杜氏盐藻MAPK基因植物表达载体的构建及对烟草的转化

以载体pBI121为基础,经SmaI和BamHI单酶切后,构建了植物表达载体pBI121-MAPK,并通过农杆菌介导采用叶盘转化法将其转入烟草中,经卡那霉素抗性筛选,获得转基因抗性植株。经PCR检测表明pBI121-MAPK已整和到烟草基因组中。     

上海地区多种动物戊型肝炎血清学调查

在上海地区收集血液样品(猪、牛、山羊、马、鸡、鸭、鸽、犬和部分珍禽等)964份,应用双抗原夹心酶联免疫法(DS-ELISA)检测抗HEV抗体。结果表明,猪抗HEV抗体的阳性率为72.18%(301/417),其中母猪阳性率最高,为82.53%(222/269),育成猪阳性率为52.54%(62/118),保育猪阳性率为50.00%(15/30);22个猪场均检测到抗HEV抗体阳性猪,阳性率高于60%的猪场有16个,占阳性猪场的72.72%。在牛、山羊、马、鸡、鸭、鸽等血清中也检测到了抗HEV抗体,阳性率分别为6.00%,24.00%,16.00%,1.90%,12.77%和4.44%,明显低于猪群的阳性率。在宠物犬中检测到了抗体阳性犬,阳性率为17.82%(18/101),说明犬对HEV易感。珍禽中野鸭、火烈鸟对HEV也有一定的敏感性,阳性率分别为6.60%(1/15)和10%(1/10),在孔雀和鸵鸟的血清标本中未检测到HEV抗体。猪群中戊型肝炎病毒存在较普遍,其他与人类密切相关的多种动物也对HEV敏感。     

热应激条件下藿朴蒲苓散对育肥羔羊生长性能、消化性能和血清生化指标的影响

针对夏季绵羊遭受严重热应激现状,研究日粮中添加中草药组方(藿朴蒲苓散)对夏季育肥羔羊生长性能、消化性能、瘤胃发酵参数及血清生化指标的影响。选择200只体重相近、年龄一致的健康育肥公羔羊,随机分为4组,分别饲喂0%(对照组)、0.5%、1.0%和1.5%藿朴蒲苓散,试验期30 d,试验期间舍内温湿指数平均达79.11。试验末检测育肥羔羊生长性能、养分表观消化率、瘤胃发酵参数和血清生化指标。结果表明：1)饲喂0.5%藿朴蒲苓散的羊日增重显著高于对照组(P < 0.01);日饮水量和日采食量在不同组间未表现出显著性差异(P>0.05)。从生理指标分析,饲喂中草药的羊直肠温度和呼吸频率与对照组比较均未表现出显著性差异(P>0.05)。2)0.5%组的干物质(DM)、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、粗蛋白、钙和磷等养分表观消化率均显著高于对照组(P < 0.05),DM消化率较对照组提高7.20%(P < 0.01),而1.0%和1.5%组的消化率较对照组未表现出显著性差异(P>0.05)。3) 从血清生化指标上,3个给药组的生长激素均显著高于对照组(P < 0.05),0.5%组含量最高,较对照组提高16.90%;且0.5%组的甲状腺素含量显著高于其他组(P < 0.05)。4)从瘤胃发酵参数分析,3个给药组总挥发性脂肪酸含量、乙酸和丁酸含量均显著高于对照组(P < 0.05),分别是对照组的1.19~1.30倍、1.18~1.24倍和1.28~1.43倍。综上,本试验条件下,日粮中添加藿朴蒲苓散有助于缓解育肥羔羊的热应激,添加量以0.5%效果更佳。     

鸡大肠杆菌活的非可培养状态发生相关基因克隆与分析

本研究旨在从分子水平探究细菌活的非可培养状态(VBNC)的发生机制。应用冰乙酸和4℃联合诱导条件,使鸡大肠杆菌进入VBNC状态,并利用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)获得VBNC相关基因。结果表明,从VBNC大肠杆菌中筛选得到的3个差异片段与大肠杆菌23S核糖体RNA基因序列具有较高的核苷酸同源性,分别为98%、98%和99%,而氨基酸的同源性也均在97%以上,表明这3个序列是大肠杆菌23S核糖体rRNA基因的部分序列,同时也是与大肠杆菌VBNC状态发生密切相关的基因。由此推知,当正常大肠杆菌在未暴露任何压力下时,其转录水平较低,特别是23S rRNA的某一(些)基因不显示或受到强烈抑制。当进入VBNC状态后,面临生存压力时,这一(些)基因转录水平明显强于正常状态,而核糖体作为蛋白质合成的主要结构与场所,其某些基因也将积极参与新蛋白质的生物合成。     

中国荷斯坦种公牛BLAD遗传缺陷的分子检测及系谱分析

本试验运用限制性片段长度多态性聚合酶链式反应（RFLP-PCR）方法,检测我国荷斯坦种公牛白细胞粘附缺陷（bovine leukocyte adhesion deficiency,BLAD）基因的携带频率。共检测了来自全国14个公牛站的587头种公牛,发现BLAD携带者8头,携带率为1.36%。对现有公牛系谱信息分析显示,携带者公牛来自美国、加拿大和中国,其中6头携带者公牛可以追溯到共同祖先Osborndale Ivanhoe。此外,本研究还对我国荷斯坦牛遗传缺陷的控制和携带者公牛的利用提出建议。     

