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抗菌药物对LPS诱导鸡肝细胞损伤的影响及复方甘草酸单胺的修复效应 总被引:1,自引:0,他引:1
旨在探索LPS诱导鸡肝细胞损伤过程中抗菌药物的影响及复方甘草酸单胺(CAG)的修复作用。选用半原位灌流法分离鸡肝细胞,原代培养48h,筛选LPS最佳致肝细胞损伤剂量;固定其最佳致损半量,并添加不同质量浓度的恩诺沙星、氟苯尼考、阿莫西林,观察致损效果;LPS(30μg·mL-1)+恩诺沙星(80μg·mL-1)致损24h,给予不同浓度CAG,检测细胞存活率及ALT、AST、SOD、GSH、MDA活性,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果表明,LPS≤50μg·mL-1,肝细胞损伤不明显,LPS≥60μg·mL-1,肝细胞存活率极显著降低(P0.01),ALT、AST活性极显著升高(P0.01)。LPS(30μg·mL-1)各组随恩诺沙星、氟苯尼考、阿莫西林添加量增加,肝细胞损伤程度相应加大,LPS(30μg·mL-1)+恩诺沙星(80μg·mL-1)、LPS(30μg·mL-1)+氟苯尼考(40μg·mL-1)、LPS(30μg·mL-1)+阿莫西林(60μg·mL-1)可达肝细胞损伤标准。CAG剂量依赖性(25、50、100、200、400μg·mL-1)抑制LPS(30μg·mL-1)+恩诺沙星(80μg·mL-1)引起的ALT、AST、MDA活性和肝细胞早期凋亡比率的升高,提高SOD、GSH及肝细胞存活率。结果提示,LPS可致肝细胞损伤;抗菌药物使LPS更易诱发肝损伤;CAG通过抗氧化,并抑制细胞凋亡对鸡肝细胞发挥保护作用。 相似文献
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为提高托佩克猪SLA-2-TPK基因胞外区在pET-21a的表达量,对其5′端进行密码子优化,并设计表达引物,PCR扩增SLA-2-TPK胞外区,然后克隆入pMD○R19-T Simple Vector,经酶切鉴定后连接至pET-21a载体,转化BL21(Rosseta)进行诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白。PCR结果显示,SLA-2-TPKe大小约为850bp,并成功克隆入pMD○R19-T Simple Vector,双酶切后大小为834bp。酶切后的SLA-2-TPKe成功与pET-21a链接,重组菌经诱导后目的蛋白大小为30.9ku,与密码子优化前重组菌相比,目的蛋白相对表达含量提高约40%。研究证明,密码子优化可明显提高蛋白的表达量,为进行其他蛋白表达研究提供了参考。 相似文献
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根据基因库已发表犬细小病毒序列设计合成了VP2基因的1对特异引物,以细小病毒感染的犬粪样品中提取的总DNA为模板,进行PCR扩增。把扩增产物克隆至pMD18-T载体进行测序、鉴定。将克隆的VP2基因片段克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,再将构建成功的原核表达质粒载体pGEX-4T-2-VP2转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,进行鉴定、测序、表达。结果表明,克隆的VP2基因片段全长1 755 bp,与13个VP2基因序列的同源性为98.4%~99.8%。系统进化树分析表明,所克隆的VP2 CSN830611序列同日本株(AB054222)、意大利株(AF306445)的进化途径一致。Western-blotting分析显示,表达产物为90 kD的融合蛋白,可被犬细小病毒阳性血清所识别,具有良好的反应原性。 相似文献
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犬瘟热病毒N蛋白基因的克隆、原核表达及其表达产物抗原性鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
参考GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列,用Oligo6.0软件设计一对特异性引物,从患犬瘟热的犬全血样品中提取总RNA,经RT—PCR扩增得到1572bp的基因片段,将其插入pMD18-T克隆载体中构建了pMD18-CDVN重组质粒,将其转入到大肠杆菌DH5a中,进行鉴定、测序。将目的基因与原核表达载体pGEX-4T-2连接构建了pGEX-4T-2-CDVN重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,进行鉴定、测序、IPTG诱导表达。序列分析表明克隆的CDVN蛋白基因从起始密码子ATG开始到终止密码子TAA结束全长为1572个核苷酸,与GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列相比同源率达到93.9%~99.1%。Western-blotting分析显示表达产物为84kDa的融合蛋白,可被犬瘟热抗血清所识别,具有良好的抗原性。 相似文献
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在宁波北仑供电局,有这样一群老师,他们或是外聘知名学者,或是普通党员代表;有这样一个课堂,或是定期集中学习,或是内网平台共享;有这样一种课本,或是网络视频教育,或是专家"现身说法"。 相似文献
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不同处理对北方茶树扦插成活率的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
通过对北方茶树扦插苗扦插时间、扦插基质、激素处理的研究发现,在北方早秋扦插成活率达80.78%,高于晚秋季6个百分点;心土扦插圃比沙质圃的成活率高20%,心土扦插处理的茶苗光合速率、细胞间隙CO2浓度高于沙质圃扦插处理,激素处理过的茶树扦插苗效果明显. 相似文献
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104羽海蓝蛋鸡随机分为空白组(Ⅰ)、模型组(Ⅱ)、复方甘草酸单铵可溶性粉(CAG)预防组(Ⅲ)、CAG治疗高剂量组(Ⅳ)和CAG治疗低剂量组(Ⅴ),除Ⅰ组外,各组连续灌服恩诺沙星100 mg.kg-1,1次.d-1,第3天灌药同时腹腔注射脂多糖粗提液(LPS)4 mL.kg-1以建模。Ⅲ组在灌服恩诺沙星前3 d混合饮用CAG 40 mg.L-1至建模止;Ⅳ、Ⅴ组腹腔注射LPS同时分别灌服22.5和7.5 mg.kg-1CAG,2次.d-1,重复3 d。各组均在腹腔注射LPS后分别于6、24和48 h采血,检测血清生化指标,观察肝组织病理学变化。试验结果如下:Ⅱ组鸡血清ALT、AST、γ-GT、TBIL、MDA和NO水平在6、24和48 h均显著高于Ⅰ组,而TP、ALB、SOD和GSH均显著低于Ⅰ组。与Ⅱ组相比,Ⅲ组各指标多在6和24 h差异显著,只MDA、ALB和GSH持续至48 h仍显著,Ⅳ组各指标均在24和48 h差异显著,Ⅴ组各指标差异均不显著。仅Ⅳ组DBIL浓度在24和48 h较Ⅰ组显著升高,其余组无显著差异;Ⅳ组较其他组鸡肝细胞病变改善最大。结论:在自由基损伤介导肝损伤过程中,CAG有一定保护作用,效果受给药时机和剂量影响。 相似文献