利用花托与花序轴组培快繁青花菜雄性不育株的研究

以青花菜的花托和花序轴作外植体进行组织培养,可成功诱导出苗,并以此来保存突变不育株。试验表明:不同的青花菜品种在同一种培养基上诱导率差别很大(2.3%~83.3%),05A-743-2在MS+BA 0.2mg/L+KT0.2mg/L+NAA0.01mg/L培养基上花托诱导率最高可达83.3%,花序轴诱导率达72.2%;用MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.002mg/L继代培养,苗正常、健壮,增殖系数可达5.98;用1/2MS+IBA 0.02mg/L进行生根培养,生根率达91.7%,平均根数13.0条;利用全光照自动喷雾过渡培养组培苗,成活率达100%,组培苗可瓶外生根,效果比瓶内生根好。     

司帕沙星在雏鸡体内药代动力学及残留的研究

选用30日龄健康海兰鸡65只,按5mg／kg体重口服给予司帕沙星,定期采样,以高效液相色谱法测定血浆、肝、肾、心、肺和肌肉中司帕沙星的含量,研究司帕沙星在鸡体内的药动学与残留。结果表明:司帕沙星在血液中经时过程符合一级吸收二室开放模型,其主要动力学参数如下:t1／2α0.9585h,t1／2β11.7447h,tmax0,6514 h,Cmax0.5271 μg／ml,AUC1.7908mg／L／h。肾脏、心脏的药时数据符合一级吸收二项指数方程,其主要动力学参数分别为:t1/2Ka0.3733 h、0.1530h,t1／2k1.3007 h、2.1013h,tmax1.01420h、0.6239 h,Cmax2.1104μg／ml、1.6721 μg／ml,AUC6.51764 mg／L／h、6.2286mg／L／h。司帕沙星在肝脏、肺脏、肌肉中的经时过程符合一级吸收三项指数方程,主要动力学参数分别为t1/2α0.3672 h、0.6156 h、1.5835 h,t1/2β3.9998 h、15.0271 h、12.0103h,tmax0.7458 h、0.7322 h、1.3726 h,Cmax4.4709μg／ml、2.5267μg／ml、0.9760μg／ml,AUC20.893 mg／L／h,27.242 mg／L／h、9.7943mg/L/h。建议司帕沙星在鸡体内的休药期为7d。     

北京郊区猪戊型肝炎流行初步调查

用间接ELISA试剂盒对北京市郊区所采集的174份猪血清样品进行了抗体检测,结果显示,其抗体总阳性率达62.1%。针对戊型肝炎病毒(HEV)ORF2/ORF3重叠区设计了简并引物,采用巢式RT-PCR对随即采取的少量猪粪便样品进行了抗原检测。结果表明,部分粪便样品中存在HEV。     

猪多杀性巴氏杆菌环介导等温扩增检测方法的建立

为建立猪多杀性巴氏杆菌(Pm)的快速检测方法,本研究以Pm的PlpB基因序列为靶基因设计特异性引物,建立了Pm特异性的环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法.经反应条件优化,确定反应条件为63℃,20 min.检测结果显示,建立的LAMP检测方法具有良好的特异性,灵敏度为25 cfu/mL;与大肠杆菌、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、沙门氏菌无任何交叉反应.采用建立的LAMP方法与常规PCR方法对临床54份分离样品进行检测,检测结果为31份为阳性,23份为阴性,二者符合率为100％.该方法的建立为Pm在临床上的快速检测提供了一种新的技术手段.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的诊断及其分子特点

采用流行病学调查、临床症状观察、病理学检查、病毒分离、分离毒株测序以及遗传演化分析的方法,对北京及其周边地区4个猪场剖检的4头猪进行分析。结果:流行病学和临床症状表现为急性高热性传染病;病理学观察为非化脓性脑炎和间质性肺炎等多器官严重的病理变化;RT-PCR和病毒分离确定该疫情的主要病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。与典型PRRSV感染不同的是:成年猪感染率达50%以上,病死率达80%以上;PRRSV分离株全基因序列分析表明属于PRRSV北美洲型,特别是PRRSV NSP2不连续缺失30个氨基酸,说明此次流行的PRRSV毒株可能为高致病性毒株。     

猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗诱导小鼠免疫保护效果的观察

重组表达猪传染性胸膜肺炎放线杆菌6种主要毒力因子基因:apxⅠ、apxⅡ、apxⅢ、apxⅣ、apfa和omp,以重组蛋白rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rOMP组合免疫小鼠作为试验I组,重组蛋白rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢr、OMPr、ApxⅣ和rApfa组合免疫小鼠作为试验Ⅱ组,PBS为对照组,分3次免疫小鼠,采用背部皮下多点注射,每次间隔2周,免疫剂量为0.2 mL/只,3免后1周分别以APP1型菌Shope 4074株(5×109cfu)和APP2型菌S1536株(5×1010cfu)进行攻毒试验。通过小鼠保护率与抗体效价的相关性研究、肺部病理变化及肺脏细菌的分布情况等指标进行综合评价。结果显示,试验Ⅰ组4种重组蛋白特异性抗体水平显著高于其他两组(P<0.05),对APP1型菌攻毒的保护率(9/10)明显高于试验Ⅱ组(5/10)和对照组(0/8),小鼠的免疫保护率与抗体效价之间存在显著正相关;且该组对APP2型菌攻毒的保护作用(无肺脏损伤)也明显优于其它两组(典型肺部损伤)。间接免疫荧光试验表明试验Ⅰ组对肺脏细菌的清除效果也明显优于其他两组。本试验揭示试验Ⅰ组对不同血清型APP攻击能够提供很好的交叉保护作用,从而为猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研制提供参考。     

PRRSV河北地方分离株ORF5基因序列分析

为了分析河北秦皇岛和唐山部分地区流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因变异情况,对采集自秦唐部分地区在2009年的临床发病猪肺组织,提取其RNA,通过RT-PCR扩增样本中PRRSV的ORF5全序列,并对其进行生物信息学分析.应用DNA Star软件分析序列,系统进化分析表明,它们与国内2006年-20...     

羊常用粗饲料干物质和粗蛋白的瘤胃降解特性研究

试验通过尼龙袋法研究了羊草、苜蓿干草、玉米秸秆、尿素-秸秆和NaOH-秸秆5种粗饲料在绵羊瘤胃内干物质和粗蛋白的降解特性。结果表明:5种粗饲料的有效降解率均在20%以上,其中以苜蓿干草最高。粗饲料干物质的有效降解率与干物质的快速降解部分呈显著强的正相关,与慢速降解部分和不可降解部分都呈弱的负相关,与慢速降解部分的降解速率呈较强的正相关。粗饲料粗蛋白的有效降解率与快速降解部分呈极显著强的正相关,与不可降解部分呈强的负相关。5种粗饲料的干物质和粗蛋白的瘤胃降解率均表现出较强的正相关,其中苜蓿干草的相关系数高达0.9435(P0.0001)。5种粗饲料的干物质和粗蛋白的瘤胃降解率相关性,由高到低依次为苜蓿干草羊草NaOH-秸秆尿素-秸秆玉米秸秆(P0.005)。     

粪便中华支睾吸虫虫卵DNA的提取及PCR检测方法的优化

华支睾吸虫病又称肝吸虫病,是由华支睾吸虫寄生在人或多种动物胆管内所引起的一种人兽共患病.目前,华支睾吸虫的分离鉴定主要集中在成虫或囊蚴,对虫卵的研究甚少.采用分子生物学方法成功建立了感染人粪便中华支睾吸虫虫卵DNA的提取方法及华支睾吸虫基因片段PCR检测方法,同时对PCR反应条件进行优化,为从分子水平上检测华支睾吸虫虫卵提供科学依据.     

胶体金试纸条半定量检测鸡蛋中磺胺嘧啶残留

采用竞争反应模式建立了鸡蛋中磺胺嘧啶(SD)残留的胶体金试纸条半定量检测方法。该试纸条由吸样材料、玻璃纤维、硝酸纤维素膜、吸水材料组成。用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,胶体金标记SD单克隆抗体;SD竞争物包被于硝酸纤维素膜,制成胶体金试纸条。该试纸条在15min内可完成对SD残留的半定量检测,读条系统判定灵敏度为5μg/L,肉眼判定检测限为10μg/L,与其他磺胺类药物无交叉反应,在鸡蛋中的回收率为71%~96.7%;用试纸条与ELISA对来自动物试验的52份鸡蛋样品进行对比检测,以10、100ng/g为cutoff值,两者阳性(大于100ng/g)符合率为100%,弱阳性(10~100ng/g)符合率为72.7%,阴性(小于10ng/g)符合率为84.2%,两者总符合率为94.2%。该方法灵敏度高,简便快速,无需特殊仪器设备,有良好的开发应用前景。