用PCR鉴定大肠杆菌O157:H7

根据大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７的编码ｅａｅ蛋白的ｅａｅ Ａ基因和大肠杆菌编码Ｈ７抗原的ｆｌｉＣ基因的核苷酸序列,合成了２对窦核苷酸引物,建立了一个检测大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７的ＰＣＲ方法,对１１株已知大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７（ＮＭ：无运动性）株和其他不同属的４２株已知肠道致病菌的检测结果表明,该方法只从大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７（ＮＭ）株的ＤＮＡ中产生预期的扩增产物,而从其他菌株的ＤＮＡ中未扩增出任何ＤＮＡ不     

动物蛋白饲料中动物源性成分的鉴别1.同一PCR鉴别动物蛋白饲料中牛羊成分

为了防止牛海绵状脑病(俗称疯牛病)和羊痒病传入我国,对来自疫区国家的动物源性饲料进行动物种类鉴别非常必要.本研究根据牛羊特异性卫星DNA建立了同一PCR体系同时检测羊、牛源性物质的方法.应用DNA提取液制备模板,不但有效地缩短了试验时间,还大大降低了成本,有利于在生产实际中推广应用.     

大肠杆菌O157 Z4182基因的克隆与表达

根据大肠杆菌0157z4182基因设计1对引物，并在其5'端分别加入NcoI、XhoI酶切位点，用聚合酶链反应（PCR）从本试验用的大肠杆菌O157及1株产志贺毒素大肠杆菌（STEC）08、1株肠道聚集粘附大肠杆菌（EAggEC)和1株产肠毒素性大肠杆菌（ETEC）菌株中也扩增出了803BP的DNA片段。以大肠杆菌0157菌株94H的DNA为模板，用上述引物做PCR，将其产物连接到载体质粒pET28a( )，然后转化到宿主菌大肠杆菌LE392，从该菌中提取重组质粒，再将其转化到表达宿主大肠杆菌BL21（DE3），用PCR，限制性内切酶位点分析及核苷酸序列测定法对克隆的重组质粒进行鉴定，表明Z4182基因定向克隆到了载体质粒Pet28a( )。将转化子培养并经IPTG诱导后，做SDS-PAGE电泳，表明该菌株可以表达Z4182基因。本试验为阐明大肠杆菌O157Z4182基因的分布及探讨该基因产物的功能和致病作用奠定了基础。     

滴灌杂交棉田滴水前化调试验

一、试验设计 试验设4个处理,供试小区长8米,3幅膜,随机排列,重复2次,走道宽50厘米,每小区面积54.72米^2,全试验净面积437.76米^2。     

聚合酶链反应（PCR）鉴定猪肉方法的建立及应用

依据猪小卫星ＤＮＡ序列设计了１对引物,建立了ＰＣＲ鉴定生、熟猪肉的方法。应用本方法特异地扩增出预期的猪３０７ｂｐ的ＤＮＡ片段,其检测敏感度对生猪肉达３８．６ｆｇＤＮＡ,对熟猪肉和高压猪肉为０．３７５ｆｇ全基因组ＤＮＡ。运用该引物仅可扩增生猪ＤＮＡ的单一片段,而对马、牛、羊等１２种动物肉的ＤＮＡ扩增则呈阴性。应用本法对６３份生、熟猪肉进行鉴定,正确率为１００％,对各种样品检测,均可在６ｈ内完成。     

肠道出血性大肠杆菌O157：H7中肠道聚集粘附大肠杆菌耐热肠毒素1基因的检测

应用聚合酶链式反应（Polymerase chaim reaction,PCR）对199株肠道出血性大肠杆菌（enterohemor-rhagic Escherichia coli,EHEC）0157：H7中肠道聚集粘附大肠杆菌耐热肠毒素1（enteroaggregagive Es-cherichia coki heat-stable enteotoxin 1,EAST 1）基因进行了检验。结果，从1％（2／199）菌株中检出了EAST1基因。对其中1株（EHEC0157 96－84）的EAST1基因进行了序列测定。与以往发表的其他致腹泻性大肠杆菌的EAST1基因的序列相比较，EHEC0157 96－84与EAggEC（O42，TL100和160株）、产肠毒素性大肠杆菌（enterotoxigenic E.coli,ETEC）、肠道致病性大肠杆菌（enteropathogenic E.coli,EPEC）、扩散粘附性大肠杆菌（diffusely adherening e.coli,DAEC）的EAST1基因序列相同，但与EAggEC菌株17－2的EAST1基因有1个碱基对不同，从而导致1个氨基酸残 基的变化。本研究结果进一步表明，EAST1或它的变异型基因广泛分仙于致腹泻性大肠杆菌中。     

五重PCR检测大肠杆菌O157∶H7菌体抗原和毒素基因

针对 O1 5 7∶H7大肠杆菌 O抗原抗血清同多种细菌有交叉反应 ,而单一毒素基因并不是 O1 5 7∶ H7所独有这一特点 ,建立了五重和四重 PCR方法 ,同时检测大肠杆菌 O1 5 7∶ H7的 O抗原、H抗原和 4种毒素基因 ,可在较短的时间内检测、鉴定大肠杆菌 O1 5 7∶ H7,并有较高的特异性 ,解决了传统细菌检测方法耗时长、灵敏度低 ,并有交叉反应等问题     

五重PCR检测大肠杆菌O157:H7菌体抗原和毒素基因

针对O157：H7大肠杆菌O抗原抗血清同多种细菌有交叉反应，而单一毒素基因并不是O157：H7所独有这一特点，建立了五重和四重PCRA-法，同时检测大肠杆菌O157：H7的O抗原、H抗原和4种毒素基因，可在较短的时间内检测、鉴定大肠杆菌O157：H7，并有较高的特异性，解决了传统细菌检测方法耗时长、灵敏度低，并有交叉反应等问题。     

用PCR鉴定大肠杆菌O157∶H7

根据大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７的编码ｅａｅ蛋白的ｅａｅＡ基因和大肠杆菌编码Ｈ７抗原的ｆｌｉＣ基因的核甘酸序列,合成了２对寡核苷酸引物,建立了一个检测大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７的ＰＣＲ方法。对１１株已知大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７（ＮＭ;无运动性）株和其他不同属的４２株已知肠道致病菌的检测结果表明,该方法只从大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７（ＮＭ）株的ＤＮＡ中产生预期的扩增产物,而从其他菌株的ＤＮＡ中未扩增出任何ＤＮＡ产物。该方法从基因水平直接确定大肠杆菌的血清型,特异性强,克服了以往血清学方法有非特异性反应的缺陷,为检测和鉴定大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７（ＮＭ）提供了一个新方法。     

女贞子多糖对IPEC-J2细胞活力的影响

为了筛选女贞子多糖对IPEC-J2细胞活力影响的最佳剂量,并对其毒性进行评价,试验首先采用细胞计数法和MTT法绘制IPEC-J2细胞7 d的生长曲线,然后用梯度浓度的女贞子多糖刺激IPEC-J2细胞24 h,用MTT法检测细胞活力。结果表明:细胞生长稳定,生长曲线第4～7天为明显的对数生长期;0.1～10 mg/mL的女贞子多糖对IPEC-J2细胞活力有明显促进作用,其中1 mg/mL的女贞子多糖效果最好(P0.01)。说明女贞子多糖对IPEC-J2细胞活力有促进作用,且安全范围广。