FQ-PCR在转基因产品检测中的应用研究进展

实时荧光定量PCR（real-time fuoreseent quantitative PCR,FQ—PCR）是近年来定量PCR技术中兴起的最新定量检测技术,因其具有灵敏性高、特异性强、结果精确、反应快速、安全可靠等优点,现已广泛应用于医学和生命科学的各个研究领域,论文就实时荧光PCR技术的主要原理、分类方法以及在转基因产品检测中的应用等进行简要综述。     

伪狂犬病毒在潜伏感染猪体内的组织分布

潜伏感染是猪伪狂犬病防治和净化工作中的重要障碍之一。本研究用伪狂犬病毒（PRV）gG-/LacZ＋标记毒株感染经过PRV灭活疫苗免疫的PRV阴性仔猪,建立了猪伪狂犬病毒潜伏感染动物模型,再用地塞米松激活PRV在猪体内的潜伏感染。运用免疫组织化学SABC染色法研究了PRV在潜伏感染猪和潜伏感染激活猪体内部分组织的分布情况。结果显示,阳性细胞主要分布在神经系统的大脑、小脑、脑干、三叉神经和视神经以及非神经系统的扁桃体、肺和肾等部位。阳性细胞数量随着攻毒后时间的发展呈现减少的趋势,而注射地塞米松后,阳性细胞数量在上述组织中显著增加。     

加强奶牛布病综合防治工作刻不容缓

近年来 ,随着人们膳食结构的变化 ,对奶产品消费的需求日益增加 ,带动农村奶牛养殖的积极性空前高涨。２０００年 ,临猗县存栏奶牛仅１００头 ,分布于２０多个养殖户 ,最多的１２头。２００１年奶牛存栏增加到２１２头 ,比上年翻了一番还多 ,其中最多一户养到近３０头。今年以来 ,养奶牛的户更是有增无减 ,预计年底存栏可望达到３５０头。奶业的发展 ,一方面为农业产业结构调整提供了更大的发展空间 ,另一方面 ,也促进了城乡人民生活质量的提高。“一杯奶可以强壮一个民族”。在这个口号的感召下 ,饮用鲜奶的人群在不断扩大 ,老人和孩子每天…     

应用PCR检测鸭肠炎病毒弱毒在鸡胚体内的分布

根据GenBank已发表的鸭肠炎病毒（DEV）UL6基因的部分核苷酸序列，设计并合成一对引物．以鸭肠炎病毒中国商品化疫苗毒蚀斑纯化株（DEV Clone-03）DNA为模板，经PCR扩增出预期516bp的目的片段。将此片段插入克隆载体质粒pMD18-T，并进行序列测定，序列比较结果显示，此段序列与参考序列完全一致。用PCR检测DEV Clone-03在鸡胚体内的分布情况显示，接毒死亡鸡胚的尿囊膜、心、肝、脾、肺、肾和肌肉皮肤内均存在病毒。PCR敏感试验表明此方法可以检测到100μL尿囊液中提取的10^-3稀释的病毒DNA，相当于0．2个EID50病毒量的DNA。     

肉鸭实验性锰缺乏症及高磷对缺锰影响的病理学研究

６９只一日龄天府肉鸭随机分为三组，各喂以基础、高磷、对照。试验分为两个阶段，第一阶（０－４周）结束时，每组各留２只鸭继续进行第二阶段（５－２０或２６周）试验。缺锰组第一周开始发病，第二周迅速达到高峰。     

Folin-Ciocaileu比色法测定菊苣中多酚的含量

本研究采用Folin Ciocalteu比色法对菊苣（Cichorium intybus）中的多酚含量进行测定。以没食子酸为对照品,检测波长为765 nm。结果表明,在0～5 μg·mL-1范围内,没食子酸吸光度与其质量浓度呈良好的线性关系（R2=0.999 7）;对稳定性、精密度、重现性、回收率进行了试验,相对标准偏差（RSD）为 0.23%～1.60%。该方法简便、快速、准确,是检测菊苣中多酚的可靠方法。根据拟合的线性回归方程进行菊苣各器官多酚的定量测定,结果表明,菊苣根、茎、叶、花和种子中的多酚含量分别为6.71、24.00、32.03、20.34和10.17 mg·g-1。     

