口蹄疫病毒非结构蛋白2C基因在昆虫细胞中的表达及应用

研究口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP) 2C在区分灭活疫苗免疫动物与自然感染动物方面的意义.本研究将FMDV NSP 2C基因,克隆到穿梭载体pFast-bac- HT-B,将其转入含骨架载体Bacmid的DH10Bac,经蓝白斑筛选得到重组骨架质粒Bacmid-2C.将Bacmid-2C转染昆虫细胞Sf9,鉴定正确后,经3次增殖获得高滴度的P-3代病毒后,在High Five细胞中进行目的蛋白的表达.SDS-PAGE结果显示在High Five细胞中得到了相对分子质量约为38.93 ku的目的蛋白2C,Western blotting及Dot-ELISA结果显示,该表达产物对FMDV感染动物阳性血清有良好的反应性.以电泳纯化的2C蛋白为抗原建立间接ELISA,检测健康非免疫动物、免疫动物及FM-DV试验感染动物血清,结果表明2C-ELISA不但能区分免疫动物和感染动物的血清,而且还能检测FMDV感染早期动物血清中的2C抗体.说明昆虫细胞表达的2C蛋白可作为FMDV疫苗免疫动物与自然感染动物鉴别诊断的良好抗原.2C基因在Bac-to-Bac系统中的成功表达为建立通过检测几种NSP抗体,筛查感染及隐性带毒动物,净化畜群的方法奠定了基础.     

呼伦贝尔沙化草地人工固沙植物种间生态位关系研究

采用样方法对呼伦贝尔地区沙化草地不同恢复年限人工播种固沙区进行调查,并计算其主要植物的重要值、生态位体积及生态位重叠值,以研究呼伦贝尔沙化草地人工固沙植物群落特征及演替状况。结果表明:人工固沙植物冰草(Agropyron pectinatum(Bieb.)Beauv.)的平均生态位体积在时间尺度上,呈持续增加趋势,是改良沙化草地的优良草种;小麦(Triticum aestivum L.)与小叶锦鸡儿(Caragana microphylla Lam.)、冰草与羊柴(Hedysa-rum laeveMaxim)生态位重叠值为0.9213和0.7512,在演替过程中具较强的竞争作用。自然恢复植物与人工播种植物间,多数生态位重叠值不高。自然恢复多年生植物大针茅(Stipa grandis P.Smirn.)、糙隐子草(C1eistogenes squarrosa(Trin.)Keng)等逐渐出现,表明该地区植被群落结构向稳定共存的人工-天然植被群落结构方向发展。     

两株鸭源H1N3亚型流感病毒的分离鉴定和遗传进化分析

从2008年10月至2010年7月,每月定期在华东地区扬州活禽市场采集健康家鸭泄殖腔拭子,并从中分离鉴定了14株H1亚型禽流感病毒。对其中的2株病毒进行全基因测序和遗传演化分析,发现2株病毒均属于H1N3低致病性禽流感病毒。各基因遗传进化分析均与类禽猪流感的分离株的亲缘关系相对较近;除血凝素(haemagglutini,HA)基因外,其它所有的基因均发生了不同程度基因重组。其中H5N1病毒参与了多聚酶蛋白PB1与PB2基因的重组,H9N2病毒参与了PA基因的重组。     

早期猪胎儿卵巢的组织学观察

母猪怀孕后33-61d期间,是胎猪卵母细胞发生的关键阶段。为掌握这一时期卵巢上组织细胞的发育变化,试验采集妊娠33、40、46、54、61d的雌性胎猪卵巢进行苏木精-伊红染色。结果表明,妊娠33d胎猪卵巢表面上皮由1-2层细胞构成,实质见到卵原细胞和髓质索结构;妊娠40d时出现卵原细胞共质体结构和前细线期卵母细胞,髓质索状结构断裂;妊娠46d共质体样结构增多,卵母细胞进入前细线期和细线期。髓质索断裂成片段;妊娠54d时表面上皮由单层细胞构成,卵巢皮、髓可分,皮质中层见到合胞体样卵母细胞群,髓质相邻的皮质深层有一些原始卵泡正在形成;妊娠61d胎猪卵巢皮、髓界限清晰,皮质中层是大量合胞体样卵母细胞群,皮质深层出现了较多的原始卵泡,髓质中卵泡结构退化,卵母细胞发生核固缩。     

