胞壁酰二肽对体外奶牛乳腺上皮细胞生长及胞内NOD2 mRNA表达的影响

【目的】奶牛乳房炎是奶牛养殖业中最为常见,同时也是带来经济损失最为严重的疾病之一,其主要病因是细菌感染。奶牛乳腺的固有免疫是抵抗病原菌入侵的第一道防线。NOD2是机体固有免疫模式识别受体核苷酸结合寡聚域(nucleotide-binding oligomerization domain,NOD)蛋白家族中的重要一员,通过识别其特异性配体胞壁酰二肽(muramyl dipeptide,MDP)——一种广泛存在于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌细胞壁中的成分,而参与抵抗多种病原菌入侵。奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMEC)除泌乳以外,还是奶牛乳腺的免疫屏障。本试验欲探究MDP对BMEC体外生长状态及胞内NOD2表达量的影响。【方法】选取健康泌乳中期荷斯坦奶牛乳腺腺泡为组织原材料,采用胶原酶Ⅰ消化法结合梯度浓度胰蛋白酶纯化法分离BMEC;使用上皮细胞特异性表达的角蛋白-18(cytokeratin-18,CK-18)及成纤维细胞特异性表达的波形蛋白(Vimentin)抗体,通过免疫荧光技术对纯化后获得的细胞进行鉴定;将BMEC设为6个处理组,分别添加浓度为0(空白对照组)、1、5、10、15及20μg·mL~(-1)的MDP,24 h后显微镜下观察细胞状态,同时提取细胞RNA并反转录为cDNA,采用实时荧光定量PCR方法检测BMEC中NOD2的表达量。【结果】(1)胶原酶Ⅰ消化法结合梯度浓度胰蛋白酶纯化法分离得到的细胞CK-18免疫荧光结果为阳性,而Vimentin反应为阴性;细胞生长状态良好。(2)空白对照组、1、5及10μg·mL~(-1) MDP刺激组的BMEC生长状态良好,无任何肉眼可见变化;15μg·mL~(-1) MDP刺激组可见少量的BMEC脱落;而20μg·mL~(-1)MDP刺激组可见大量BMEC脱落,漂浮,且即使仍贴壁的细胞,其形态也发生了变化。(3)与空白对照组相比,各刺激组细胞NOD2 mRNA的表达量与MDP的刺激浓度呈正相关,即刺激时间为24 h时,随着MDP浓度的增加,BMEC中NOD2受体mRNA的表达量逐渐增加(P0.05)。【结论】成功获得了纯度较好的BMEC,该细胞生长状态良好,可以用于后续试验;虽然BMEC中NOD2受体mRNA的表达量与MDP的刺激浓度呈正相关,但在保持BMEC生长状态正常的前提下,MDP体外刺激浓度应控制在10μg·mL~(-1)以下。这些结果提示我们:当病原菌入侵乳腺时,BMEC可以通过NOD2受体途径参与免疫防御反应,但这种防御能力受细菌数量或毒力强度的影响。即在一定的细菌数量或毒力范围内,随着细菌数量的增加或毒力的增强,奶牛乳腺的免疫防御反应也增强,进而清除外来病原菌;而当细菌数量或毒力强度超过一定范围时,乳腺组织受到严重损伤,免疫防御屏障也随之崩溃,奶牛乳腺局部甚至全身将呈现出明显的临床症状。     

基于四旋翼无人机快速获取大田植株图像的方法及其应用

利用低空无人机获取农田信息,具有实时以及灵活性高、成本低等优势。为快速、精确监测大田规模化种植作物的生长发育状况,以四旋翼无人机为平台,结合数字图像技术,建立快速获取大田烟株中前期图像的方法。结果表明,在天空辐射条件较稳定的条件下,采用较低的飞行高度(如20m)航拍获取田块图像,能够得到清晰的拼接图像和三维重建效果;采用基于决策树的植被分割算法将烟草和非植被部分分割后,得到较高精度的大田植株图像。在此基础上进行大田烟草缺苗数估测,所估算的缺苗数与实测值吻合较好。     

河南省农村户用沼气池推广使用调查研究

针对近年来河南省部分地区农村户用沼气池推广使用过程中出现的问题,通过问卷调查、与用户和沼气服务队交流访谈等的方式,对河南省濮阳、焦作、济源等地农村户用沼气池推广使用情况进行了实地调查,认为在大力推广沼气池的同时,忽视了对政策制定、管理模式、使用对象、政府监管等方面的研究,提出了一些具有建设性的意见和措施.     

黄土高原主要造林树种对鼢鼠危害的抗性研究

采用定植3 a林木的被害率和被害存活率指标,将黄土高原主要造林树种分为高抗、中抗、低抗和易害树种.油松、侧柏、山杏、刺槐和沙棘个体死亡时根系的被害程度依次为13.58%、19.81%、33.50%、39.62%、42.16%,被害林木死亡率为100%时的根系被害程度依次为72.52%、78.03%、81.25%、89.12%、90.14%.林木抗鼠性差异的主要原因是林木的生长特性和鼢鼠对其喜食的程度与取食量.林木根系生长愈快、萌生能力愈强,被害程度愈低,耐鼠性愈强.     

参数不确定的不同分数阶的混沌系统的自适应同步

基于追踪器的思想讨论了参数不确定的分数阶混沌系统的自适应同步问题.应用两种不同的方法来实现同步.一种方法为构造合适的控制器从而得到和响应系统相同阶的误差系统,进而应用分数阶系统稳定的理论;另一种为构造一个新的响应系统,把分数阶系统转换为整数阶系统,进而利用Lyapunov稳定性理论.选取Chen系统和Qi系统进行数值模拟验证结论的有效性.并与已有的针对不同阶系统同步的Laplace变换方法进行比较.     

