流式细胞仪快速检测鸭茅与多花黑麦草染色体倍性的研究

以鸭茅（Dactylis glomerata）和多花黑麦草（Lolium multiflorum）不同倍性的种质为材料,对流式细胞仪测定牧草多倍体的技术方法和结果进行评价,旨在利用流式细胞仪技术快速确定供试牧草的染色体倍性。采用根尖染色体计数法确定鸭茅‘北绿’品种和多花黑麦草‘Mammoth B’品种为四倍体,以这两个品种的相对核DNA含量和核内DNA复制的平均周期值作为参照,经流式细胞仪检测表明,鸭茅‘早生绿’品种和PI316209种质材料为四倍体,种质PI237602和PI368880为二倍体,PI316209种质的倍性与种质背景信息所提供的倍性存在差异;多花黑麦草‘Musashi’品种为四倍体,‘Tachimasari’和‘Wasehope Ⅲ’两个品种为二倍体。研究结果为流式细胞仪如何在同一物种范围内检测不同倍性样品提供了依据。     

斯氏艾美耳球虫ITS1-5.8S rRNA-ITS2序列的克隆及PCR检测方法的建立

通过对多种鸡球虫和松鼠球虫18SrRNA和28SrRNA进行序列比对分析,在18SrRNA 3′端和28SrRNA 5′端保守区设计艾美耳属通用引物,以斯氏艾美耳球虫洛阳分离株LY卵囊基因组DNA为模板首次成功克隆到斯氏艾美耳球虫完整的ITS1-5.8SrRNA-ITS2序列,其大小为1 178bp,其中ITS1序列长度为423bp,5.8SrRNA为155bp,ITS2为600bp,斯氏艾美耳球虫LY株ITS1/2序列高度变异,与鸡球虫、啮齿动物球虫的序列相似性低于60%。然后在斯氏艾美耳球虫ITS1/2序列超变区设计种特异引物,建立了灵敏、特异的PCR检测方法。本研究结果将为兔球虫强致病种的临床诊断和揭示兔球虫种群遗传特征提供有效的分子工具。     

Isolation and Identification of Orf Virus from Jiangsu Province and Phylogenetic Analysis of Their B2L Gene

The study was aimed to investigate prevalence of Orf virus (ORFV) in Jiangsu province in recent years and control Orf better. A total of 121 tissue samples were collected in some farms from 2013 to 2015 and subjected to PCR detection, viral isolation and phylogenetic analysis of B2L gene. Four samples were ORFV positive by PCR. The viruses were isolated by passaging in ovine fetal turbinate (OFTu) cells and MDBK cells, and were named as ORFV/Ovis/XZ/Jiangsu/2015/China, ORFV1/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China, ORFV2/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China and ORFV/Ovis/SL/Jiangsu/2015/China,respectively. The B2L gene was amplified and sequenced for the phylogenetic study. The nucleotide homology of these 4 strains was 98.5% to 100.0%. ORFV/Ovis/XZ/Jiangsu/2015/China, ORFV1/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China and ORFV2/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China, gathered into a cluster with SC-JY, GX-YB, JS-FX isolates and the nucleic acid homology of these strains was 97.8% to 100%. ORFV/Ovis/SL/Jiangsu/2015/China gathered into a cluster with LiaoNing, HuB and Gansu isolates, the nucleic acid homology was 98.8% to 98.9%. The nucleic acid homologies of 4 strains and ORFV strain China vaccine was 96.8% to 98.1%. The result showed that the ORFVs in Jiangsu province might be from different source. For controlling the spreading of this virus, it was necessary to carry out deep epidemiological survey in Jiangsu province.     

