猪接种PRRSV Nsp2Δ1882-2241弱毒株后血清细胞因子的变化特征

为了解Nsp2Δ1882-2241缺失后弱化的高致病性PRRSV（TJM株）对宿主免疫学应答的刺激机理,本研究分析了免疫猪血清中的细胞因子及变化规律。将14头4周龄易感仔猪随机分为3组：第1组接种PRRSV TJM-F92株,为免疫组;第2组接种高致病性PRRSV TJ-F5毒株,为攻毒组;第3组不接种疫苗及病毒,为对照组。接种后28d,用TJ-F5毒株攻击试验猪,于不同时间点采集血样,用ELISA法测定血清中的PRRSV抗体、IL-2、IL-10、IL-12p40、TNF-α、IFN-α和IFN-β水平。结果显示：（1）与对照组和攻毒组相比,免疫组猪IL-12p40水平持续上调,于免疫后28d受PRRSV强毒攻击后,其水平开始缓慢降低,但仍高于攻毒后的对照组。（2）免疫组IL-2水平在接种疫苗后的前21d内无明显升高且低于攻毒组,在受到强毒攻击后其IL-2水平却有明显升高。（3）免疫组IL-10水平与对照组无明显差别,并在免疫14d后一直显著低于攻毒组（P〈0.01）。（4）免疫组接种疫苗后的前21d内,TNF-α水平保持稳定,28d明显上调。攻毒组TNF-α水平0～28d一直低于对照组,且在21d达到最低（P〈0.01）。免疫组在28d受强毒攻击后,其TNF-α水平下降且在攻毒7d时最为明显（P〈0.01）,此后恢复到正常水平。（5）免疫组免疫后28d时IFN-α水平升高,在受到强毒攻击后再次显著降低（P〈0.01）。免疫组IFN-β水平一直低于对照组和攻毒组,不因强毒攻击而变化。以上结果提示,IL-12上调在PRRSV免疫保护中起明显作用;另外,上调TNF-α及下调IL-10都是基因缺失疫苗发挥效力的潜在机制。     

甘氨胆酸对小鼠免疫功能的影响

目的:观察甘氨胆酸(Glycocholic acid,GCA)对正常及免疫抑制小鼠免疫功能的影响。方法:应用环磷酰胺或环孢菌素A所致的免疫抑制模型;采用ELISA及比色法观察了GCA对体液免疫的影响,碳廓清法测定了GCA对单核巨噬细胞的吞噬功能的影响,迟发型皮肤变态反应法观察了GCA对二硝基氯苯丙酮溶液所致小鼠迟发型皮肤过敏反应的影响,并测定了血清中IL-2、TNF-α的含量。采用流式细胞术检测了GCA对小鼠外周血T细胞亚群CD4、CD8比例的影响。结果:GCA能够显著增强正常及抑制小鼠的IgMI、gG的含量;增加外周血中T淋巴细胞CD4比例,使CD4 /CD8 比值提高;显著抑制迟发型皮肤变态反应的发生,并增加IL-2及TNF-α的含量。结论:GCA能够显著提高非特异性免疫功能;显著增强机体的体液免疫能力;显著抑制迟发型变态反应,增强正常及CsA抑制小鼠CD4 百分率、CD4 /CD8 比值,GCA具有调节机体免疫功能的作用。     

鸡传染性支气管炎病毒地方流行株的分离与鉴定

从山西各地区疑似鸡传染性支气管炎(IB)的病料中,分离到5株鸡传染性支气管炎病毒(IBV)分离株,并对分离病毒进行了病毒形态观察、对鸡新城疫病毒(NDV)的干扰、鸡胚致病性试验、动物回归试验、血凝特性试验、病毒理化特性测定等生物特性鉴定及IBV N基因特异性片段的检测.电镜观察,可见直径为60～120 am,有囊膜及纤突呈冠状排列的病毒粒子;对NDV有明显的干扰作用;分离株的传代物均有明显的致鸡胚矮小化作用;动物回归感染死亡鸡肾脏病变明显,表现肾脏肿大、花斑肾现象,输尿管内充塞大量尿酸盐;无直接血凝性,经1%胰酶处理后可凝集鸡红细胞;分离株对乙醚和氯仿敏感;采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对分离毒株进行扩增,结果均扩增出特异N基因核酸片段.     