Effect of serum amyloid A on invasion,migration and MAPK signaling pathway in osteosarcoma cells

AIM: To investigate the effect of silencing of serum amyloid A (SAA) on the viability, apoptosis, migration and mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathway in osteosarcoma U2OS cells. METHODS: Small interfering RNA (siRNA) targeting SAA was transfected into U2OS cells to silence the expression of SAA gene. The U2OS cells were divided into blank control group, negative control group, and experimental group. The cells in negative control group and experimental group were transfected into negative control siRNA and SAA-siRNA, respectively. The cells in blank control group were without any treatment. The viability of the cells was measured by MTT assay and the apoptotic rate was analyzed by flow cytometry with Annexin V-FITC/PI double staining. The migration and invasion abilities of the cells were detected by Transwell chamber assay. The protein levels of SAA, phosphorylated p38 MAPK (p-p38 MAPK) and phosphorylated c-Jun N-terminal kinase (p-JNK) in the cells were determined by Western blot. RESULTS: The protein expression of SAA in SAA-siRNA group was significantly lower than that in blank control group (P<0.05). Compared with blank control group, the cell viability in SAA-siRNA group was significantly decreased (P<0.05), the apoptotic rate was significantly increased (P<0.05), and the invasion and migration abilities were significantly decreased (P<0.05). The protein levels of p-p38 MAPK and p-JNK in SAA-siRNA group were significantly lower than those in blank control group (P<0.05), and no significant difference of total JNK and p38 protein levels was observed. CONCLUSION: Silencing of SAA expression inhibits the viability of osteosarcoma cells, induces apoptosis and decreases the migration of osteosarcoma cells, which may be related to the activation of MAPK signaling pathway.     

小鼠早期胚发育的全程组织切片观察

[目的]对小鼠早期胚发育全程进行系统的石蜡切片观察,为小鼠胚胎工程研究提供详细资料.[方法]通过体内受精方法获得小鼠早期胚胎,利用大体解剖及石蜡切片技术,观察受精卵至扩张囊胚的早期胚发育全程,用数码显微镜系统拍照.[结果]利用石蜡切片-HE染色方法观察受精卵至扩张囊胚的形态结构,图像色彩对比度适当,可以准确生动地显示胚...     

利用叶绿素含量及荧光动力学参数评价青贮玉米耐旱关键指标研究

利用叶绿素荧光仪测定了26份青贮玉米自交系和105个组合的叶绿素含量及荧光动力学参数,对其生理性状关键耐旱指标进行主成分及相关分析,并进行配合力及遗传参数分析。青贮玉米Fv/Fm的影响因素大 小依次为：叶片Fv>叶片Fm>叶片Fo>叶片Area>叶片SPAD>苞叶Fv/Fm>苞叶SPAD。筛选出了5个关键指 标(叶片Fm、叶片Fv、叶片Area、叶片Fv/Fm、叶片SPAD)及一般配合力(GCA)较高的9份自交系和特殊配合力(SCA)较高的19个组合。在F₁吐丝期,叶片Fo、叶片Area主要受基因加性效应支配;叶片Fm、叶片Fv的加性与 非加性效应相当;叶片Fv/Fm、叶片SPAD主要受基因非加性效应支配。狭义遗传力(h²N,)大小依次为：叶片SPAD>叶片Area>叶片Fo>叶片Fv>叶片Fm>叶片Fv/Fm。通过对叶片Fv的早代正向直接选择、叶片Fo的早代 负向直接选择,以及对叶片Fv/Fm的杂种优势利用,可提高旱区青贮玉米单位面积生物产量。叶绿素含量及荧光 动力学参数可用于青贮玉米的耐旱性筛选。     

高产优质多抗玉米新品种登海3660的选育与配套栽培技术

玉米新品种登海3660是山东登海种业股份有限公司育成的紧凑大穗型高产玉米单交种。该品种在多年试验中表现产量高,稳产性好,果穗均匀,不秃尖,品质优良,抗病,活秆成熟。适宜在辽宁、吉林省中南部晚熟区、河北北部、山西北部、北京、天津及陕西延安地区春播种植。     

中国河南省小麦纹枯病菌对咯菌腈的敏感性

为明确河南省小麦纹枯病菌对咯菌腈的敏感性,采用菌丝生长速率法测定了咯菌腈对2013年从河南省15个地市分离的98株病菌的毒力。结果表明:咯菌腈对供试小麦纹枯病菌菌株的EC50值在0.009~0.079 μg/mL之间,平均EC50值为(0.025 ±0.012)μg/mL;98个菌株对咯菌腈的敏感性分布呈连续单峰曲线,未出现敏感性下降的亚群体,可将(0.025 ±0.012)μg/mL作为小麦纹枯病菌对咯菌腈的敏感性基线;方差分析(LSD法)及SPSS聚类结果均显示,同一地市内的菌株对咯菌腈的敏感性差异较大,EC50最大值和最小值之比在1.0~4.1之间,而不同地区菌株间对咯菌腈敏感性差异不明显,咯菌腈EC50平均值变化范围在0.015~0.060 μg/mL之间,后者是前者的4倍;小麦纹枯病菌对咯菌腈的敏感性与其对噻呋酰胺、苯醚甲环唑、井冈霉素、丙环唑及戊唑醇的敏感性之间无明显相关性。本研究结果可为河南省小麦纹枯病防控杀菌剂的合理使用提供理论依据。