Optimization of Stachydrine Hydrochloride in Leonurus Extraction Method by HPLC-ELSD

The study was aimed to extract stachydrine hydrochloride in leonurus by HPLC-ELSD,and establish hydrochloride stachydrine determination methods for providing theoretical basis of leonurus extraction process optimization.The chromatographic conditions:venusil HILIC hydrophilic column;Mobile phase was acetonitrile -0.2% acetic acid solution (volume ratio 80:20);The flow rate was 1.0 mL/min;And the column temperature was 30 ℃;The detector was ELSD and drift tube temperature was 80 ℃ with the atomization chamber temperature 50 ℃ and carrier gas volume flow 1.0000 mL/min.The results showed that there was a good linear relationship when the stachydrine hydrochloride content was 0.49 to 4.91 μg (R²=0.9993);There was the highest rate of active ingredients extraction of when the extraction time was 1 h,material to water ratio was 20:1 and extracted for 2 times.Combined with production practice,the final optimization scheme was that the extraction time was 1.5 h,material to water ratio was 20:1 and extracted for 2 times.In summary,the determination of stachydrine hydrochloride in leonurus should use HPLC-ELSD method which had high specificity,good stability,response and reproducibility and easy to handle.This method could provide the theoretical basis for optimizing the leonurus extraction process.     

蒙古马基因组拷贝数变异的研究

拷贝数变异(copy number variation,CNV)在人类和动物基因组中普遍存在,是重要的遗传变异资源.本试验利用比较基因组杂交(comparative genomic hybridization,CGH)芯片对2匹蒙古马和1匹纯血马进行全基因组CNV检测,共检测到210个CNVs,长度6 109 bp至571.87 kb,平均值为37.81 kb,中值为14.45 kb.合并重叠的CNVs,共检测到70个CNV区域(CNV region,CNVR),大小从6 151 bp至573.59 kb,平均值和中值分别为38.93和14.45 kb,总长度为6.19 Mb.经CNV基因注释和功能分析发现,大部分基因与嗅觉受体活性、嗅觉感官知觉、化学刺激的感官知觉、识别和嗅觉传导等功能相关.对5个CNVRs进行qPCR检验,83.33%的qPCR结果与CGH芯片结果一致.通过对蒙古马基因组拷贝数变异的研究,证明CNV在马基因组中普遍存在,为揭示马基因组CNV与重要生物性状的关联性及品种改良奠定了基础.     

双限性四元家蚕新品种“农科2号”选育初报

农科2号是一个综合性状优良的多丝量双限性四元家蚕新品种。本文主要介绍了该品种的选育经过,分析了初步育成期实验室鉴定成绩和浙江省家蚕新品种实验室鉴定成绩,最后总结了该品种的原种和杂交种性状。     

不同种植密度条件下单混种作物的生长曲线

代谢比例理论（Metabolic Scaling Theory）认为,植物小个体或幼苗的生物量和物质能量代谢速率之间的异速生长指数为1,而随着植物个体的逐渐增大,其代谢异速生长指数逐渐趋近于3/4。2012年,Deng等基于代谢比例理论建立了植物小个体的动态生长模型。然而,对于受到种内或种间不同竞争压力的植物个体来说,其生长过程无疑将受到邻体竞争的影响,他们是否仍然遵循上述植物小个体的动态生长模型尚不得而知。本研究针对此科学问题选取了春小麦（Triticum aestivum）、胡麻（Linum usitisimum）、玉米（Zea mays）3种作物分别进行两两组合混合种植以及单独种植,种植密度分别为高、中、低3种不同密度梯度;在作物出苗至成熟期间,分别对株高、基茎、冠幅、生物量、以及不同时期样方植物密度共进行6次跟踪测定。通过对Deng等建立的植物小个体动态生长模型的拟合分析,发现在种植密度梯度下不论单种还是混种,其植物个体的生长曲线均符合植物小个体动态生长模型,且具有相似生态位的物种混种条件下的个体生长状况要好于单种条件下的个体生长状况,而低密度条件下的生长状况亦显著优于中、高密度个体生长状况。总之,不同竞争压力下的植物个体,其生长速率和成熟大小虽有所变化,但其生长曲线均符合上述生长模型的预测。该研究不但对植物小个体生长模型和代谢理论的可靠性进行了进一步的验证,而且还使该理论的应用与发展得到进一步的完善。     

