氮胁迫条件下稻瘟病菌分泌蛋白致病性分析

 以CH-63和TH-162个致病性差异的稻瘟病菌株为材料,在缺氮培养条件下进行液体培养。经培养2 d后,采用铵盐沉淀及透析纯化处理获得稻瘟病菌培养滤液中的分泌蛋白。分别采用致伤接种及浸泡处理对该蛋白作用水稻植株后的病理反应进行系统研究,结果表明经致伤接种的水稻叶片及茎杆接种斑处出现明显的坏死病斑,其病斑直径是对照的2~4倍。浸泡处理的水稻幼根出现严重褐化,植株生长矮小,株高仅为对照的1/2。对上述稻瘟病菌株分泌蛋白进行酶解处理后病症消失或减弱,进一步确证其为引起上述病理反应的主要因子。将该分泌蛋白接种24个水稻单基因系,接种后72 h根据病斑长度将24个IRRI水稻单基因系按抗、中、感病性状分组。对稻瘟病菌菌株CH-63和TH-16的缺氮分泌蛋白致病力强弱差异与菌丝块接种结果进行比较,结果表明CH-63致病力强于TH-16。     

黑籽南瓜中NBS类抗病基因同源序列的克隆与表达分析

黑籽南瓜(Cucurbita ficifolia)是云南特有的对病害有较强抗性的一种瓜类作物。为发掘利用其蕴含的优异抗病基因资源,本研究根据已克隆到的植物核苷酸结合位点(nucleotide binding site,NBS)类抗病基因的保守氨基酸结构域基因设计简并引物,通过PCR扩增从黑籽南瓜基因组中分离了8条黑籽南瓜抗病基因同源序列(resistance gene analogous,RGAs),聚类分析和相似性比较结果显示,黑籽南瓜抗病基因同源序列2(black seed squash resistance gene analogous 2,HQRGA2(Gen Bank No.:MG946756)单独为一类,且具有核苷酸结合衔接子(nucleotide-binding adaptor shared by APAF-1,R proteins and CED-4;NBARC)结构,其余7条序列均不具有NBS保守结构域。核苷酸相似性分析表明,HQRGA2与部分抗病基因序列的相似性达到87%~99%,其中与南瓜(Cucurbita maschata)NBS类抗病蛋白基因13(squash resistance gene analogous,SQRGA-13)和SQRGA-8的相似性分别达到98.0%和97.0%。对HQRGA2编码的氨基酸保守结构域分析表明,其含有NBS类抗病基因的4个保守模块:P-loop、Kinase-2、Kinase-3a和GLPL区,且属于无Toll蛋白或白介素1受体类似的NBS富亮氨酸重复(non toll/interleukin-1 receptor like of NBS plus leucine-rich region,non-TIR-NBS-LRR)类抗病基因同源序列。HQRGA2编码氨基酸的同源性分析结果表明,其与南瓜抗病蛋白基因SQRGA-13氨基酸同源性较高,达到96.6%,与其余抗病基因同源性在16.6%~43.8%之间,NBS区域氨基酸系统进化树分析结果表明,HQRGA2可能是一个新的抗病基因片段。q RTPCR分析表明,黑籽南瓜HQRGA2片段的表达受尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的胁迫诱导,表现出先扬后抑的表达模式,说明HQRGA2可能为抗病相关基因片段。黑籽南瓜中NBS类抗病基因同源序列HQRGA2的获得为分离克隆其完整抗病基因提供了新线索。     

机械浅翻深松整地技术的探讨

不管社会如何进步与发展,粮食依然是人类生存与发展的关键,要想实现粮食高产需要加强对技术的研究,而本文主要是以青海地区为例,对机械浅翻深松整地技术进行了相关概述。     

桥梁基础钻孔桩——坍孔的预防及处理

随着桥梁建设的发展,桥梁钻孔桩已被广泛采用。由于桥址处的水文和地址条件复杂,桥孔施工普遍存在流砂层坍孔,卵砾石成孔与护壁困难,基岩钻进破岩效率很低,严重影响了桥梁钻孔的技术经济效益。在钻孔桩施工中工序较多,工艺流程互相衔接,主要工序都在水下及地下进行,不便监视,经常出现各种坍孔现象。本文对一些技术问题进行探讨。     

田间废次鲜烟叶提取液的杀虫效果研究

为探索田间废次鲜烟叶的资源化利用渠道,试验采用直接发酵和煮沸方式处理废次鲜烟叶获得提取液,以植物源农药苦参碱作对照,对小菜蛾开展了室内药效研究。结果表明,烟叶煮沸液杀虫效果最好,其原液、稀释10倍液和稀释100倍液在处理后第2 d的校正死亡率均达到100%。烟叶发酵液原液处理后的小菜蛾幼虫校正死亡率在第1 d为73.99%,第2 d为91.57%,第3 d达到100%。试验中废次鲜烟叶煮沸液的4个处理,发酵原液及稀释100倍液的杀虫效果均比商业化植物源农药苦参碱好,具有较大的推广价值。     

