托佩克猪SLA-2与β2m复合体的构建

以托佩克猪重链基因SLA-2和轻链基因β2m为研究对象,体外通过剪接重叠延伸PCR(splicing overlap extension PCR,SOE-PCR)技术重构复合体,并将复合体基因链克隆入p2X表达质粒,导入受体茵TB1并进行表达.结果显示,体外重构的托佩克猪SLA-2与β2m复合体基因以融合蛋白MBP-S...     

抗菌药物对LPS诱导鸡肝细胞损伤的影响及复方甘草酸单胺的修复效应

旨在探索LPS诱导鸡肝细胞损伤过程中抗菌药物的影响及复方甘草酸单胺(CAG)的修复作用。选用半原位灌流法分离鸡肝细胞,原代培养48h,筛选LPS最佳致肝细胞损伤剂量;固定其最佳致损半量,并添加不同质量浓度的恩诺沙星、氟苯尼考、阿莫西林,观察致损效果;LPS(30μg·mL-1)+恩诺沙星(80μg·mL-1)致损24h,给予不同浓度CAG,检测细胞存活率及ALT、AST、SOD、GSH、MDA活性,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果表明,LPS≤50μg·mL-1,肝细胞损伤不明显,LPS≥60μg·mL-1,肝细胞存活率极显著降低(P0.01),ALT、AST活性极显著升高(P0.01)。LPS(30μg·mL-1)各组随恩诺沙星、氟苯尼考、阿莫西林添加量增加,肝细胞损伤程度相应加大,LPS(30μg·mL-1)+恩诺沙星(80μg·mL-1)、LPS(30μg·mL-1)+氟苯尼考(40μg·mL-1)、LPS(30μg·mL-1)+阿莫西林(60μg·mL-1)可达肝细胞损伤标准。CAG剂量依赖性(25、50、100、200、400μg·mL-1)抑制LPS(30μg·mL-1)+恩诺沙星(80μg·mL-1)引起的ALT、AST、MDA活性和肝细胞早期凋亡比率的升高,提高SOD、GSH及肝细胞存活率。结果提示,LPS可致肝细胞损伤;抗菌药物使LPS更易诱发肝损伤;CAG通过抗氧化,并抑制细胞凋亡对鸡肝细胞发挥保护作用。     

托佩克猪SLA-2基因克隆与表达

为提高托佩克猪SLA-2-TPK基因胞外区在pET-21a的表达量,对其5′端进行密码子优化,并设计表达引物,PCR扩增SLA-2-TPK胞外区,然后克隆入pMD○R19-T Simple Vector,经酶切鉴定后连接至pET-21a载体,转化BL21(Rosseta)进行诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白。PCR结果显示,SLA-2-TPKe大小约为850bp,并成功克隆入pMD○R19-T Simple Vector,双酶切后大小为834bp。酶切后的SLA-2-TPKe成功与pET-21a链接,重组菌经诱导后目的蛋白大小为30.9ku,与密码子优化前重组菌相比,目的蛋白相对表达含量提高约40%。研究证明,密码子优化可明显提高蛋白的表达量,为进行其他蛋白表达研究提供了参考。     

前处理对烟叶中糖及有机酸含量的影响

为了研究不同前处理对烟叶中糖及有机酸含量的影响,比较了液氮研磨烟叶、杀青烟叶、初烤烟叶及鲜烟叶4种样品中糖和有机酸的含量。结果显示,初烤烟和杀青烟样分别与其它处理样品中糖类物质的含量差异达到显著水平,液氮研磨样品与鲜样的糖类物质含量差异不显著;4种处理样品中有机酸含量的差异较大。     

犬细小病毒VP2基因的克隆表达与免疫印迹分析

根据基因库已发表犬细小病毒序列设计合成了VP2基因的1对特异引物,以细小病毒感染的犬粪样品中提取的总DNA为模板,进行PCR扩增。把扩增产物克隆至pMD18-T载体进行测序、鉴定。将克隆的VP2基因片段克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,再将构建成功的原核表达质粒载体pGEX-4T-2-VP2转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,进行鉴定、测序、表达。结果表明,克隆的VP2基因片段全长1 755 bp,与13个VP2基因序列的同源性为98.4%～99.8%。系统进化树分析表明,所克隆的VP2 CSN830611序列同日本株(AB054222)、意大利株(AF306445)的进化途径一致。Western-blotting分析显示,表达产物为90 kD的融合蛋白,可被犬细小病毒阳性血清所识别,具有良好的反应原性。     

