适于AFLP分析用的桃成熟叶片DNA提取方法

以多个野生桃秋季成熟叶片为材料,采用改进CTAB法对其基因组总DNA的提取进行了研究,并与其相应幼叶DNA的提取效果进行了比较分析。结果表明,从野生桃成熟叶片提取的DNA除产量低于幼叶外,DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均为1.8～2.0,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物EcoRI-TA/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的野生桃成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。     

甜樱桃SFB4与SFB4’基因的鉴别

 本研究以最近发现的李属花粉决定子候选基因“S 单元型特异F-box蛋白基因(SFB ) ”为基础, 根据甜樱桃SFB 4基因设计引物, 从自交不亲和‘雷尼’和‘佳红’以及自交亲和的‘斯坦拉’总DNA中分别扩增出SFB 4和SFB 4’基因的部分序列。经测序结果发现: SFB 4’基因比SFB 4基因缺失了4个碱基TAAA。根据这个缺失差异, 设计了一对引物BFP200和BFP201, 这对引物只能扩增SFB 4’基因,而不能扩增SFB 4基因, 从而利用SFB 基因区分开了甜樱桃自交不亲和的S4和自交亲和的S4’单元型。     

一种从果树成熟叶片提取DNA的方法

针对果树成熟叶片富含多糖、多酚及其它次生代谢物质的特点,以8个果树树种的秋季成熟叶片为材料,采用改进的CTAB法对其基因组总DNA进行了提取,并对得到的DNA进行了电泳检测、含量测定和AFLP分析。结果表明,该方法从8种果树的成熟叶片中均能提取出基因组总DNA,且DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均在1.8～2.0之间,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物组合为EcoRI-TA/MseI-CTT,EcoRI-TT/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的果树成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。     

桃野生种和地方品种种质资源亲缘关系的AFLP分析

利用AFLP技术对94份野生桃种质资源进行了DNA多态性分析,从64对E+2/M+3引物组合中筛选出9对引物用于扩增基因组DNA,共获得清晰可辨的236个标记,其中多态性标记为141个,多态性检出率为59.9%。UPGMA聚类结果显示,在遗传距离约为0.3267时,普通桃、陕甘山桃、光核桃3个种被聚为一类,与这3个种相近的为新疆桃,其次为甘肃桃,最远为山桃(白花山桃、红花山桃)。在遗传距离0.2178处,五月鲜扁干、白黏胡桃和珲春桃3份材料各自聚为一类。在遗传距离约0.1997处,普通桃又可明显分为4个组:组I包括原产于南方和西北地区的地方品种,且大部分南方蟠桃主要聚在此类;组II仅有油桃(甘肃酒泉)一个野生材料;组III包括野生毛桃和大部分原产于北方的地方品种,北方硬肉桃主要聚在这一类;组IV由白碧桃和白花山碧桃2个观赏桃品种组成。     

桃分子连锁图的构建与分析

 以‘大久保’与‘兴津油桃’杂交的F2代109 株群体为试材, 采用AFLP、RAPD、SSR 分子标记进行遗传分析。筛选扩增稳定、多态性丰富的36 对AFL P 引物、3 对SSR 引物、2 对RAPD 引物进行群体分离分析, 获得分离标记136 个, 卡方检验27 个标记偏离孟德尔分离比例。应用Mapmaker 分析软件将符合孟德尔遗传分离比例的标记构建了包含11 个连锁群的连锁图谱, 每个连锁群包含3～21 个标记, 平均为8.73 个标记。该图谱覆盖基因组1061.8 cM , 11 个连锁群的平均长度为96.5 cM , 标记间平均图距为11.0 cM , 与果实毛/ 油桃( G/ g) 、白/ 黄肉( Y/ y) 连锁的RAPD 标记、非酸/ 酸(D/ d) 性状连锁的AFLP标记分别定位在第3 、7 、9 连锁群上。     

与桃果实非酸/酸性状连锁AFLP特异片段的克隆及序列分析

利用AFLP技术从京玉、美味正反交F1代69株群体中筛选到3个特异扩增片段,与桃果实非酸/酸性状紧密连锁。回收特异片段并将其克隆、测序,结果表明特异片段A、B、C均来自于EcoRI与MseI两内切酶酶切片段,大小依次为140、199、408bp,利用序列分析软件推测片段B、C中可能含有与糖水平调控作用相关的因子。上述结果对AFLP标记向SCAR标记的转换具有重要意义。     

野生桃幼叶DNA提取方法的改良研究

以野生桃幼叶为材料,为适应AFLP分析要求,对常规SDS法、CTAB法、SDS-CTAB结合法以及改良CTAB法等4种基因组总DNA的提取方法的效果进行了比较研究。结果表明,常规SDS法难以去除桃幼叶组织中的蛋白质、多糖和酚类等杂质,使所提取的DNA呈黏稠状的浅褐色沉淀,难以溶解;CTAB法和SDS-CTAB结合法提取的桃基因组DNA,虽然蛋白质和酚类等杂质去除较干净,但对多糖类物质的去除能力仍然有限,且提取效果在品种间重复性较差;而改良CTAB法提取DNA完整性较好,杂质少,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化,通过基因组DNA-AFLP指纹图谱分析,完全满足实验要求。     

樱桃冬春季室内硬枝嫁接技术

樱桃树姿秀丽．花早色艳．果实味美．素有“春果第一枝”的美誉。我国自1870年开始引入．迄今已有100多年的历史．其主要分布在山东半岛．辽宁大连．河北秦皇岛。近年来北京．山西江苏等地引进大樱桃．栽培面积不断扩大。苗术是发展大樱桃生产的基础．使用优良砧木嫁接优良樱桃品种可以提高树体的适应性和抗逆性．促进早结果．优质丰产。     

果树自交不亲和花粉S基因研究进展

果树自交不亲和属于配子体自交不亲和,配子体自交不亲和至少由S位点的花柱S基因和花粉S基因2个基因决定,花柱S基因已被确定为S-RNase基因,而花粉S基因研究在近年才取得进展,一个在花粉中特异表达的基因SFB(Shaplotype-specificF-boxprotein)被发现,并且多方面的证据表明该基因是花粉S基因的最佳代表。就花粉S基因的筛选、该基因的结构特点、可能的作用机理等方面的研究进展予以综述。     

樱桃种质资源试管苗保存方法

 采用组织培养方法, 以樱桃7个品种试管苗为试材, 研究了樱桃离体保存方法。结果表明, 在室温光培养条件下, 培养基中添加甘露醇10 g·L^-1 , 试管苗可保存6个月; 在低温暗培养条件下, 试管苗生长明显受到抑制, 保存期可延长到14个月; 低温暗培养结合培养基添加甘露醇10 g·L ^-1 , 能使保存期延长至16个月, 继代后成活率达52%～98%。部分品种可延长至20个月, ‘对樱’和‘Gisela 5’继代后成活率分别为45%和58%。