云南3种野生稻的花药离体培养研究

云南3种野生稻花药培养愈伤组织诱导能力差别较大,疣粒野生稻花药最易培养,愈伤组织诱导率为3.3%,其次是景洪普通野生稻为2.1%;元江普通野生稻再次之,为1.2%;药用野生稻诱导率最低,仅为0.8%。疣粒稻花药愈伤组织植株再生能力最强,再分化率在37.4%~52.6%,普通野生稻再分化率为19.2%~26.3%。本试验建立了疣粒野生稻、景洪类型和元江类型普通野生稻的花药培养离体无性系,为长期保存云南野生稻资源奠定了基础。     

云南马铃薯资源抗旱种质筛选

用多年收集和选育、引进的云南马铃薯30个品种,以在宣威推广种植面积较大的宣薯4号为对照品种,在宣威农业技术推广中心马铃薯品种展示园进行抗旱性、丰产性和稳产性评价鉴定,筛选适宜当地种植抗旱、丰产的马铃薯品种和育种材料。结果表明:结合根提拉力和产量作为评价旱作马铃薯抗旱种质资源和筛选马铃薯抗旱品种的主要技术指标,05-290、05-363、S03-3276、夏波蒂、05-287、04-016、05-188、宣薯5号、05-225、丽薯200202均高于对照,表现出显著抗性,是较为抗旱的品种。      

植物病原细菌(Ralstonia solanacearum)染色体基因组分泌信号肽计算机分析

应用SignalP3．0、TMHMM2．0、THUMBUP、big—PI、TargetP1．01、Lipop1．0、TatP1．0等7种软件对植物病原细菌Ralstonla solanacearumGMI1000染色体基因组3448个氨基酸序列进行预测分析。结果表明,该物种染色体基因组分泌信号肽ORFs有178个,占其基因组编码ORFs的5．2％,其中有150个ORFs属于I型分泌信号肽,28个ORFs属于Ⅱ型分泌信号肽。在178个ORFs中具RR—motif信号肽结构的有13个,其中11个属于I型信号肽,2个属于Ⅱ型信号肽。通过软件预测未发现Comc型信号肽与细菌素-信息素型信号肽结构。在染色体分泌信号肽ORFs中,有116个具可预测功能,其余62个为功能未知的推定蛋白。已知功能主要集中于细胞代谢、细胞调控及转运、细胞膜结构等领域,这些功能是该物种在长期进化过程中与环境中各种因子发生互作,相互适应的结果。     

3种黑籽南瓜对枯萎病菌胁迫的响应

为探究白皮、绿皮、花皮3种黑籽南瓜对枯萎病菌抗病能力差异,本研究测定枯萎病菌胁迫下3种黑籽南瓜的气体交换参数、叶绿素荧光参数、抗氧化系统、丙二醛(MDA)的变化。结果表明:当受到枯萎病菌侵染后,3种黑籽南瓜的气体交换参数均出现不同程度的降低,白皮黑籽南瓜呈现大幅下降;花皮黑籽南瓜的F_v′/F_m′和绿皮黑籽南瓜Φ_(PSⅡ)、q_P上升,而白皮黑籽南瓜均表现下降,同时白皮黑籽南瓜q_N和NPQ显著下降,绿皮黑籽南瓜下降幅度最小;在抗氧化系统中白皮黑籽南瓜过氧化物酶(POD)活性增大,花皮黑籽南瓜减小,但花皮黑籽南瓜超氧化物歧化酶(SOD)活性显著增大;绿皮和白皮黑籽南瓜MDA含量升高,而花皮黑籽南瓜显著下降。研究发现:正常生长的白皮黑籽南瓜具有较高的光合能力,但其对枯萎病菌的抵抗力较弱,绿皮和花皮黑籽南瓜的抗病性强于白皮黑籽南瓜。     

提高农杆菌介导法将PinII抗虫基因导入滇型水稻的转化效率

本论文对滇型水稻品种玉优一号、HT-7的愈伤组织诱导、基因转化及植株再生进行了研究。通过实验，将质粒pCAMBI1300上带有的PinⅡ抗虫基因导入水稻愈伤组织细胞中，获得了一批Hyg抗性植株。185株抗性苗经过PCR检测和叶片对潮霉素的抗性试验，证明其中有59株为转基因阳性植株。结果显示，受体、农杆菌状态以及共培养方式等是影响基因转化效率的关键因素；以叶片对潮霉素的抗性作为转基因植株的快速筛选是可行的，大大提高了检测效率。