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茶树咖啡碱合成酶CRISPR/Cas9基因组编辑载体的构建 总被引:3,自引:0,他引:3
CRISPR/Cas9技术是一门新兴的基因组定点编辑技术,具有操作简单、高效的优点,可轻松实现对目标基因的敲除、替换和定点突变等操作。该技术刚诞生,就受到了全球生命科学领域研究者的关注,不到3年的时间就已经成功应用于多种动、植物当中。然而CRISPR/Cas9技术在茶树中的应用面临载体构建问题,本文以茶树咖啡碱合成酶为例,联合采用常规PCR、Overlapping PCR和Golden Gate Cloning技术,构建了包含茶树咖啡碱合成酶双靶点的CRISPR/Cas9基因编辑载体,为CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术在茶树中的应用奠定了坚实基础。 相似文献
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甘蔗黄叶病和甘蔗花叶病是我国甘蔗最主要的病毒病,感病品种产量下降和品质变劣,传统方法难以防治。RNA干扰技术使培育抗病毒甘蔗品种成为可能。本研究根据甘蔗黄叶病毒和侵染甘蔗的高粱花叶病毒结构与功能特性,广泛收集不同来源病毒分离物CP基因序列,经过比对选取保守序列作为干扰序列。通过在序列两端添加酶切位点,合成并连接成双价甘蔗黄叶病和花叶病毒干扰序列,然后构建到中间载体p HANNIBAL上,形成双价RNAi干扰结构,最后插入到p ART27上形成干扰表达载体。利用基因枪轰击甘蔗品种福农15号愈伤组织进行转化,经G418筛选获得抗性再生植株。通过提取DNA和RNA分析,证实双价RNAi干扰结构不仅以不同拷贝整合到甘蔗基因组中,而且得到了转录表达。 相似文献
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MicroRNA(miRNA) is a class of important regulating non-coding small molecular RNA. The gma-MIR166 gene family consists of 21 members and their expression patterns diversify widely. It is important to analyze the evolution of gma-MIR166 gene family in order to understand the evolutionary mechanisms of miRNAs in soybean. In this study, we implemented soybean wide genome block analysis, the molecular phylogeny of gma-MIR166 and block analysis of gma-MIR166 family. The results showed that both chromosome big segmental duplications and tandem duplications were main reasons contributed to the expanding of gmaMIR166 gene family. These findings suggested that gma-MIR166 gene family might originate from one or two ancient miRNA genes. The results of research provided a support for evolutionary study of miRNAs in soybean and related species in Fabaceae. 相似文献
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In order to explore different concentrations of mixed acids in improving quality of whole-plant corn silage and their effects on growth performance of Dorper×Han F1 sheep.4 levels of 45% formic acid,45% propionic acid and 10% sodium propionate were mixed,and 0(control),0.3%,0.6% and 1% were added to 4 groups of ripening period whole-plant corn.The results showed that compared with control group,the experimental groups could significantly decrease the proportion of AA/PA in silage (P<0.05);0.3% and 0.6% groups had the better effects.Based on the result of CNCPS,0.6% group significantly improved the PB3 component (P<0.05),reduced the CC component (P>0.05),and improved the quality of silage.Compared with control group,the experimental groups effectively inhibited the mold and yeast reproduction,improved the aerobic stability of silage.The feeding trial results showed that ADG and F/G of sheep in experimental groups were better than control group,and F/G of both 0.6% and 1% groups were significantly better than that in control group (P<0.05).In conclusion,treatment of mixed acids could improve the quality of whole-plant corn silage,and silage treated with 0.6% levels of mixed acids could significantly improve the growth performance of Dorper×Han F1 sheep. 相似文献
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