3种麦类土传花叶病毒的多抗制备及检测应用

采用PEG二次沉淀和蔗糖硫酸铯密度梯度离心,得到提纯的3种麦类土传花叶病毒(小麦黄花叶病毒、大麦黄花叶病毒、中国小麦花叶病毒)。透射电镜观察分别可见线状、直杆状病毒粒子,测定浓度分别达5.44、8.08、4.09 mg/m L。提纯病毒免疫新西兰大白兔制备抗血清,得到的3株抗血清经酶联免疫吸附法测定效价分别达1∶12 800、1∶25 600、1∶6 400。应用样品和多抗稀释的方阵试验,建立3种多抗的双抗夹心酶联免疫吸附法(TAS-ELISA),并对采自江苏省、安徽省、河南省、山东省的麦子病样进行检测,结果显示,阳性检出率较高,说明这3种病毒仍是我国麦子流行的主要病毒。     

聚焦时尚智能新闻采集系统研究

针对网络新闻传播的特性,文章从聚焦爬虫的角度,重点分析了新闻实时搜索方法与技巧,同时也对新闻中的图片和音视频文件提取方法以及文本分类法进行简要论述。并针对网络爬虫易受到网站屏蔽的问题,给出一些解决方法。     

江苏玉米矮花叶病病原鉴定

可以感染玉米引起花叶症状的病毒有玉米矮花叶病毒(MDMV)、甘蔗花叶病毒(SCMV)、约翰逊草花叶病毒(JGMV)和高粱花叶病毒(SrMV)等4种,目前国内主要认为是SCMV.为明确江苏发生的玉米矮花叶病的病原,2011年从姜堰田间采集自然发生的呈现玉米矮花叶病典型症状的玉米病叶,初提纯物电镜观察可见750 nm×13 nm线状病毒粒子.根据已经发布的SCMV设计特异性引物,通过RT-PCR扩增获得预期的CP、HC-Pro、NIb和Vpg基因片段,而用MDMV、JGMV和SrMV特异性引物未扩增到预期目的片段.序列测定和同源性分析表明,扩增到的基因片段序列与SCMV对应基因片段序列的同源性在90％以上,与SCMV亚组中另外3个株系MDMV、SrMV和JGMV相应基因片段序列的同源性在80％以下.由此判断姜堰玉米矮花叶病的病原为SCMV.     

江苏和云南地区水稻条纹叶枯病流行差异分析

水稻条纹病毒由灰飞虱传播,主要危害水稻引起水稻条纹叶枯病,我国江苏和云南是其适宜流行区之一.2002年来水稻条纹叶枯病在江苏等地严重发生且病害逐年加重,与此同时云南水稻条纹叶枯病一直呈低水平存在状态.为明确这种流行差异的原因,进一步为病害的生态学治理提供依据,本试验从植物病毒病害流行生态系统的角度对江苏和云南两地的水稻条纹叶枯病流行特点进行了比较研究.试验结果表明,灰飞虱发生量低、带毒率低、水稻品种抗性水平高和多样性程度高是云南地区水稻条纹叶枯病轻发的主要原因,其中灰飞虱发生量和带毒率上的显著差异是引起江苏和云南水稻条纹叶枯病流行程度迥异的表观原因,水稻品种抗性差异是决定两地病害流行差异的本质原因.     

利用RGA-PCR方法进行水稻抗瘟基因分子标记

用28对RGA引物对LTH近等基因系品种进行PCR扩增，其中11对引物扩增出特异性条带。将扩增到的33个特异性片段回收并进行重扩增，有11个片段产生单一条带。选择2个片段HS-1和HS-19进行探针标记。经Southern杂交发现。探针HS-1在含有Pi—ta^2抗瘟基因品种F-128—1、NO4中有特异杂交信号，表明该片段可能与抗瘟基因Pi—ta^2连锁或是其一部分。对特异性片段HS-1进行克隆、测序，全长为478bp，与Mago等从水稻中克隆的一个抗病基因同源序列RGA29有95％同源性。     

