兽药GMP实施的几点体会

兽药GMP作为一个系统工程,涉及到人员、厂房、设备、卫生等多要素,而我国兽药GMP与先进国家或与国内医药GMP相比,还有一定的差距,企业硬件改造任务十艰巨,软件建设任务尤为繁重。国内兽药企业实施兽药GMP追在眉睫,这是关系企业生死存亡的头等大事。那么如何高效、快捷、全面地做好这方面的工作,我们在实施兽药GMP过程中有以以下几点体会。     

PK-15细胞的ISG15基因敲除促进PRV的复制

本试验旨在研究干扰素刺激基因15（interferon-stimulated gene 15,ISG15）敲除对猪伪狂犬病病毒（PRV）复制的影响。通过CRISPR/Cas9技术构建猪ISG15基因敲除猪肾上皮（PK-15）细胞系,利用CCK-8试剂盒检测PK-15敲除ISG15基因对细胞活力的影响,采用间接免疫荧光技术检测PK-15以及PK15-ISG15^-/-细胞感染PRV的增殖差异,通过RT-qPCR检测PRV-EP0、PRV-gE、PRV-VP16和IFN-β的转录水平,Western blot检测PRV-gE和ISG15的蛋白表达水平,以及通过病毒噬斑检测对子代病毒感染力的影响。结果表明,sgRNA1和sgRNA2均成功敲除ISG15基因;CCK-8试剂盒检测细胞活力结果表明,敲除ISG15基因对PK-15细胞活力无影响;间接免疫荧光检测结果表明,PRV感染后,PK15-ISG15^-/-细胞中的荧光强度明显高于PK-15细胞;RT-qPCR和Western blot结果表明,敲除ISG15可以促进PRV的转录和蛋白表达;病毒噬斑试验进一步显示,敲除ISG15可以促进PRV的复制。另外,RT-qPCR结果显示,敲除ISG15可以抑制PRV感染引起的IFN-β转录上调。本研究成功构建了PK15-ISG15^-/-细胞系,并通过PRV感染试验证实ISG15基因可以抑制PRV在PK-15细胞中的增殖,并推测这种抑制作用可能与IFN通路有关。     

基于PCA-Attention-LSTM网络的土壤氮含量监测

土壤作为农作物生长的主要营养来源,氮是植物生长的重要元素,有效评价土壤氮素含量可以促进配方施肥的发展。提出主成分分析、注意力机制和长短时记忆神经网络相结合的模型(PCA-Attention-LSTM)来监测土壤的氮素含量。采用PCA(主成分分析)对数据进行处理,提取影响土壤氮含量的关键影响因子,降低模型向量输入的维数,利用注意机制突出预测中的关键输入特征。在Keras深度学习框架的基础上搭建PCA-Attention-LSTM的网络模型,实现对未来2 h土壤氮含量的精监测。最后,以黑龙江省依安甜菜养植基地的数据对土壤氮含量进行训练和验证。结果表明,与RNN等其它网络模型相比,该模型的效果更好,基于PCA-Attenlion-LSTM网络模型的平均绝对误差,均方根误差和平均绝对百分误差分别为0.119、0.020、0.156。该模型预测精度高,泛化能力强,可以应用于土壤氮含量的监测。     

猪细小病毒SY-99株非结构蛋白NS1基因的克隆及序列分析

猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV)SY-99株由本室分离，提取SY－99株的基因组DNA，利用PCR扩增出全长NS1基因，将该基因克隆到 核表达载体pET28a中并测序。结果表明，NS1基因全长1989bp，编码662个氨基酸，氨基酸序列中含有PP 制过程中发挥重要作用的保守基序GKRN，并有3个潜在的糖基化位点，分别位于356－359、446－449、513－516位氨基酸处，SY－99株NS1基因与其它PPV毒株NADL2－1、NADL2－2、Kresse株核苷酸同源性分别为98％、99％、99％，氨基酸同源性分别为97％、99％、995。SN1基因的克隆为研究NS1在PPV的复制中所发挥的功能及利用人工表达的NS1来制备诊断抗原提供了可能。     

一株降解苯酚的翅碱蓬内生菌降解条件优化

苯酚是重要的有机合成原料,但具有毒性,对环境和生物体具有较强的毒害作用.用生物法降解苯酚具有成本低、效率高、二次污染少等优点.为提高微生物降解苯酚的效率,对从黄河三角洲盐碱地生翅碱蓬中分离出的一株能够有效降解苯酚的菌株进行降解条件优化试验,得到该菌株的最佳培养时间为36h、最适pH为7、苯酚降解最适初始浓度为500mg/L.     

推广农田节水技术实现粮食增产农民增收推广农田节水技术实现粮食增产农民增收

近年来,干旱对农业生产的影响越来越明显,如2008年10月下旬至2009年2月上旬、2010年10上旬至2011年2月下旬沈丘县基本无有效降雨,造成全县麦田普遍干旱,对小麦正常生长极为不利,抗旱浇麦成为全县干部群众首要任务.由于抗旱浇麦的实施,造成部分农户吃水困难.2013年秋季,高温干旱造成玉米授粉不良,缺行缺粒严重,未浇水地块大幅度减产.为应对干旱灾害,沈丘县农技人员在工作实践中,总结农田节水技术并加以推广,年推广各种农田节水技术模式20万hm2次以上.     

Ca(NO3)2胁迫下番茄砧木品种与对照品种的生长发育及抗逆生理生化指标比较

采用营养液栽培的方法,对Ca(NO3)2胁迫下番茄砧木品种影武者和对照栽培品种宝大903的生长、叶绿素含量、叶片渗透调节物质含量、保护酶活性和O2.—生成速率等指标进行了比较。结果表明,供试番茄砧木品种的生长量、叶绿素含量、游离脯氨酸和可溶性蛋白质含量、保护酶活性等均显著高于对照品种,而O2—.生成速率和膜脂过氧化产物MDA含量则显著低于对照品种。Ca(NO3)2胁迫显著降低番茄叶片叶绿素含量,增加O2—.生成速率和MDA的含量,但砧木品种生长受Ca(NO3)2胁迫的伤害显著小于对照品种,盐胁迫下砧木苗较高的抗氧化酶活性及氧化损伤较小与其较强的耐盐性有关。     

苹果病虫害防治技术

一、时间安排(一)3月上中旬,结合果树整形修剪,摘除天幕毛虫、黄刺蛾越冬茧,解除越冬防寒时树干的包扎物,消灭越冬病虫源。(二)4月中下旬发芽前,喷布波美5度石硫合剂,防治苹果腐烂病、梨木虱等;也可使用“佰明-98”杀菌剂防治苹果腐烂病;喷布敌杀死、功夫、桃小灵等杀虫剂,防治梨大食心虫等害虫。     

中西医结合防治奶牛百叶干

百叶干,又叫瓣胃阻塞或第三胃积食,是奶牛一种严重的前胃运动机能障碍的疾病,是兽医临床常见的多发病之一.虽为慢性、进行性疾病,但预后多为不良,严重病例常转归于死亡,给养殖户带来较大的经济损失,也在某种程度上制约了奶牛业的健康发展.     

联合整地机常见故障和处理方法

近些年,随着我国农业耕作机械的大力发展、国家对农村政策的倾斜,农机补贴深入到了百姓生活中,各种农用机械如联合整地机等逐渐走进了农民的家中.这种大型农用机械的到来,不但减轻了农民的工作负担,增加了收入,还有利的提高农民生活水平,更加科学、有效的利用土地资源,保护生态环境,强有力的推动了生态农业的发展.