致病性嗜水气单胞菌耐喹诺酮类药物菌株的分离鉴定

对吉林省内12个水域采集和送检的66尾病鱼进行了细菌分离鉴定，共检出46株嗜水气单胞菌疑似菌，通过生化试验结合PCR扩增气溶素基因Aer，确定其中22株为致病性嗜水气单胞菌。进一步采用纸片扩散法和双倍稀释法测定嗜水气单胞菌分离株对多种抗生素的耐药性，其中有4株对喹诺酮类药物耐药，并且为交叉耐药，耐药菌检出率为18．2％，纸片扩散法检测其对喹诺酮类药物的抑菌圈均小于19mm。将病料中分离的8株嗜水气单胞菌负染后电镜观察，耐药菌表面有许多大小不同的球形结构，而敏感菌表面则为细丝状菌毛结构。     

提高红提葡萄效益五措施

红提葡萄属中晚熟品种,抗寒性、抗病性良好,生长势偏旺,丰产、粒大、耐贮运、品质优良,极有发展前途。     

牛传染性鼻气管炎病毒截短gB基因原核表达与间接ELISA诊断方法建立

用DNAstar-Protean分析牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白的亲水性、抗原性和表面展示概率,据IBRVgB全基因序列设计引物,PCR扩增编码385-550位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆,酶切鉴定并测序鉴定后,定向连接到pET-28b载体上,转化表达菌DE3并诱导表达。经SDS-PAGE分析,获得大小约为21.4 ku的目的蛋白,与预测值相符。纯化后的蛋白浓度约为2.0 mg/mL,纯度为95.27%。间接ELISA及Western blotting证明,表达的目的蛋白具有抗原性。以该蛋白作为诊断抗原建立的间接ELISA诊断方法,确定的抗原包被量为50μg/mL,血清的最佳稀释倍数为50。与进口IBRV全毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性为92.3%、敏感性为93.8%、符合率为93.3%;试验结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性。     

旋毛虫T3223-6 cDNA的表达及鉴定

利用PCR技术将T3223-6 cDNA扩增克隆到原核表达载体pET-28a,将重组质粒转入克隆菌Nova-blue,提取质粒进行酶切和测序鉴定后转入表达菌BL21star(DE3).用1 mM IPTG诱导培养重组表达菌,对菌体裂解物进行SDS-PAGE分析,检测重组蛋白的表达情况.用旋毛虫感染猪血清和正常血清,通过western blotting检测重组蛋白的反应原性.结果表明:经IPTG诱导后重组转化菌的裂解产物出现44 kD左右的表达带,大小与理论值相符;western blotting检测结果显示重组蛋白可以被旋毛虫感染猪血清识别,具有反应原性.     

维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA的克隆及原核表达

本试验旨在利用大肠杆菌BL21（DE3）表达维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA,通过免疫印迹反应初步鉴定重组蛋白的抗原性。根据GenBank公布的序列设计1对引物,经PCR扩增获得flaA基因的完整开放阅读框序列,克隆至原核表达载体pET-30a,转入大肠杆菌BL21（DE3）进行诱导、表达和纯化。SDS-PAGE结果显示重组目的蛋白在大肠杆菌成功表达,约在38 ku处可见清晰的表达产物,诱导产物大小与理论值相符。经Western blotting检测,结果显示表达的重组蛋白可与特异性血清抗体和His-tag抗体发生免疫反应。因此,本试验成功表达了维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA,为进一步研究其生物学功能及免疫佐剂作用奠定了基础。     

旋毛虫肌幼虫p53cDNA的克隆及鉴定

根据GenBank中旋毛虫53000抗原基因的序列设计引物，用PCR技术直接从旋毛虫肌幼虫cDNA文库中扩增靶基因p53cDNA，将其克隆到pMD-18T载体，转化至大肠埃希氏菌NovaBlue后测序分析，结果表明，克隆到1176bp的p53cDNA，共编码391个氨基酸。序列分析表明，p53cDNA序列与GenBank中的旋毛虫p53基因序列相比共有12个核苷酸发生改变，二者的同源性为98％，所编码蛋白质氨基酸序列的同源性为98％。将其克隆到原核表达载体pET28a并转化至表达菌BL21star（DE3），经IPTG诱导表达后获得约48000的重组蛋白。Western blotting检测证实，p53重组蛋白可以被旋毛虫感染猪血清识别，具有很好的抗原性。     

盐胁迫对苜蓿营养品质及附着微生物群落的影响

本试验旨在研究盐胁迫对苜蓿营养品质及附着微生物群落的影响。试验处理包括无盐胁迫(盐含量<1‰,作为对照)、轻度盐胁迫(盐含量1‰～2‰)、中度盐胁迫(盐含量2‰～3‰)和重度盐胁迫(盐含量3‰～4‰)。每个盐胁迫试验处理设置3个小区,每个小区面积为30 m²(5 m×6 m)。结果表明：中度盐胁迫下苜蓿酸性洗涤纤维和中性洗涤纤维含量显著低于其他处理(P<0.05)。中度盐胁迫下苜蓿谷氨酸、脯氨酸、可溶性蛋白质、粗蛋白质和可溶性碳水化合物含量与其他处理相比显著增加(P<0.05)。所有处理的Shannon指数和Chao1指数均无显著差异(P>0.05)。主坐标分析(PCoA)显示盐胁迫未完全改变苜蓿表面附着微生物群落的结构。所有处理下苜蓿门水平附着核心菌群为变形菌门(84.48%～92.91%)、放线菌门(4.30%～6.47%)、拟杆菌门(0.39%～10.59%)和厚壁菌门(0.61%～3.02%),属水平附着核心菌群为泛菌属(47.17%～56.11%)、假单胞菌属(10.58%～19.88%)、鞘脂单胞菌属(5.69%～9.32%)、...     

鲤吉陶单极虫免疫原性的研究

以鲤吉陶单极虫孢子的可溶性抗原 ,采用 B淋巴细胞杂交瘤融合技术制备了 4A8、6 B8、7B93株杂交瘤细胞 ,并用该抗原免疫新西兰白兔制备了高免血清。通过对虫体进行抗原检测、定位和 Western- blot试验 ,结果发现 :4A8、6 B8、7B9和多抗经间接 EL ISA可检出抗原的最低质量浓度分别为 0 .14、0 .2 0、0 .32和 0 .86 mg/ L;IFA定位显示 ,单、多抗检出的抗原都定位于虫壁 ,其中 4A8的抗原主要位于虫体后部 (胚核附近 ) ,6 B8和 7B9的抗原主要位于虫体前部 (极囊附近 )和极丝 ;Western- blot试验表明 ,4A8结合的抗原相对分子质量为 72 0 0 0 ,多抗结合的抗原相对分子质量分别为 5 80 0 0、70 0 0 0、880 0 0 ,3株单抗和多抗均为抗 T.kitauei的抗体 ,4A8具有明显的种、期特异性 ;自然感染该虫的鲤鱼血清中查不到循环抗体。     

肝脏术中微波止血67例临床分析

在肝脏外科中，术中止血是切肝的关键问题。本院１９９０年１０月～１９９７年８月，使用ＧＸ－Ｉ型多功能微波治疗机，做肝脏植入式微波固化止血共６７例，其止血效果理想、可靠，现报道如下。１对象与方法１．１病例本组６７例中男性４４例，女性２３例。年龄２６岁～６...