RAPD和ISSR标记对甜瓜种质遗传多样性的研究

利用RAPD和ISSR两种分子标记技术对37份甜瓜(CucumismeloL.)种质进行了遗传多样性研究.在供试材料中筛选到具有多态性的RAPD引物21个,ISSR引物10个(其中ISSR-2与ISSR-4等量混合组成ISSR-10引物对).RAPD引物共扩增出多态性带106条,多态性条带比率(PPB)为58.62%,平均多态信息量(PIC)为0.47;ISSR引物共扩增出多态性带73条,PPB值为65.51%,平均PIC值为0.53.根据两种标记的结果,采用UPGMA聚类分析,将供试材料分为两大类群野生甜瓜和栽培甜瓜;栽培甜瓜又分为厚皮甜瓜和薄皮甜瓜两大亚群,各野生甜瓜种质之间的遗传距离较大,这与其分类地位基本一致.两种分子标记的分析结果呈极显著正相关(r=0.62>r=0.01).研究表明,RAPD和ISSR标记可用于甜瓜种质遗传多样性的研究.     

芋离体快繁体系的优化

试验以芋芽茎尖为材料进行组培快繁研究.在BA,ZT,KT 3种细胞分裂素中,以BA分化不定芽效果最好.其中MS+BA 3.0～4.5 mg/L+NAA 0.2mg/L分化率较高.在进一步的芽增殖培养中,经过优化试验,发现培养芋芽半个月时,以MS+BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L的增殖系数最高,为5.9.另外,芋芽的生根培养基以MS+NAA 0.2mg/L最佳.     

甘蓝S-位点受体激酶（SRK）激酶结构域编码区分子特性及其与类硫氧还蛋白（THL1）相互作用检测

以甘蓝(Brassica oleracea L)E1为材料,采用PCR和RT-PCR技术,扩增S-位点受体激酶(SRK)激酶结构域(SRKE1)基因组DNA和cDNA序列,得到片段长度分别为1711和1 241 bp.序列分析表明,该基因组DNA序列由5个内含子和6个外显子组成,编码407个氨基酸;将sRKE1编码序列克隆到原核表达质粒pET43.1和真核表达质粒pPIC9K中,分别在表达宿主菌大肠杆菌(Eschedchia coli)BL21和毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中进行表达.利用表达的类硫氧还蛋白(THL1)与SRKE1孵育,结果显示SRKE1可与THL1结合并形成稳定的复合体.     

观赏南瓜ISSR反应体系优化

以观赏南瓜为材料,对影响ISSR-PCR扩增的主要影响因子进行了优化,建立了适于观赏南瓜的ISSR反应体系:25μL反应体积中,2.0 mmol/LMg2 、0.25 mmol/LdNTPs、0.5U Taq DNA聚合酶、80ng模板DNA、0.6μmol/L引物;并通过梯度PCR试验确定了引物适宜的退火温度.     

氰烯菌酯胶体金免疫层析方法的建立与验证

氰烯菌酯是我国自主研发的防治小麦赤霉病的新型杀菌剂，国内外尚无类似产品，其残留免疫检测方法亦无报道。本研究通过设计合成半抗原，制备了该农药的鼠源特异性单克隆抗体，通过纳米金标记建立了胶体金免疫层析检测方法。鉴定结果表明：所获得的单克隆抗体类型为IgG1。间接竞争酶联免疫吸附分析(ic-ELISA)结果表明：在38.72～438.08 ng/mL线性范围内，该单克隆抗体对氰烯菌酯的检测灵敏度即20%抑制浓度(IC₂₀)为38.72 ng/mL,50%抑制浓度(IC₅₀)为108.42 ng/mL，与结构类似物杀菌剂嘧菌酯、吡唑醚菌酯、氟醚菌酰胺和啶氧菌酯的交叉反应率(CR)<0.01%，表明该抗体对氰烯菌酯具有较高的特异性。胶体金免疫检测试纸条裸眼观察检出限为50 ng/mL,15 min内可完成检测，与甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂无交叉反应。以添加氰烯菌酯的面粉样本进行方法验证，胶体金免疫层析试纸条测试结果与液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法的检测结果一致，表明研发的胶体金免疫层析方法可实现样品中氰烯菌酯残留的快速定性以及半定量分析。