组织贴块法培养肉鸡肺动脉平滑肌细胞

建立组织贴块法培养原代和传代肉鸡肺动脉平滑肌细胞(PASMC).将1～10日龄雏鸡的肺动脉中膜切成小于1 mm2的组织块,用翻转干贴壁法进行贴块培养.采用形态学和抗α肌动蛋白抗体(α-actin)免疫组化染色法对所培养的细胞进行鉴定.倒置显微镜观察培养的细胞呈梭形,重叠生长,呈典型的"峰-谷"状.抗α-actin单克隆抗体免疫组化染色可见胞浆内有明显的细丝,呈现棕黄色,表明所培养的细胞为肺动脉平滑肌细胞.组织贴块法简便易行,可用于血管病理生理变化研究.     

孕牛血清中早孕因子的分离纯化

采用DEAE－Sepharose(DEAE-琼脂糖凝胶）、CM－Sepharose(CM-琼脂糖凝胶）等离子交换层析、抗孕牛全血清IgG-Sepharose 4B亲和层析等技术，分离纯化妊娠4－5个月健康孕牛全血清中的早孕因子（EPF），用玫瑰花环抑制实验对各阶段产物EPF活性进行检测。结果表明，经层析过柱后的CM－ⅡA提取物有EPF活性。经SDS－PAGE银染显色证实它含有分子量为21、67、80KD的蛋白，实验结果支持21KD的多肽为主要EPF活性物成分。同时实验表明了亲和层析对进一步纯化EPF是可行的。     

胰岛素受体-1在尼罗罗非鱼不同组织中的表达及其对注射葡萄糖的响应

本试验旨在研究胰岛素受体-1(IR-1)在尼罗罗非鱼不同组织中的表达及其对注射葡萄糖的响应。利用PCR扩增的方法从尼罗罗非鱼肌肉中克隆IR-1的c DNA片段,并通过半定量PCR检测,比较IR-1在肌肉、肝脏和心脏中的表达差异。选取体重约为100 g的尼罗罗非鱼160尾,随机分2组,每组4个重复,每个重复20尾。试验组腹腔注射葡萄糖(每100 g体重30 mg),对照组以相同剂量腹腔注射0.7%的无菌生理盐水。在注射前(0 h)和注射后的1、3、6和12 h分别进行采样,测定血浆葡萄糖和胰岛素含量,并通过实时荧光定量PCR检测IR-1在肌肉、心脏和肝脏中的mRNA相对表达量。结果显示:1)克隆出的IR-1 c DNA片段,其Gen Bank登陆号为JN967750,大小为1 979 bp,编码548个氨基酸。序列分析发现,尼罗罗非鱼的IR-1与其他物种比较具有很高的保守性,并具有丰富的酪氨酸激酶特征性序列。2)IR-1在尼罗罗非鱼肌肉、心脏和肝脏中均有较高的表达量,其中在肝脏和肌肉中的表达量基本一致,而在心脏中的表达量相对较低。3)试验组血浆葡萄糖含量在注射葡萄糖1 h后达到最高,并显著高于对照组(P0.05),而后开始下降,3 h后恢复到正常水平;试验组血浆胰岛素含量在葡萄糖注射3 h后达到最高,并显著高于对照组(P0.05),而后开始下降,12 h后恢复到正常水平。试验组肌肉和肝脏中IR-1 mRNA的相对表达量在注射葡萄糖后6 h时达到最高,显著高于对照组(P0.05),在12 h时恢复到正常水平;试验组心脏中IR-1 mRNA的相对表达量在注射葡萄糖后的12 h内没有发生显著变化(P0.05)。结果表明,注射葡萄糖后即刻升高了尼罗罗非鱼的血浆葡萄糖含量,相对于血浆葡萄糖含量的升高,血浆胰岛素含量的升高相对延迟,而肌肉和肝脏中IR-1 mRNA相对表达量的提高又延迟于血浆胰岛素含量的升高,从而加重了尼罗罗非鱼对葡萄糖的代谢负担。     

草地划区轮牧饲养原则及设计

为了推进北方草地可持续集约放牧饲养管理,促进完善划区轮牧实验设计及目的,本文总结了放牧国际划区轮牧的10条原则:单位时间的产草量确定载畜率,拔节期指示春季放牧开始时间,开始恢复再生的时间决定放牧时间天数,放牧间隔日数决定放牧频次,计算确定区块数及区块面积,满足牲畜采食行为,充分利用饲草质量和营养,保证牲畜饮水充足,环境友好、易执行、可操作、有弹性。在此基础上,设计了1个划区轮牧实践参考方案,并论述了划区轮牧目标及管理评价标准,讨论了1条北方草地可持续集约养羊畜牧业的发展途径。