Smad泛素化调节因子2siRNA的筛选及转染原代肾小管上皮细胞条件的优化简

试验旨在优化Smad泛素化调节因子2（Smurf2） siRNA最佳转染条件,筛选最佳siRNA干扰片段,进而实现对Smurf2基因的瞬时沉默,为研究Smurf2基因在马兜铃酸肾病（aristolochic acid nephrohathy,AAN）中的作用奠定基础。本研究通过培养小鼠原代肾小管上皮细胞（renal tubular epithelial cells,RTECs）,并以脂质体Lipofectamine^TM 2000为转染介质,将Smurf2 siRNA转染入RTECs;通过观察绿色荧光的表达量及Real-time PCR反应优化转染条件,转染后Real-time PCR检测mRNA表达抑制率。CCK-8法检测Smurf2 siRNA复合物对RTECs活性的影响;同时,用Real-time PCR和Western blotting检测不同位点Smurf2 siRNA对Smurf2 表达的影响。结果显示,当Lipofectamine ^TM 2000与siRNA比例为1.5 μL∶30 pmol时,转染效率最高,为70%～80%;Smurf2-619 siRNA干扰效果最明显;与正常组相比,转染siRNA组的Smurf2蛋白表达水平显著下降（P<0.05）。最终确定了Smurf2 siRNA最佳转染条件,其中Smurf2-619 siRNA对Smurf2 表达的抑制率最高。     

甘肃临夏地区不同规模奶牛养殖的效益分析

通过对临夏地区奶牛小养殖户、养殖大户、行了综合分析。数据表明,小养殖户养殖成本较低;小养殖户和养殖大户在鲜奶销售渠道上有竞争优势;合或组成合作社逐渐向养殖大户和养殖场过渡。养殖场的摸底调查,笔者对不同规模养殖的经济效益进养殖场的奶牛单产高于小养殖户和养殖大户,养殖场较小养殖户在整个奶产业中处于劣势地位,今后应通过联     

猪圆环病毒2型核酸疫苗的小鼠免疫保护试验

为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)核酸疫苗在小鼠攻毒试验中的免疫保护效果,以PCV-2 GXWZ-1株为模板,扩增出ORF2基因及其截短基因8个片段(A(ORF2)、B(51-100aa)、C(101-150aa)、D(181-235aa)、E(151-200aa)、F(51-150aa)、G(101-235aa)、H(51-235aa)),将其插入到pcDNA3.0载体中,构建出真核表达质粒,并将其转染至PK-15细胞,用间接免疫荧光试验检测其瞬时表达情况。将试验小鼠随机分成9组,其中免疫组7组,阴阳性对照各1组,将纯化的真核表达质粒对小鼠进行组合免疫;二免后,用经处理过的PCV-2 GXWZ-2株阳性病料悬液腹腔注射免疫组和非免疫对照组小鼠,阴性对照组用生理盐水腹腔注射;其后进行体重记录、病理切片制作及PCR检测。结果表明:共有6个真核表达质粒成功在PK-15细胞中表达。在攻毒后的3周内,阳性对照组小鼠PCR诊断均为阳性;免疫组中,部分组小鼠在攻毒后第1周或在第2周为阳性,到第3周时各免疫组小鼠全部为阴性;阴性对照组始终为阴性。免疫组在病理保护学方面明显优于非免疫对照组,非免疫对照组的体重增长速率略低于免疫组和阴性对照组。由此可见猪圆环病毒2型核酸疫苗在小鼠攻毒试验中有明显的保护作用。     

马链球菌兽疫亚种类M蛋白亚单位疫苗小鼠免疫试验

为获得控制猪链球菌病安全高效的疫苗，本试验进行了马链球菌兽疫亚种类M蛋白亚单位疫苗的研制。应用热酸法提取马链球菌兽疫亚种ATCC35246株类M蛋白，并分别采用羟基磷灰石（HAT）层析和冷酒精沉淀法进行纯化，结果得到较纯的类M蛋白。用热酸提取的粗制类M蛋白、2种纯化的类M蛋白及全菌苗免疫小鼠，结果保护率分别为92％（11／12）、100％（12／12）、100％（12／12）和83％（10／12），表明类M蛋白亚单位疫苗有进一步开发的必要。     