异戊酸对西门塔尔牛瘤胃发酵及尿嘌呤衍生物的影响

选用4头体重(420±8.6)kg,年龄2.5岁装有永久性瘤胃瘘管的中国西门塔尔牛阉牛,采用4×4拉丁方设计,以混合精料和玉米秸秆为基础日粮,研究异戊酸(0、0.02、0.04和0.06 g/kgW)对瘤胃pH、NH3-N、VFA、营养物质降解率及尿嘌呤衍生物浓度的影响。结果表明:0.06 g/kgW组显著降低瘤胃pH(P<0.05),饲喂后3-6 h,0.04 g/kgW组和0.06 g/kgW组NH3-N浓度显著低于对照和0.02 g/kgW组(P<0.05);0.04 g/kgW组和0.06 g/kgW组,豆粕干物质、有机物质和粗蛋白质有效降解率显著低于对照(P<0.05);0.04 g/kgW组玉米秸秆干物质、有机物质、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的有效降解率显著提高(P<0.05),0.04 g/kgW组瘤胃乙酸、丁酸、乙酸/丙酸比例、总挥发性脂肪酸和尿嘌呤衍生物显著增加(P<0.05)。异戊酸的适宜添加水平为0.04g/kgW。     

肉鸡肠道PepT1 mRNA表达的肠段差异性与发育性变化

选用遗传背景相同的1日龄父母代雄性Arbor Acre(AA)鸡和父母代雄性岭南黄肉雏鸡各120羽,采用相对定量RT-PCR方法,以30 d时岭南黄鸡肠道样品为模板,研究肉鸡肠道寡肽转运载体1(Peptide transporter 1,PepT1)mRNA表达的肠段差异性;以AA肉鸡和岭南黄鸡十二指肠和空肠样品为模板,研究不同品种肉鸡肠道PepT1 mRNA表达的发育性变化。结果显示:(1)岭南黄肉鸡肠道PepT1 mRNA的表达丰度从十二指肠、空肠、回肠到结直肠依次降低,其中十二指肠显著高于结直肠(P<0.05);(2)AA鸡和岭南黄肉鸡PepT1 mRNA在十二指肠及空肠中的表达具有相同的发育模式,16 d表达丰度最高,16~44 d逐渐下降,58 d略微回升;不同基因型之间PepT1 mRNA丰度比较,AA鸡和岭南黄肉鸡两品种间PepT1 mRNA的表达没有显著差异(P>0.05)。以上结果说明:(1)随着肠道空间位置的后移,岭南黄肉鸡肠道PepT1 mRNA的表达丰度逐渐降低,其中十二指肠的表达丰度显著高于结直肠(P<0.05);(2)不同品种肉鸡十二指肠及空肠PepT1 mRNA的表达具有相同的发育模式,且同日龄两品种间的表达丰度未见明显差异,表明PepT1 mRNA表达受到发育阶段的调控,但品种间具有稳定性。     

中国苜蓿审定登记品种叶形态特征及变异分析

利用CI-202型叶面积仪研究29个我国审定登记苜蓿品种(Medicago sativa L.)的叶长、叶宽、叶面积、叶周长、叶长/叶宽和叶形指数。结果表明:地方苜蓿品种和育成品种在叶形态方面存在着较大的差异,前者的叶片较后者小;二者叶片形状相似;在6个指标中,叶长宽比变异最大,叶周长变异最小;地方品种的叶面积、叶长、叶周长和叶长宽比的变异系数均高于育成品种,其他2项指标则低于后者;在育成品种中,中兰1号的变异最大,甘农3号苜蓿最小;在地方品种中,蔚县苜蓿的变异最大,河西苜蓿最小;该结果将为今后培育苜蓿新品种提供理论基础。