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51.
猪多杀性巴氏杆菌环介导等温扩增检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
为建立猪多杀性巴氏杆菌(Pm)的快速检测方法,本研究以Pm的PlpB基因序列为靶基因设计特异性引物,建立了Pm特异性的环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法.经反应条件优化,确定反应条件为63℃,20 min.检测结果显示,建立的LAMP检测方法具有良好的特异性,灵敏度为25 cfu/mL;与大肠杆菌、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、沙门氏菌无任何交叉反应.采用建立的LAMP方法与常规PCR方法对临床54份分离样品进行检测,检测结果为31份为阳性,23份为阴性,二者符合率为100%.该方法的建立为Pm在临床上的快速检测提供了一种新的技术手段. 相似文献
52.
光周期与氮肥互作对华农1号青饲玉米碳氮代谢相关酶的影响 总被引:1,自引:1,他引:1
于2005年3-7月,采用盆栽试验,设置3个不同光照长度处理和氮素水平,研究了不同光照时数及氮素水平对远缘玉米杂交种华农1号青饲玉米碳氮代谢相关酶活性的影响.结果表明,在苗期,16 h光照处理下植株叶片磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、蔗糖磷酸合成酶、蔗糖合成酶、谷氨酰胺合成酶和硝酸还原酶等酶的活性显著低于13和10 h光照处理;至抽雄期和收获期,13和10 h处理下植株叶片各种酶的活性下降速率较快,而16 h处理下酶活性下降缓慢且显著高于13和10 h处理.在抽雄期或收获期,16 h处理下叶片各种酶的活性均随施氮量的增加而增加,但在13和10 h处理下均有几种酶的活性在高氮素水平下出现下降的趋势.总的看来,在16 h光照处理下,植株苗期碳氮代谢相对较弱,到中后期代谢能力明显提高,且耐高氮能力也较强,收获期植株叶片酶的活性显著高于13和10 h处理. 相似文献
53.
雏鸭是指刚孵出至15日龄的鸭,是鸭一生中增重最快、饲料报酬最高的时期,但由于它对外界环境适应能力差,对疾病的抵抗力低,因而又是最难饲养的时期。所以雏鸭饲养是培育种鸭和养好商品鸭最为重要的阶段。这一阶段饲养管理得好可以收到事半功倍的效果,否则不但育雏成活率低,而且将严重影响日后生长发育,增大饲养成本,降低养鸭的效益。作者在完成兰州市科委下达的“樱桃谷鸭引种推广养殖试验”科研课题中,对如何做好雏鸭饲养作了认真的研究探讨,在三年多的推广养殖中育雏成活率保持在90%~100%,现将关键技术措施总结如下,供参考。一、育雏前的… 相似文献
54.
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56.
利用RT-PCR方法对2016-2020年华北地区692份疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)临床样本进行检测,获得368份阳性样品,阳性率为53.18%,并对其进行了ORF5基因扩增和测序,开展遗传变异和分子流行病学分析。结果显示,共获得33条完整的ORF5基因序列,除了HB-XT株为600 bp,其余全长均为603 bp。ORF5基因遗传进化分析表明33株均为Ⅱ型,其中有9株分布在Lineage 8,24株分布在Lineage 1。33株之间的氨基酸序列同源性为80.1%~99.5%,与JX-A1株和NADC30株的同源性分别为81.1%~99.5%和85.6%~94.5%。氨基酸分析结果表明,33株均在诱骗表位和中和表位发现了突变;在33株中共发现7个N-糖基化位点,其中包括相对保守的N44和N51位点,以及主要位于抗原表位的N30,N32,N33,N34和N35位点。结果表明,2016-2020年华北地区HP-PRRSV毒株逐渐被类NADC30毒株所取代,成为优势毒株,且ORF5基因变异差异较大,使PRRSV流行变得更加复杂。因此,本研究对PRRS分子流行病学以及疫苗的选择和防控... 相似文献
57.
为研究蛇钩口线虫长沙分离株的核糖体DNA (rDNA)内转录间隔区(ITS)序列的遗传变异情况,并利用ITS序列构建蛇钩口线虫与其它线虫的种群遗传关系,本研究利用PCR扩增蛇钩口线虫rDNA的ITS片段,并克隆至pGEM-T载体中进行序列测定及分析.结果显示,长沙市各分离株的ITS序列长度均为734 bp,与其它线虫的同源性均低于83.9%,而与十二指肠钩口线虫的同源性较高.本研究为蛇钩口线虫的分类鉴定以及进一步的分子流行病学调查和群体遗传研究奠定了基础. 相似文献
58.
应用PEG平板进行琼脂扩散试验检测新城疫抗原,提高了对新城疫抗原的检出率。采用多器官检查和统一判定方法,即脾、胸腺、盲肠扁桃体、肠淋巴结和法氏囊等器官检出阳性时即可判为新城疫,对新城疫死鸡的检出率为100%,解决了非典型新城疫诊断困难这一难题,方法简单准确,快速易行,值得推广和应用。 相似文献
59.
小反刍兽疫疫苗毒株与强毒株的鉴别性荧光RT-PCR检测方法的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
对GenBank已公布的小反刍兽疫病毒N基因序列进行分析,设计引物与探针,建立PPRV通用型与Ⅱ系疫苗毒特异型二重实时荧光RT-PCR方法,同时建立针对PPRVIV系强毒株的特异型荧光PCR方法。特异性试验和灵敏度试验表明:建立的二重荧光RT-PCR方法可特异性检测PPRV病毒,其HEX信号通道(通用型)和TAMRA信号通道(Ⅱ系疫苗毒特异型)的检测灵敏度分别可达10^1 TCID50/mL和10^2 TCID50/mL,完全满足PPRV的检测要求。用二重荧光RT-PCR方法对西藏采集的14份羊血清样品进行检测,并用建立的Ⅳ系强毒株特异型荧光PCR方法对二重荧光RT-PCR的检测效果进行评估,结果显示,该方法可有效甄别PPRV强毒株和疫苗毒株,避免假阳性结果的出现。 相似文献
60.
本研究旨在通过敲除山羊痘病毒(GTPV)大段基因组片段尝试构建安全性更好的基因工程减毒株和病毒表达载体.采用PCR方法,克隆了GTPV AV41株基因组ORF7~ORF8间1 242 bp的基因片段,以及ORF18~ORF19间1 355 bp的片段.接着分别以上述2片段作为左、右侧同源重组臂,构建了包含报道基因EGFP和抗性基因gpt的GTPV重组转移载体pCF-Eg.然后采用脂质体介导法,将重组转移载体pCF-Eg与GTPV AV41株共转染原代羊睾丸细胞,通过空斑纯化筛选阳性重组病毒,并鉴定重组病毒的遗传稳定性和生长特性.结果成功获得1株敲除掉ORF8~ORF18间9个ORF、长达7 kb基因组片段的重组病毒vCF-Eg.该重组病毒能稳定表达绿色荧光蛋白至少10代,并且其增殖滴度与亲本毒株基本相同.表明上述区域是GTPV的复制非必需区. 相似文献