八种肉用犬的繁殖性能研究

本文通过对狼犬、鞑子犬、青龙犬、大丹犬、英卡犬、沙皮犬、藏鳌、拿波伦犬等8个品种192只犬繁殖性能研究。发现这八种犬的发情季节多集中在3月份和10～11月份，发情持续时间一般为14d，交配最佳时间为11d。配种次数与窝产仔数间不存在相关。     

1株高致病性血凝性脑脊髓炎病毒的分离与鉴定

利用细胞培养方法从临床表现神经症状的死亡仔猪脑组织内分离获得1株病毒,同时对该病毒进行电镜负染观察、昆明种小鼠致病性试验、RT-PCR检测和部分基因测序分析。电镜观察可见细胞培养物中有大量的直径约115 nm的冠状病毒样粒子;接种病毒的小鼠均出现典型的神经症状,死亡率100%;血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)特异性引物RT-PCR扩增结果阳性;其S基因序列与GenBank中登录的HEV-67 N相应基因序列的同源性高达99.6%。结果表明,分离的病毒为猪血凝性脑脊髓炎病毒,分离株暂命名为HEV-CC-2007。     

粉纹夜蛾培养细胞对家蚕微孢子虫的吞噬及与孢壁蛋白的关系

解明家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)入侵宿主细胞的相关因素,有助于深入研究Nb对家蚕的侵染机制。利用激光共聚焦显微镜观察Nb孢子接种粉纹夜蛾(Trichoplusiani,Tn)培养细胞48h后孢子的分布状态和培养细胞的生长情况,并对接种Nb孢子后的Tn培养细胞培养物总蛋白进行SDS-PAGE分析,证实经0.2mol/LKOH预处理的Nb孢子可以被Tn培养细胞所吞噬。对Nb孢子孢壁蛋白的SDS-PAGE分析显示,Nb孢子经KOH预处理后,大小为80kD和12kD的孢壁蛋白带缺失或明显减弱,30kD的孢壁蛋白带丰度降低。推测KOH预处理使Nb孢子部分孢壁蛋白被分解(部分或完全)或使蛋白结构发生变化,由此影响了Nb孢子与Tn培养细胞的相互作用关系,有利于Tn培养细胞对Nb孢子的吞噬。     

奶牛乳房炎发泡药剂的研究Ⅱ.发泡药剂的研制与动物试验

研究了奶牛乳房炎发泡药剂的制备方法及其质量控制标准。该药剂是以碳酸氢钠和枸橼酸作发泡剂，研制药物的发泡量为原药液体积的8-12倍。经动物乳房给药试验证实，该药剂安全、无刺激性、在乳腺内分布效果明显优于常规剂型，室温保存有效期为2年。     

阿维菌素驱除兔蛲虫试验报告

朝阳市近年养兔业得到了很大发展,兔寄生虫病对养兔业的危害已引起人们重视。在朝阳市兔体寄生虫调查中发现,兔蛲虫对兔的感染率很高,从外贸冷冻加工厂、康宁医院兔场、朝阳县一粮库兔场、龙城区西大营子集市、双塔区凌北集市购入的233只兔剖检所得,兔蛲虫感染率为81.1%(189/233),感染强度为50(2~1 220条),感染兔均有不同程度的肠炎变化,严重感染者毛焦、消瘦,生长缓慢,易继发其它疾病,严重影响养兔的经济效益,对养兔业发展造成威胁。为寻求一种较好的驱治兔蛲虫的药物,2005年9~10月作者利用康宁医院兔场和航发兔场饲养的兔及从市郊各集市购…     

中国牦牛科学技术发展回顾与展望

本文扼要总结了我国牦牛科技的发展.总体而言,可划分为四个阶段:解放前、解放后到文革、1978～1995、1995年至今.在第四阶段(1995年至今),召开了四届国际牦牛学术讨论会,并成立了国际牦牛信息中心和全国牦牛品种协会(筹),是中国牦牛科学技术水平发展最快的时期.过去几十年,在品种资源、杂交改良、繁殖技术、野牦牛驯化及利用、牦牛育种,生物学特性、营养与饲料等方面取得了长足发展,中国牦牛的科学技术发展走在了世界最前列.今后应重点推广牦牛品种改良、营养调控、畜产品加工、草地生产系统优化等实用技术.