典型草原三种蝗虫种群死亡率和竞争的研究

通过田间罩笼试验研究内蒙古典型草原3种蝗虫成虫种群死亡率和竞争。供试蝗虫分别为:亚洲小车蝗(Oedaleus asiaticus B.Bienko),宽须蚁蝗(Myrmeleotettix palpapis(Zub.))和短星翅蝗(Calliptamus abbreviatus Ikonn.)。结果表明:亚洲小车蝗和宽须蚁蝗食性相似,喜食禾本科牧草,而短星翅蝗则喜食菊科牧草,为了获取更多食物,短星翅蝗种内竞争强于亚洲小车蝗和宽须蚁蝗;30 d后在3种密度(24、16、8头/m²)下,亚洲小车蝗存活数均高于另两种,其竞争也强于另两种;3种蝗虫24头/m²死亡率均高于80%,其中短星翅蝗达86%,说明在高密度下有很强的种内竞争,随着密度的减少死亡率降低,种内竞争也随之减少;3种蝗虫混养时,亚洲小车蝗和宽须蚁蝗的死亡率比在单种时有所降低,而短星翅蝗死亡率比单种时则有所增加,表明亚洲小车蝗和宽须蚁蝗有较强的种间竞争,短星翅蝗的竞争较弱。     

山羊子宫内肽能神经分布及妊娠时的变化

采用免疫组化方法，研究了山羊子宫内含P物质（SP）和含血管活性肠肽（VIP）神经的分布。结果，妊娠及未妊娠山羊子宫颈内有粗细不等的神经束行经于外膜和肌层中，神经分支形成丛状分布于血管壁，子宫颈部未见SP神经元胞体及VIP神经元胞体；未妊娠山羊子宫角内SP神经和VIP神经均呈丛状围绕血管并分布于血管壁；妊娠中期的孕角和非孕角均有胎盘形成，除胎盘内无神经分布外，SP神经及VIP神经同样分支形成丛状分布于血管壁。结果提示，山羊子宫内SP神经和VIP神经主要支配子宫内血管，妊娠时除胎盘内无神经分布外，SP神经及VIP神经的分布无明显变化。     

新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞体外培养体系的建立

利用微量液体组织块贴壁法原代培养分离新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞,进行常规传代培养、冷冻和复苏;通过接触抑制和解除抑制研究该类细胞的增殖潜力,免疫荧光进行鉴定;并通过脂质体介导对分离到的新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞分别进行EGFP-N1和DsRed-N1基因转染。结果成功分离到新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞,体外可以大量传代和冷冻,目前已经传至50代以上,生长良好;冷冻复苏和接触抑制解除后仍可以正常培养和传代;细胞免疫荧光检测,波形蛋白表达阳性,角形蛋白表达阴性;转染48h后荧光显微镜下可以观察到绿色荧光和红色荧光,表明瞬时转染新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞可以获得成功,其中转染DsRed-N1基因的新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞已经传至60代以上。结果表明,本试验成功建立了新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞的体外培养体系,在体外能稳定培养和传代,并可以成功获得转基因的新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞。     

马麝呼吸系统疾病病原学研究

采用病毒、真菌、细菌学及血清学等检验方法,对甘肃兴隆山马麝以出血性肺炎或纤维素性-化脓坏死性肺炎为主要特征的呼吸系统疾病的病原进行了系统研究。结果表明,马麝的呼吸系统疾病是由巴氏杆菌（P.multocida）单独感染或与大肠杆菌（E.coli）、绿脓杆菌（P.aeruginosa）混合感染的一种普通传染性疾病。药敏试验表明,这3种细菌均对苄星青霉素、硫酸链霉素、复方磺胺甲噁唑片、酒石酸泰乐菌素敏感,而对麦迪霉素不敏感。     

口蹄疫病毒Asial/JS/China/2005株基因组全长感染性克隆的构建

利用长距离RT-PCR技术扩增病毒基因组3'端覆盖口蹄疫病毒Asial/JS/China/2005株近全长的3个片段(共约7.5 kb),并利用单一酶切位点将其分别克隆到pBlueseriptSK+载体上.利用融合PCR扩增到基因组5'端含有15个C碱基的基因片段(约700 bp),并将其连接至pGEM-T载体.最后将这4个片段的阳性克隆装配至剔除T7启动子的低拷贝载体pcDNA3.1/Zeo(+)中构建该病毒株的全长cDNA克隆.以构建的FMDV Asial/JS/China/2005株全长cDNA为模板,使用TTRNA聚合酶在体外转录得到病毒RNA,通过脂质体将其导入BHK细胞获得拯救病毒.对收获的病毒分别用RT-PCR、间接免疫荧光、电子显微镜观察和乳鼠致病性分析结果证实,通过体外转录获得了具有感染性的口蹄疫病毒.该株感染性克隆的构建为深入研究口蹄疫病毒的致病机制及研制新型疫苗等奠定了基础.     

畜禽场空气污染对人畜健康的影响

<正>随着畜禽规模化养殖生产的发展及公众对环境要求的提高,畜禽场的空气污染问题已引起国内外有关机构和研究者的重视。欧美国家规模化养殖发展较我国早,在20世纪80年代他们就已经展开了畜禽场污染气体对动物与人体健康影响的研究[1]。近几年,畜禽场空气污染问题更是倍受重视,其研究已经涉及畜禽场空气污染物成分分析、污染物去除方法研究、