内蒙古地区奶牛乳房炎链球菌毒力基因检测及耐药性研究

为了解内蒙古地区奶牛乳房炎链球菌毒力基因的分布情况及其耐药现状,通过该地区360份乳房炎奶样链球菌的分离鉴定,利用微量肉汤稀释法测定了81株链球菌对15种药物的MIC,采用PCR法检测耐药基因及毒力基因的携带情况。结果显示,分离到的81株链球菌对β-内酰胺类的耐药率最高;对红霉素和四环素的耐药率在40%~85%;对氟喹诺酮类的耐药率相对较低。多重耐药菌株达88.9%(n=72)。耐药基因pbp2b的检出率为86.4%,tetL和tetM的检出率在75%以上,红霉素耐药表型主要由ermB介导。分离菌株毒力基因中cfb的检出率最高(50.6%),其次为cyl和hylB。内蒙古地区奶牛乳房炎链球菌对β-内酰胺类、大环内酯类和四环素耐药情况严重,且发现多重耐药菌株的流行;链球菌中尤以无乳链球菌的毒力基因携带率较高。     

猪源沙门菌分离鉴定与耐药性分析

2015年9月和2016年10月,河南省两猪场暴发保育仔猪的急性死亡,为了弄清原因,采集心血、肺脏和肝脏病料,通过常规分离、PCR鉴定、生化试验,分离到2株沙门菌,分别命名为HenanSep1、HenanSq2N。小鼠致病性试验结果显示,每只小鼠接种0.2mL菌液,其浓度为5×10~8 CFU/mL,均导致小鼠发病,但是无死亡。选取21种药物,采用K-B法对2个分离株进行药物敏感性测定。药敏试验结果表明,2株沙门菌对头孢噻呋、氨苄西林、磺胺甲恶唑/甲氧苄啶、磺胺异恶唑、氯霉素、恩诺沙星耐药,对美罗培南、亚胺培南、氨曲南、多黏菌素B、土霉素敏感,对其他药物敏感性不同。研究结果为猪沙门菌病临床诊断与防治提供了重要依据。     

2008～2011年眉山市狂犬病流行病学调查及分析

为了分析眉山市狂犬病流行特点,提出防控对策,控制狂犬病发生,笔者针对眉山市及所辖区县上报的2008～2011年狂犬病临床病例进行了流行病学调查与分析。     

我国不同区域鸡源大肠杆菌的致病性与耐药性状分析

为比较我国不同地区发病鸡源大肠杆菌的致病类型、毒力因子差异和其耐药状况,探讨大肠杆菌对家禽生产和公共卫生的影响,对从山东、西藏等7个省(自治区)的发病鸡群分离获得的130株大肠杆菌菌株,用PCR方法进行了肠致病性大肠杆菌、肠毒素型大肠杆菌等5种致病类型检测和ompT、stx2等7种毒力因子检测,并用15种药物测其耐药性。结果发现,仅5株发病鸡源大肠杆菌为致病性大肠杆菌(3.85%,5/130),且均为肠产毒性大肠杆菌(ETEC)。130株大肠杆菌检测出iroN毒力因子检出率最高(69.23%,90/130),stx2最低(1.54%,2/130),其余均在50%~60%。分离菌株对四环素和氨苄西林耐药率最高,分别为91.54%(119/130)、90.77%(118/130),对美罗培南耐药率最低(12.31%,16/130);多重耐药严重,94.62%(123/130)的菌株对三类或三类以上的药物耐药。本研究通过比较不同地区养鸡场大肠杆菌的致病性和耐药情况,以进一步做好大肠杆菌病的防控。     

一株猪源大肠埃希氏菌卡那霉素耐药基因的研究

提取一株猪源大肠埃希氏菌卡那霉素耐药菌株E.coliBJ96147的质粒DNA进行转化,转化子能稳定表达其全部抗生素抗性,表明E.coliBJ96147对卡那霉素（K）、庆大霉（GM）、链霉素（S）、氯霉素（C）、四环素（Tc)、复方新诺明等六种抗生素的抗性由耐药性R质粒介导;根据已发表的编码卡那霉素抗性的磷酸转移酶[APH（3′）-Ⅱ]钝化酶基因的核苷酸序列,设计合成了一对引物P1和P2,用PVR技术检测其钝化酶基因,结果该引物扩增出了预期的578bp大小的PCR产物,淫限制性内切酶HindⅢ进行酶切分析,发现产物被切成二条带,与预出现的389bp及189bp二条带相符,说明PCR可用于检测猪源大肠埃希氏菌卡霉那素磷酸转移酶[APH（3′）-Ⅱ]钝化酶基因。     

猪囊尾蚴头节单链抗体-PE40重组蛋白的表达及抗虫活性分析

将含有抗猪囊尾蚴头节单链抗体基因（ScFv）和绿脓杆菌外毒素基因（PE40）的重组质粒pET28．ScFv-PE40转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,表达产物通过SDS-PAGE和westernblot鉴定,其表达蛋白的相对分子量约为68ku,表达量约占菌体总蛋白的13．8％。将融合蛋白通过金属Ni2^＋亲和层析柱纯化后,目的蛋白纯度在95％以上,可溶性蛋白的回收率约为50％,回收量为5mg／L。本研究所进行的纯化重组蛋白的体外杀伤六钧蚴试验表明,重组蛋白对六钩蚴具有较强的杀灭作用,而且与其剂量呈正相关性。     

猪衣原体感染的血清学调查报告

通过对平顶山地区6个县(市)29个猪场的3000头种猪血清进行鹦鹉热衣原体的间接血凝(IHA)抗体的检测。结果显示,血清的阳性率为3.2%～8%,平均为4.8%,猪场的阳性率为65%,该病在本地区较为普遍。