犬瘟热病毒N蛋白基因的克隆、原核表达及其表达产物抗原性鉴定

参考GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列,用Oligo6．0软件设计一对特异性引物,从患犬瘟热的犬全血样品中提取总RNA,经RT—PCR扩增得到1572bp的基因片段,将其插入pMD18-T克隆载体中构建了pMD18-CDVN重组质粒,将其转入到大肠杆菌DH5a中,进行鉴定、测序。将目的基因与原核表达载体pGEX-4T-2连接构建了pGEX-4T-2-CDVN重组质粒,转化到大肠杆菌BL21（DE3）中,进行鉴定、测序、IPTG诱导表达。序列分析表明克隆的CDVN蛋白基因从起始密码子ATG开始到终止密码子TAA结束全长为1572个核苷酸,与GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列相比同源率达到93．9％～99．1％。Western-blotting分析显示表达产物为84kDa的融合蛋白,可被犬瘟热抗血清所识别,具有良好的抗原性。     

唱响学习型党组织建设“四重奏”

在宁波北仑供电局,有这样一群老师,他们或是外聘知名学者,或是普通党员代表;有这样一个课堂,或是定期集中学习,或是内网平台共享;有这样一种课本,或是网络视频教育,或是专家"现身说法"。     

不同处理对北方茶树扦插成活率的研究

通过对北方茶树扦插苗扦插时间、扦插基质、激素处理的研究发现,在北方早秋扦插成活率达80.78%,高于晚秋季6个百分点;心土扦插圃比沙质圃的成活率高20%,心土扦插处理的茶苗光合速率、细胞间隙CO2浓度高于沙质圃扦插处理,激素处理过的茶树扦插苗效果明显.     

卖产品不如卖品牌--访山东省顶顺饲料有限公司总经理梁培玺

随着畜牧业在大农业中的比重越来越大和各种质量体系认证的进一步完善,山东省临沂市费县畜牧局和饲料监察所紧紧抓住改革商机,重点扶持山东顶顺饲料有限公司,带动地方畜牧经济的快速发展.     

复方甘草酸单铵可溶性粉对恩诺沙星联合LPS致鸡肝损伤保护机制研究

104羽海蓝蛋鸡随机分为空白组(Ⅰ)、模型组(Ⅱ)、复方甘草酸单铵可溶性粉(CAG)预防组(Ⅲ)、CAG治疗高剂量组(Ⅳ)和CAG治疗低剂量组(Ⅴ),除Ⅰ组外,各组连续灌服恩诺沙星100 mg.kg-1,1次.d-1,第3天灌药同时腹腔注射脂多糖粗提液(LPS)4 mL.kg-1以建模。Ⅲ组在灌服恩诺沙星前3 d混合饮用CAG 40 mg.L-1至建模止;Ⅳ、Ⅴ组腹腔注射LPS同时分别灌服22.5和7.5 mg.kg-1CAG,2次.d-1,重复3 d。各组均在腹腔注射LPS后分别于6、24和48 h采血,检测血清生化指标,观察肝组织病理学变化。试验结果如下:Ⅱ组鸡血清ALT、AST、γ-GT、TBIL、MDA和NO水平在6、24和48 h均显著高于Ⅰ组,而TP、ALB、SOD和GSH均显著低于Ⅰ组。与Ⅱ组相比,Ⅲ组各指标多在6和24 h差异显著,只MDA、ALB和GSH持续至48 h仍显著,Ⅳ组各指标均在24和48 h差异显著,Ⅴ组各指标差异均不显著。仅Ⅳ组DBIL浓度在24和48 h较Ⅰ组显著升高,其余组无显著差异;Ⅳ组较其他组鸡肝细胞病变改善最大。结论:在自由基损伤介导肝损伤过程中,CAG有一定保护作用,效果受给药时机和剂量影响。