日本脑炎病毒NSl基因在大肠杆菌中的高效表达

提取日本脑炎病毒弱毒株SA14-14-2的基因组RNA，用RT-PCR扩增其NS1基因cDNA，将其克隆到原核表达载体pET-30b( )中，转化大肠杆菌BL-21（DE3）,经IPTG诱导，NS1基因获得高效表达。SDS-PAGE分析显示，表达的融合蛋白表观相对分子质量约为46000，重组NS1蛋白占菌体总蛋白的30.8%。Western blotting分析表明，重组蛋白具有良好的免疫原性。     

β-折叠抗菌肽的研发及应用策略

抗生素的滥用导致全球细菌耐药性问题愈发严重,严重威胁人类、畜禽健康及畜牧业发展,功能多样且不易导致细菌产生耐药性突变的抗菌肽（antimicrobial peptides,AMPs）逐渐发展为抗生素的潜在替代品。β-折叠是抗菌肽一个主要的二级结构分类,该类肽通常由一个或多个二硫键来维系结构的稳定,现已发现许多抗菌肽具有此类结构。相比于目前研究广泛的α-螺旋AMP,它们被认为拥有更强的抗酶解能力和更高的细胞选择性。本篇综述介绍了β-折叠抗菌肽的来源和抗细菌机理,并梳理了一些常见的分子设计方法和应用策略,以期为β-折叠抗菌肽的研发应用提供新思路。     

应用平板凝集和试管凝集试验调查种畜布氏杆菌病的报告

布氏杆菌病是一种人畜共总的传染病．主要症状表现为母盲流产、子宫炎，公言发生单九炎等病症，我市曾在工983年于某如羊场检出了羊型布氏杆菌病．为了弄清我市布氏杆菌病的疫情现状，制定出切实可行的布氏杆菌病防制措施，我们采用平板凝集和试管凝集试验对我市现有种畜场的种畜和农村种猪进行了普查，现将结果报道如下．1材料与方法1．IM＃1．】．l抗原、阳性血清、阴性血清：由省畜牧兽医总站提供．l·1·2被检血清：按无菌操作采血，分离各种畜场种畜及农村种猪血清，加双抗，置0～4℃低温保存备用．互．2方法1．2．且平板凝集反应：按…     

绵羊支原体肺炎的诊断及防制

1 发病情况 2005年11月18日,本校由于教学需要,从四川省雅安市周边不同地区购买山羊50只,按正常情况混合饲养,并给驱虫药.第4天发现部分羊精神不好,食欲下降,夜间羊咳嗽加重,体温升高,肌肉注射青霉素和链霉素,效果不佳,症状加剧,后波及全群,有30只羊发病,死亡3只,发病率达60%,死亡率达10%.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗和变异株灭活疫苗的免疫效果评价

分别采用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1R致弱毒疫苗株和变异毒株灭活疫苗免疫接种40日龄～45日龄仔猪,免疫接种后4周,用高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)HuN-4变异株强毒攻毒,攻毒后21 d剖检,取主要器官作病理组织学观察和病毒抗原定位.结果显示变异毒株灭活疫苗免疫攻毒后导致的病理变化和病毒抗原分布程度均明显高于CH-1R弱毒疫苗免疫组.免疫病理学研究结果表明CH-1R 弱毒疫苗对HU-4株强毒免疫保护效果好于变异毒株灭活疫苗.     

PRRSVGP5蛋白原核表达载体的构建与鉴定

通过RT-PCR获得猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）CH-1a株GP5蛋白基因,克隆至pMDl8一T载体。经测序鉴定正确后,将该片段作为目的基因亚克隆至原核表达质粒pGEX-6p—1,构建原核重组质粒（pGEx—GPS）,转化至E．coli B1221感受态细胞,经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳显示重组蛋白以包涵体形式得到了表达,Westernblot与间接ELISA试验分析表明,该蛋白与PRRSV阳性血清具有良好的免疫反应性。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp4的表达及其抗血清的制备

根据GenBank中已发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV）HuN4株全基因组序列,设计合成一对引物,对PRRSV HuN4株非结构蛋白Nsp4（Nonstructural protein 4基因进行RT-PCR扩增,克隆到原核表达载体pET30a（＋）中,构建重组表达载体pET30a-Nsp4,经酶切测序鉴定。将pET30a-Nsp4转化表达菌株BL21（DE3）,诱导可表达分子量约为27kDa重组蛋白。Westernblot显示其具有较好的反应原性,经镍离子亲和层析（Ni-NTA）纯化获得了高纯度的可溶性重组蛋白。将纯化的Nsp4蛋白免疫BALB／c小鼠,抗血清ELISA效价达1：16000,Western blot和IFA表明,所制备的抗血清能够特异性识别PRRSV自身表达的Nsp4蛋白。本研究获得了可溶性的PRRSV Nsp4蛋白,制备了Nsp4特异性多抗血清,为进一步研究Nsp4蛋白的亚细胞定位及功能奠定了基础。     

乙型脑炎病毒E蛋白Ⅰ、Ⅱ结构域抗原表位鉴定

为鉴定乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白I,II结构域抗原表位,本研究设计了一系列针对E蛋白的I、II结构域(1aa～296aa)部分重叠短肽,分别进行GST融合表达,用JEV阳性血清进行western blot和ELISA反应性筛选,获得了5个线性抗原表位分别为:E1(1FNCLGMGNRDFIEGAS16)、E10-4(77TGEAHNEK84)、E11-2(83EKRADSS YVCKQ94)、E19(145GTTTSENHGNYSAQVG160)和E33(257SQEGGLHHALAGAIVV272)。除E10和E19外,其它表位均为第一次通过实验方法确定的。将这5个融合蛋白对小鼠进行免疫,获得了高滴度的针对5个融合短肽的抗血清,研究证明了这些表位具有良好的免疫原性。本研究为乙型脑炎特异性诊断试剂及表位疫苗的开发奠定了基础。     

单一菌种与复合菌种益生菌制剂对蛋鸡生产效果研究

为了探讨单一菌种与复合菌种益生菌制剂对蛋鸡生产效果的影响。本研究以鸡源枯草芽孢杆菌、乳酸杆菌为益生菌株,利用发酵培养制备乳酸杆菌益生菌制剂、枯草芽孢杆菌益生菌制剂和乳酸杆菌—枯草芽孢杆菌复合益生菌制剂;在140日龄罗曼褐商品蛋鸡基础日粮上,按照质量比0.1%比例分别添加不同益生菌制剂,进行蛋鸡生产效果研究。结果表明,益生菌制剂可以显著提高平均蛋重、日产蛋量、产蛋率,降低料蛋比,提高蛋品质。与乳酸杆菌益生菌制剂、枯草芽孢杆菌益生菌制剂相比,乳酸杆菌—枯草芽孢杆菌复合益生菌制剂可以使平均蛋重分别显著提高1.87%、1.91%;平均日产蛋量分别提高了3.34%、2.77%;产蛋率分别提高1.56%、1.00%;料蛋比分别降低1.99%、1.49%; A级蛋比例分别提高9.16%、5.91% ;蛋黄比率分别提高7.71%、4.14%;每只鸡毛利润分别提高10.84%、7.73%;而在降低不合格蛋率、死淘率、平均日耗料量、蛋形指数和提高蛋比重、蛋壳厚度等方面,各益生菌制剂组差异不显著。因此,乳酸杆菌—枯草芽孢杆菌复合益生菌制剂对蛋鸡生产效果优于乳酸杆菌益生菌制剂、枯草芽孢杆菌益生菌制剂。