玉米、豆粕中胆碱生物学效价的研究

用肉仔鸡进行为期1周(8～14日龄)的生长反应试验 ,用标准曲线及斜率比法测定了玉米、豆粕中胆碱生物学效价。按单因子试验设计 ,用艾维因商品代8日龄肉仔鸡160只 ,随机分为10个处理组 ,每组4个重复、每个重复4只鸡。通过在玉米淀粉酪蛋白纯合饲粮中分别添加胆碱(由氯化胆碱提供)0、300、600和900mg/kg,作出生长反应曲线。用玉米分别占42.21 %、72.24 %的两个玉米半纯合饲粮和豆粕比例分别为16.50 %、24.83 %的两个豆粕半纯合饲粮饲喂肉仔鸡 ,测出玉米和豆粕中胆碱生物学效价分别为57.47 %和45.97 %。用两个玉米 +豆粕混合日粮作加性效应检验 ,证明玉米、豆粕中胆碱生物学效价可加性良好     

云南半细毛羊毛囊干细胞生物学特性分析

为研究云南半细毛羊毛囊干细胞（hair follicle stem cells,HFSCs）的生物学特性,采用组织块法分离培养云南半细毛羊HFSCs,并对其细胞形态、生长动力学、冷冻与复苏、染色体核型等生物学特性进行分析.结果表明：HFSCs为贴壁生长,体积小,核质比高,呈典型的铺路石状,在显微镜下折光性强、胞体透亮.细胞生长曲线为“S”型.冻存前细胞活率98.2％,复苏后细胞活率96.4％.染色体中正常二倍体数目2n=54,其中,长染色体中有3对为中着丝点染色体,23对为端着丝点染色体,X染色体为最大的近端着丝点染色体,Y染色体为最小的亚中着丝点染色体.所得细胞呈现典型的HFSCs特征,细胞活性好,细胞系为稳定的二倍体细胞系.     

Potential of auxotrophic Edwardsiella tarda double-knockout mutant as a delivery vector for DNA vaccine in olive flounder (Paralichthys olivaceus)

To evaluate potential of an auxotrophic Edwardsiella tarda mutant (Δalr Δasd E. tarda) as a delivery vehicle for DNA vaccine in fish, olive flounder (Paralichthys olivaceus) were immunized with the E. tarda mutant harboring plasmids (pG02-ASD-CMV-eGFP) for eukaryotic expression of the enhanced green fluorescent protein (eGFP) gene through either intraperitoneal (i.p.) or oral route, and the expression of eGFP in the internal organs and generation of antibody against eGFP in fish were analyzed. In fish i.p. injected with 2×10(7)CFU/fish of Δalr Δasd E. tarda harboring pG02-ASD-CMV-eGFP, expression of eGFP was detected in liver, kidney, and spleen from 1 day to 28 days post-injection. In fish orally administered with 1×10(9)CFU/fish of the bacteria, the eGFP band was detected in liver, kidney, and spleen from 1 day to 14 days post-administration, whereas, in intestine, the band was detected only at 1 day post-administration. Either oral or i.p. immunization of olive flounder with recombinant E. tarda that carried eGFP-expressing eukaryotic plasmids was successful to induce humoral adaptive immunity against not only E. tarda that was used as a delivery vehicle but also eGFP that was used as the reporter protein of DNA vaccine, suggesting attenuated E. tarda-vectored DNA vaccine has a potential to be used as a combined vaccine against infectious diseases in fish.     

牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立

为研究快速定量检测牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的方法,试验通过优化抗原表达条件等步骤,在大肠杆菌原核表达系统中表达可溶性的3A-3B融合蛋白,并基于纯化的可溶性融合蛋白建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒。结果表明:建立的方法能够检测牛血清中的口蹄疫病毒非结构蛋白抗体,敏感性高,特异性强,对其他相关的牛类病原无交叉反应,其组内与组间变异系数分别低于10%和15%,具有良好的重复性。对300份临床牛血清样品进行检测,同Procheck公司的口蹄疫非结构蛋白抗体试剂盒进行比较,阳性样品符合率96%,阴性样品符合率93.3%,总的符合率95.7%。重复性试验组内与组间变异系数均小于10%。文章首次建立了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法,同传统的ELISA方法相比,该检测方法特异性相当、敏感性更高,操作更简单、快速,具有较高的应用推广价值。