猪源沙门菌分离鉴定与耐药性分析

2015年9月和2016年10月,河南省两猪场暴发保育仔猪的急性死亡,为了弄清原因,采集心血、肺脏和肝脏病料,通过常规分离、PCR鉴定、生化试验,分离到2株沙门菌,分别命名为HenanSep1、HenanSq2N。小鼠致病性试验结果显示,每只小鼠接种0.2mL菌液,其浓度为5×10~8 CFU/mL,均导致小鼠发病,但是无死亡。选取21种药物,采用K-B法对2个分离株进行药物敏感性测定。药敏试验结果表明,2株沙门菌对头孢噻呋、氨苄西林、磺胺甲恶唑/甲氧苄啶、磺胺异恶唑、氯霉素、恩诺沙星耐药,对美罗培南、亚胺培南、氨曲南、多黏菌素B、土霉素敏感,对其他药物敏感性不同。研究结果为猪沙门菌病临床诊断与防治提供了重要依据。     

猪链球菌2型人源分离株EF单克隆抗体的制备与鉴定

为了解猪链球菌2型（SS2）菌株毒力相关因子的致病机理,建立高效的免疫学检测方法,将SS2胞外因子（EF）抗原性强的区域通过基因克隆、原核表达,经亲和层析纯化的EF蛋白免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术将免疫细鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,建立了4株分泌抗EF蛋白单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞系2G1、5H7、3H4和1F2。间接ELISA测定杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶128～1∶512,诱生腹水的抗体效价为1∶104～1∶105。4株McAb腹水的Western blot鉴定表明McAb能特异性的识别EF。以2G1单抗腹水与和EF多克隆抗血清建立的夹心ELISA可特异地检测EF。     

影响牛肉品质的宰后因素

本文从肉牛屠宰后肌肉变化,分析了几种影响屠宰后牛肉品质的相关生理过程,即肌肉pH的下降、温度,肌肉收缩以及肌肉中蛋白质的分解,合适的pH下降速度和(或)肌肉收缩的机械保护,对提高牛肉的嫩度和色泽有较大作用。     

猪囊尾蚴头节单链抗体-PE40重组蛋白的表达及抗虫活性分析

将含有抗猪囊尾蚴头节单链抗体基因（ScFv）和绿脓杆菌外毒素基因（PE40）的重组质粒pET28．ScFv-PE40转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,表达产物通过SDS-PAGE和westernblot鉴定,其表达蛋白的相对分子量约为68ku,表达量约占菌体总蛋白的13．8％。将融合蛋白通过金属Ni2^＋亲和层析柱纯化后,目的蛋白纯度在95％以上,可溶性蛋白的回收率约为50％,回收量为5mg／L。本研究所进行的纯化重组蛋白的体外杀伤六钧蚴试验表明,重组蛋白对六钩蚴具有较强的杀灭作用,而且与其剂量呈正相关性。     

赤羽病病毒核衣壳蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

以纯化的重组赤羽病病毒核衣壳蛋白作为诊断抗原，建立了检测牛血清特异性核衣壳蛋白抗体的间接ELISA方法，初步组装成便于现地使用的试剂盒。经对试验条件进行优化，确定最佳抗原包被量为每孔1μg（100μL），样品稀释度为1：100，兔抗牛IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1：8000。经特异性试验和重复性试验证明该方法特异性高、重复性好。应用初步研制的间接ELISA试剂盒和微量中和试验法分别对云南省的89份、内蒙古的100份牛血清样本进行了检测，以中和试验为参照，经统计学处理，得出检测临界值分别为0．411和0．303，2种方法的符合率分别为72．7％（56／77）和91．4％（85／93）。试剂盒在37℃保存3d，对敏感性无明显影响。     

某养鸡场禽霍乱分离菌对常用抗菌药物的敏感性研究

从六安地区某养鸡场禽霍乱病鸡上分离到株禽多杀性巴氏杆菌,采用纸片扩散法和试管稀释法分别测定了青霉素钾、土霉素、硫酸卡那霉素、硫酸庆大霉素、硫酸链霉素、复方新诺明、甲砜霉素、氟哌酸、环丙沙星和恩诺沙星等10种药物对分离菌的体外抗菌活性。结果表明分离到的禽多杀性巴氏杆菌对青霉素钾和土霉素耐药;对硫酸卡那霉素、硫酸庆大霉素、硫酸链霉素、甲砜霉素、氟哌酸敏感;对复方新诺明、环丙沙星和恩诺沙星极敏感。两种测定方法得到的结果一致。因此复方新诺敏、环丙沙星和恩诺沙星可作为目前该发病场防治禽霍乱的首选药物。     

