因,使改造后的F基因编码的氨基酸裂解位点为112GlyArg-Gin-Gly-Arg-Leu117.在EeoR Ⅰ和Hind Ⅲ位点将F基因与转座载体pFastBac Ⅰ连接,获得重组质粒,并进行PCR、酶切鉴定,核苷酸序列测定正确的pFastBac-F'质粒转化到DH10Bac宿主茵,将目的基因定向插入到Bacmid质粒中,经筛选获得的重组Bacmid F'质粒转染Sf-9昆虫细胞,并进行表达检测,表达产物间接免疫荧光试验阳性,经SDS-PAGE、Western-blotting检测显示,获得分子量约63 ku的蛋白特异条带,说明F'重组蛋白表达成功. 相似文献
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为了了解1株大肠杆菌分离株的耐药情况及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)与头孢菌素酶(AmpC)的耐药表型,从山西省某奶牛场因腹泻致死的1头犊牛肝脏中分离到1株优势大肠杆菌临床株,通过K-B纸片扩散法对该分离株进行了药物敏感性试验;并分别运用美国临床实验室标准化委员会(CLSI)推荐的双纸片协同法(DDST)和参照NCCLS2000药选规则而设计的阻抑物基法对该分离株进行了ESBLs与AmpC β-内酰胺酶的表型确认试验;此外,还对该分离株质粒介导的blaTEM基因型进行了PCR检测。药物敏感试验结果显示,该大肠杆菌分离株对青霉素、阿莫西林、氨苄西林等20种抗生素产生耐药,对多黏菌素B、痢特灵和头孢西丁敏感,而对磷霉素、头孢曲松中度敏感;ESBLs与AmpC β-内酰胺酶表型筛选结果显示,该分离株为兼产ESBLs与AmpC β-内酰胺酶的阳性菌株;PCR检测结果显示,该分离株携带有质粒介导的blaTEM基因,检测到的该基因型与国内其他地区普遍流行的blaESBL基因型一致。该分离株为多重耐药性大肠杆菌菌株,且兼产ESBLs、AmpC β-内酰胺酶;多黏菌素B、痢特灵和头孢西丁可作为治疗该场犊牛腹泻的首选药物。 相似文献
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白色青年羊驼皮肤的基因表达分析 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】研究羊驼皮肤功能发生的规律和机理以及发现新的功能基因。【方法】用SMART技术构建白色青年羊驼皮肤cDNA文库,随机挑取13 800个克隆进行规模测序。预处理后,获取高质量的表达序列。用CAP3对高质量序列进行拼接;BLAST对拼接序列进行同源比较,以注释功能;CLUSTER对已知序列进行聚类;根据标准基因词汇体系,并结合人组织基因表达谱分类标准,对具有注释信息的基因聚类进行分类,构建羊驼皮肤的基因表达谱。【结果】cDNA文库库容量达106PFU,从中获得高质量序列7 286条(在GenBank中命名为ASCD)。拼接成5 837条一致性序列,包括446条重叠群和5 391条单一序列。1 732条无相应注释,被认为是新基因。聚类成4 968个单基因簇(Unigene)。该基因表达谱最显著的特点是代表基本转录和翻译系统以及细胞骨架结构的转录本的表达丰度处于最高水平,原胶原I型(Procollagen typeI)等单个基因表达丰度处于较高水平。此外,还发现可能与羊驼毛质量、生长和毛色相关的基因。【结论】首次构建了羊驼皮肤cDNA文库和基因表达谱;获取的大量基因信息反映了青年期白色羊驼皮肤的生理特性和功能;该文库的构建是有效地发现新基因的理想资源。 相似文献
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羊致病性大肠杆菌对常用消毒剂的敏感性试验 总被引:1,自引:0,他引:1
选用目前常用的百毒杀、苯扎溴铵、二氯异氰尿酸钠3种消毒剂,针对主要来自山西省雁门关地区的不同血清型羊致病性大肠杆菌菌株,进行了最小抑菌浓度、最小杀菌浓度以及定量杀菌率的测定试验,结果表明,苯扎溴铵稀释倍数达到1∶1 280时抑菌效果最好;在3种消毒剂"疫源地或发病期畜禽舍消毒"推荐的浓度范围内,百毒杀(1∶640~1 280)定量杀菌率为95.5%~95.8%,苯扎溴铵(1∶1 280~2 560)为97.0%~98.3%,二氯异氰尿酸钠(1∶1 280)为99.3%,说明羊致病性大肠杆菌菌株对二氯异氰尿酸钠消毒剂最敏感,对苯扎溴铵次之,对百毒杀相对较差。二氯异氰尿酸钠的杀菌效果最为显著,百毒杀抑菌、杀菌作用较差。 相似文献
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微生态制剂预防鸡白痢沙门氏菌感染的应用技术研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究利用肠道益生菌竞争排斥原理,结合生产实际建立了临床预防鸡沙门氏菌的四个模型,即"抗生素+微生态制剂"的试验1、2组,单纯抗生素或微生态制剂的试验3、4组,同时设有攻毒对照组和空白对照组。在攻毒条件下,对各组鸡白痢症状的观察、攻毒保护死亡数量统计、称重分析,结果为:3组及攻毒对照组表现典型鸡白痢症状,试验1、2、3、4组攻毒保护率分别96.7%、96%、80%、94%,而攻毒组为76%。试验3组与空白对照组30日龄增重差异极显著,其余各组均表现差异不显著。由此可见:无论雏鸡直接口服微生态制剂或先服用抗生素再使用微生态制剂,这两种方法均可有效地保护雏鸡免遭鸡白痢沙门氏杆菌强毒的攻击,缓解其临床症状,减少雏鸡的死亡,提高育雏成活率。 相似文献