灰飞虱传水稻病毒病综合防控技术应用

为研究和验证诸多防治技术集成的综合应用效果,2011年,开展了水稻病毒病综合防控技术示范应用研究,结果表明,运用机插方式集中育苗、无纺布全程覆盖辅助抗病品种的应用、适期药剂防治传毒昆虫,控制水稻病毒病效果显著。秧田期全程覆盖技术,能彻底隔绝1代灰飞虱对秧苗的传毒危害,切断传毒链,达到有效控制水稻病毒病的目的,结合大田防治2代灰飞虱,对大田期水稻病毒病的防治效果可达到95％以上。     

水稻品种抗黑条矮缩病人工接种鉴定方法

为建立科学有效的水稻品种抗黑条矮缩病人工接种鉴定方法,分别研究了病毒在介体体内的循回时间、接种时间、接种强度、水稻接种苗龄4个因素对鉴定效果的影响。结果显示,病毒在介体体内的循回时间为12~15天或21~24天条件下,鉴定效果优于8~11天和16~17天处理;接种48~72 h条件下,鉴定效果优于12~24 h处理;有效接种强度4~20虫/苗条件下,鉴定效果优于1~3虫/苗处理;水稻接种苗龄0.5~2.5叶龄条件下,鉴定效果优于2.5~3.5叶龄处理。由此构建了水稻抗黑条矮缩病人工接种鉴定方法:循回时间为12~15天、接种时间48~72 h、有效接种强度4~20虫/苗和水稻接种苗龄0.5~2.5叶。在此条件下对不同抗性表现的水稻品种进行鉴定,其鉴定结果与重病区田间鉴定没有显著性差异,表明所建立的人工接种鉴定方法能客观地反映水稻品种对黑条矮缩病的抗性水平。     

番茄黄化曲叶病毒V 2基因原核表达及多克隆抗体制备

 通过PCR的方法,从番茄黄化曲叶病毒江苏分离物DNA中扩增到V2基因,并克隆到pMD18-T载体,序列测定结果显示其与报道的XH2分离物序列完全一致,核苷酸序列全长351 bp,编码115个氨基酸,推测分子量约13 kD。将该V2基因亚克隆到原核表达载体PET32a中获得重组表达载体PET32a-V2,转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG可诱导1个分子量约为32 kDa的融合蛋白（含His标签）表达,经Ni⁺ NTA亲和柱纯化,获得纯化的重组蛋白,免疫家兔制备TYLCV-V2蛋白的多克隆抗体Anti-V2,间接ELISA测定Anti-V2的效价达1∶655 360,Western blot及DIBA分析结果表明Anti-V2可与V2蛋白发生特异血清反应,可为进一步研究V2蛋白的功能提供参考。     

江苏省大豆上一种新粉虱传病毒的分子鉴定及系统进化分析

2019年在对江苏大豆上病毒病进行调查时，发现徐州和淮安大豆田间出现一种表现叶片黄化、花叶症状的病毒病，为明确其伴随病毒种类，对田间采集的70份疑似病样进行分子检测和鉴定，结果在利用香石竹潜隐病毒属(Carlavirus)通用引物检测时发现，70份疑似病样中有15份样品扩增到800 bp左右的目的片段，序列测定后BLAST分析结果显示，其与一种粉虱传病毒——豇豆轻斑驳病毒CpMMV(cowpea mild mottle virus, CpMMV)的同源性最高，暗示了其可能是CpMMV的一个分离物。针对CpMMV编码的CP基因设计特异性引物，检测结果显示15份阳性样品均扩增到目的片段，对获得的CP基因片段进行克隆测序，发现其序列全长867 bp,编码分子量约为32ku的蛋白；序列聚类分析结果显示，其与已报道的CpMMV分离物有较高的同源性，并聚类到同一个大的分支，其中与安徽、海南等地分离物相对近缘，聚在同一个小分支。这些结果表明江苏大豆存在豇豆轻斑驳病毒的侵染危害，生产上需要密切关注。