猪萎缩性鼻炎凝集反应抗原的制备及应用

为快速地诊断猪萎缩性鼻炎及监测其免疫状况,本试验在对支气管败血波氏杆菌保存菌种进行复苏和全面鉴定的基础上,制备了猪萎缩性鼻炎凝集反应抗原,经凝集反应试验表明,该抗原在PBS中不发生自凝,与猪传染性胸膜肺炎、猪喘气病和猪瘟的阳性血清均无凝集反应,而对猪萎缩性鼻炎标准阳性血清的凝集效价高达1∶10 240以上,具有较高的特异性和敏感性;对20份免疫母猪所产仔猪血清样本进行检测,检出率为95%.     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp4的表达及其抗血清的制备

根据GenBank中已发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV）HuN4株全基因组序列,设计合成一对引物,对PRRSV HuN4株非结构蛋白Nsp4（Nonstructural protein 4基因进行RT-PCR扩增,克隆到原核表达载体pET30a（＋）中,构建重组表达载体pET30a-Nsp4,经酶切测序鉴定。将pET30a-Nsp4转化表达菌株BL21（DE3）,诱导可表达分子量约为27kDa重组蛋白。Westernblot显示其具有较好的反应原性,经镍离子亲和层析（Ni-NTA）纯化获得了高纯度的可溶性重组蛋白。将纯化的Nsp4蛋白免疫BALB／c小鼠,抗血清ELISA效价达1：16000,Western blot和IFA表明,所制备的抗血清能够特异性识别PRRSV自身表达的Nsp4蛋白。本研究获得了可溶性的PRRSV Nsp4蛋白,制备了Nsp4特异性多抗血清,为进一步研究Nsp4蛋白的亚细胞定位及功能奠定了基础。     

非淹水条件不同翻压量细叶满江红腐解及养分释放特征

为明确不同翻压量细叶满江红(Azolla filiculoides)在非淹水土壤中的腐解过程差异,以玻璃纤维滤纸与尼龙网袋结合的方法开展翻压模拟试验,研究了3个翻压量(萍土质量比为5 g·kg^-1,10 g·kg^-1和15 g·kg^-1)下细叶满江红的腐解及养分释放特征。结果表明：不同翻压量细叶满江红的腐解及养分释放规律均为前期(0～10 d)快、后期(20～60 d)慢,最终(60 d后)的腐解率和养分释放率随翻压量的增加而降低,但养分释放总量随之增加,各翻压量养分释放率均为磷>钾>碳>氮。养分释放率(y)和释放速率(v)与腐解时间(x)的关系分别符合幂函数y=ax^b(P<0.001)和指数衰减模型v=v_oe^-kx(P<0.05)。回归分析表明,增加翻压量可延缓细叶满江红养分的释放,且延缓效果为氮>碳>钾>磷;随着翻压量的增加,各养分的最大释放速率均显著提升(P<0.05),但速率衰减速度也随之加快。...     

假地豆响应缺磷胁迫的代谢衍生物分析

为探究假地豆(Desmodium heterocarpon)对缺磷胁迫的生理和代谢响应,本研究通过水培试验,分析了正常供磷(+P处理)和缺磷(-P处理)对假地豆生长及代谢物积累的影响。结果表明：缺磷胁迫降低了假地豆地上部干重和磷含量,但促进了根系生长。随后,代谢组共检测到假地豆叶片和根系的267个代谢物,可被分为12类。其中,叶片和根系的缺磷胁迫差异累积代谢物(DAMs)均为79个。缺磷处理导致假地豆叶片和根系的原花青素、槲皮素及其衍生物的积累显著增加,而2′-脱氧腺苷5′-单磷酸(dAMP)的积累显著减少。此外,缺磷处理使根系的8个有机酸和4个糖及醇类的积累显著增加。综上,假地豆通过促进根系生长和调整代谢物积累来提高对缺磷胁迫的适应性。本研究将为进一步解析假地豆适应缺磷胁迫的机理提供理论参考。