槟榔基因组DNA的高效提取方法

以槟榔叶片为植物材料,采用改良的SDS-CTAB方法提取其基因组DNA。结果表明,以水饱和酚代替Tris饱和酚对样品进行抽提的SDS-CTAB法可以获得纯度高(OD260/OD280在1.7~1.9、OD260/OD230大于2)、一级结构完整、分子量大于23 kb的DNA,产率在50~120μg/g。该法所提DNA成功用于后续的分子生物学研究,并在花生、香蕉等植物上得到应用。     

植物基因工程与抗病育种

概述基因工程的创立发展过程和转基因植物的作用,论述抗病育种的基本原理,并就目前基因工程在抗病育种中应用的现状及存在的问题进行分析讨论。     

西瓜遗传转化的研究进展与展望

本文从外植体的选择、高效不定芽的诱导、伸长以及生根等方面综述了西瓜子叶农杆菌介导法的遗传转化再生体系的建立;介绍了GUS、NPTⅡ等各种标记基因,WMV-1、WMV-2、ZYMV、CMV等抗病基因和抗枯萎病南瓜总DNA、抗枯萎病瓠瓜总DNA、银杏总DNA和pBI121 DNA等外源基因的选择方法和外源基因在转基因西瓜中的遗传规律;讨论了在完善西瓜抗病育种的同时,其它抗逆、品质改良、控制生长发育等有益农艺性状在西瓜改良方面的应用,并对一些有价值的基因导入西瓜进行了展望。     

浅谈生物技术的过去、现在和未来

简要论述了生物技术创立与发展历程，概括了现代生物技术的主要内容与取得的成就，并对21世纪生物技术的发展对人类的贡献做出了展望，告诫人们应该用历史的、实践的观点正确看待生物技术的作用。     

黄灯笼辣椒组织培养研究

以黄灯笼辣椒子叶和下胚轴为外植体,研究了不同激素组合、苗龄、AgNO3（不同浓度）等对辣椒再生的影响。结果表明：①10～15d苗龄的外植体分化频率最高;②添加5．0mg／L的AgNO3可有效地减轻外植体或愈伤组织褐化程度;③最佳芽诱导分化培养基为MS＋BA5．0mg／L＋IAA1．0mg／L;④最佳芽伸长垮养基为MS＋BA3．0mg／L＋IAA1．0mg／L＋GA34．0mg／L;⑤最佳生根培养基为MS＋IAA0．5mg/L。     

感染高粱花叶病毒甘蔗叶片cDNA文库构建及评价

为了研究甘蔗花叶病与甘蔗寄主致病的互作分子机制,利用SMART技术成功构建了感染高梁花叶病毒甘蔗叶片的cDNA文库,用于后续酵母双杂交互作蛋白筛选试验.采用Omega公司Plant RNA Kit提取感染高粱花叶病毒甘蔗叶片总RNA,经过Oligotex纯化获得mRNA,将其反转录成cDNA第一链,再在DNA聚合酶作用下,通过长距离PCR扩增双链cDNA.经SfiI酶切并去除短片段后,连接到pGADT7-SfiI载体上,成功获得初级cDNA文库,最后以初级文库100万克隆为基数扩增,得到扩增文库并提取质粒.经检测构建的文库容量为1.6×106 cfu,文库滴度2.2× 106 cfu/mL,文库cDNA插入片段长度主要分布在700～2 000 bp,文库重组率约为96％.结果表明,该文库质量较好,为筛选分离抗病功能基因及开展寄主与病毒互作的研究奠定了基础.     

香蕉束顶病毒海口分离物核穿梭蛋白（NSP）的纯化及抗血清制备

本研究以本实验室保存的含重组载体pDEST17-NSP的原核表达菌株E．coliBL21（DE3）为材料，于25℃、0．1mmol／LIPTG条件下诱导4h，集菌后超声波破碎，获得以包涵体形式表达的约20kD的融合蛋白。实验结果表明，将沉淀的融合蛋白溶于含6mol／L尿素的Binding Buffer中，再经Ni^2＋-NTA亲和层析纯化后，可获得高纯度的融合蛋白。将纯化融合蛋白经12％SDS-PAGE电泳，切胶回收目的带，液氮研磨并按1：1（W／V）混合佐剂，4次免疫家兔，获得BBTV病毒核穿梭蛋白的特异性抗血清。以融合蛋白作抗原，间接ELISA法测定其抗血清效价为1：5000。田间检测样品的最佳抗血清工作浓度为1：500。Western Blot鉴定结果表明抗血清能与目的蛋白特异性结合。本研究的结果将为下一步NSP基因转录调控和蛋白功能研究奠定一定基础。     

探索长效机制 促进农业农村经济发展

农业农村经济发展在整个国民经济的发展中处于非常重要的位置,针对目前农业农村发展中存在的问题,探索长效机制和各种举措,以期为农业农村的经济发展出谋献策,促进农业农村经济又好又快发展。     

槟榔黄化病叶片差异表达蛋白筛选与鉴定

以相同品种,树龄、长势一致的黄化病槟榔和健康槟榔叶片为试材,采用TCA(三氯乙酸)/丙酮法制备蛋白质样品,结合双向电泳-质谱结合技术,分析病原菌-槟榔互作后差异表达蛋白。结果表明,双向电泳SDS-PAGE胶中黄化病槟榔叶片与健康叶片平均蛋白质点数分别为1081个和960个,其中差异明显的点34个。选择5个差异蛋白点进行质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定,并进行数据库查询,结果鉴定了2个蛋白质,分别为核酮糖-1,5-二磷酸羧化/加氧酶和蕈状支原体高同源蛋白,这些蛋白质可能参与了槟榔黄化病发生和发展过程。另外3个蛋白点在数据库中未检索到同源性和匹配率较高的蛋白质,认为是未知蛋白。