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【目的】前期转录组分析表明苹果树腐烂病菌(Valsa mali)两个多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)基因Vmpg7和Vmpg8在病菌侵染定殖过程中显著上调表达。论文旨在分析Vmpg7和Vmpg8在病菌营养生长、致病力、果胶酶活性、对果胶的利用等方面的作用及基因双敲除对同家族内其他基因表达水平的影响,明确Vmpg7和Vmpg8在病菌致病过程中的生物学功能,为进一步解析苹果树腐烂病菌致病分子机理提供基础。【方法】通过qRT-PCR检测基因在病菌侵染过程中的表达水平及基因双敲除后PG家族内其他PG基因的表达量;利用double-joint PCR构建基因敲除载体并通过PEG介导的原生质体转化技术进行基因敲除,经4对引物PCR检测及Southern blot验证获得基因单敲除和双敲除突变体,并利用gap-repair技术对基因进行回复;利用PDA培养基常规培养法观察突变体营养生长状况;通过离体接种富士苹果叶片及枝条的方法检测基因缺失对病菌致病力的影响;通过3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法检测各突变体胞外果胶酶活性;利用Czapek培养基培养法分析突变体对果胶的利用情况。【结果】qRT-PCR分析表明,Vmpg7和Vmpg8在病菌侵染3 d后分别上调表达27.73和8.19倍。通过基因敲除技术,分别获得3个Vmpg7基因单敲除突变体、1个Vmpg8基因单敲除突变体和3个Vmpg7/Vmpg8基因双敲除突变体,并获得了Vmpg7和Vmpg8单敲除突变体的回复突变体。将突变体接种到PDA培养基上,菌落形态和生长速率均没有发生变化;接种到苹果叶片和枝条上,Vmpg7单敲除突变体及Vmpg7/Vmpg8双敲除突变体在叶片和枝条上的致病力显著降低,而Vmpg8单敲除突变体在叶片上的致病力显著降低;进一步对果胶酶活性及对果胶的利用分析,发现Vmpg8单敲除突变体及Vmpg7/Vmpg8双敲除突变体胞外果胶酶活性均显著降低,且所有突变体在果胶培养基上生长均明显减慢。此外,基因回复后突变体的致病力、果胶酶活性及在果胶上的生长速率均回复到野生型菌株03-8水平。重要的是,Vmpg7/Vmpg8双敲除后影响了PG家族中其他PG基因的表达水平,3个基因显著上调表达。【结论】多聚半乳糖醛酸酶基因Vmpg7和Vmpg8可能与同家族内其他基因协同作用,通过调节果胶酶活性参与苹果树腐烂病菌致病过程。 相似文献
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25%阿米西达水悬浮剂防治葡萄霜霉病试验 总被引:8,自引:1,他引:8
阿米西达(Amistar)是近年商品化的农用杀菌剂新品种,该药为甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂,有效成分嘧菌酯,是一种广谱性杀菌剂,源于热带雨林一种食用蘑菇产生的天然抗菌物质Strobilurin,适宜在无公害农产品生产中应用.我们曾于2001年用该药进行过防治葡萄霜霉病试验,看出阿米西达用于对葡萄霜霉病的防治不仅有保护作用,而且有较好的治疗作用.为了进一步明确该药对葡萄霜霉病的防治效果,我们于2004年和2005年又对该药进行了田间药效试验,并以生产上常用药剂三乙膦酸铝和代森锰锌为对照药剂进行比较,以明确阿米西达防治葡萄霜霉病的药效. 相似文献
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生长期喷施氨基酸硒叶面肥对苹果树腐烂病的控制作用研究 总被引:1,自引:0,他引:1
在苹果树生长期连续多年喷施氨基酸硒叶面肥的基础上,通过田间调查与室内离体枝条接种,调查氨基酸硒叶面肥对苹果树腐烂病的控制作用。结果显示,生长期喷施氨基酸硒叶面肥可明显提高苹果树枝条对苹果树腐烂病的抗扩展能力,休眠期和生长期离体枝条测定病斑长度分别为15.7、9.7 mm,显著低于对照;喷施氨基酸硒叶面肥新病增长率分别为92.79%、100.98%,显著低于对照;田间平均防效分别为11.52%、27.23%,对控制苹果树腐烂病的发生有一定的作用。 相似文献
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