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991.
猪轮状病毒中国分离株JL94 VP7基因的克隆与序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
用MA104细胞培养增殖了轮状病毒地方分离株JL94,利用一对根据Genebank中已发表的轮状病毒VP7基因cDNA序列而设计并合成的引物,通过反转录-聚合酶链反应(RT—PCR)从JL94毒株扩增出VP7基因全长cDNA。将其插人pMD18-T载体中,构建了重组质粒pMD18-T—JL94/VP7,并对其进行了Hind Ⅲ,HindⅡ和BamH I的单、双酶切初步鉴定及其核苷酸序列测定,证明克隆的pMD18-T—JL94/VP7为轮状病毒的VP7基因。通过核苷酸序列比较,JL94/VP7与A群猪轮状病毒C134/VP7、OSU/VP7、ICB2185/VP7、YM/VP7核苷酸序列同源性分别为87%、99%、74%和83%。 相似文献
992.
993.
磺胺二甲基嘧啶残留检测ELISA方法的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
本实验对磺胺二甲嘧啶残留检测ELISA反应的各种条件进行了筛选优化,建立了直接竞争ELISA检测方法,该法最小检出量为1.97ng/mL,检测范围5ng/mL~200ng/mL,样品添加回收率为73.20%~91.16%,批内变异系数<5.5%,批间变异系数<9%。与美国进口Max Signal试剂盒相比较,灵敏度为100%,特异性为96.0%,两者的符合率为98.3%。 相似文献
994.
猪多杀性巴氏杆菌环介导等温扩增检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
为建立猪多杀性巴氏杆菌(Pm)的快速检测方法,本研究以Pm的PlpB基因序列为靶基因设计特异性引物,建立了Pm特异性的环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法.经反应条件优化,确定反应条件为63℃,20 min.检测结果显示,建立的LAMP检测方法具有良好的特异性,灵敏度为25 cfu/mL;与大肠杆菌、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、沙门氏菌无任何交叉反应.采用建立的LAMP方法与常规PCR方法对临床54份分离样品进行检测,检测结果为31份为阳性,23份为阴性,二者符合率为100%.该方法的建立为Pm在临床上的快速检测提供了一种新的技术手段. 相似文献
995.
996.
利用DNA重组技术将酵母Ure2p朊蛋白结构域(UPD)基因插入牛朊蛋白(BPrP)表达质粒pET-PrP中,构建原核表达载体pET-PrP-UPD.阳性质粒转化宿主菌BL21 (DE3),在IPTG诱导下获得高效表达.Westernblot检测表明表达的重组蛋白与单克隆抗体6H4呈现特异性反应,且纯化的PrP-UPD融合蛋白在体外具有聚集成淀粉样纤维、抵抗蛋白酶K消化等朊毒体的结构特点.利用纯化的PrP-UPD免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经克隆和筛选,获得3株稳定分泌抗重组PrP单抗的杂交瘤细胞,分别命名为1G3、3A4、4D1,其中1G3分泌的单抗能识别细胞型牛朊蛋白,其Ig亚类为IgG2b,腹水ELISA效价为1×105,Western blot表明该单抗具有较强的特异性. 相似文献
997.
采用流行病学调查、临床症状观察、病理学检查、病毒分离、分离毒株测序以及遗传演化分析的方法,对北京及其周边地区4个猪场剖检的4头猪进行分析。结果:流行病学和临床症状表现为急性高热性传染病;病理学观察为非化脓性脑炎和间质性肺炎等多器官严重的病理变化;RT-PCR和病毒分离确定该疫情的主要病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。与典型PRRSV感染不同的是:成年猪感染率达50%以上,病死率达80%以上;PRRSV分离株全基因序列分析表明属于PRRSV北美洲型,特别是PRRSV NSP2不连续缺失30个氨基酸,说明此次流行的PRRSV毒株可能为高致病性毒株。 相似文献
998.
重组表达猪传染性胸膜肺炎放线杆菌6种主要毒力因子基因:apxⅠ、apxⅡ、apxⅢ、apxⅣ、apfa和omp,以重组蛋白rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rOMP组合免疫小鼠作为试验I组,重组蛋白rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢr、OMPr、ApxⅣ和rApfa组合免疫小鼠作为试验Ⅱ组,PBS为对照组,分3次免疫小鼠,采用背部皮下多点注射,每次间隔2周,免疫剂量为0.2 mL/只,3免后1周分别以APP1型菌Shope 4074株(5×109cfu)和APP2型菌S1536株(5×1010cfu)进行攻毒试验。通过小鼠保护率与抗体效价的相关性研究、肺部病理变化及肺脏细菌的分布情况等指标进行综合评价。结果显示,试验Ⅰ组4种重组蛋白特异性抗体水平显著高于其他两组(P<0.05),对APP1型菌攻毒的保护率(9/10)明显高于试验Ⅱ组(5/10)和对照组(0/8),小鼠的免疫保护率与抗体效价之间存在显著正相关;且该组对APP2型菌攻毒的保护作用(无肺脏损伤)也明显优于其它两组(典型肺部损伤)。间接免疫荧光试验表明试验Ⅰ组对肺脏细菌的清除效果也明显优于其他两组。本试验揭示试验Ⅰ组对不同血清型APP攻击能够提供很好的交叉保护作用,从而为猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研制提供参考。 相似文献
999.
本试验旨在探讨高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)对地方品种猪的致病特点。将HP-PRRSV经滴鼻感染4月龄健康莱芜黑猪,观察接毒后的表现,于接毒不同时期颈静脉采血,ELISA试剂盒(IDEXX)检测外周血血清抗体水平的动态变化,定期剖杀,采集相关的器官组织制备组织切片,HE染色,观察不同组织的动态病理学变化,免疫组化染色检测病原在不同组织中的分布。结果表明,攻毒后第2天便出现一定的临床症状,但持续2d后症状就基本消失,感染猪未见死亡。攻毒后5d便可检测到抗体阳性(1/7),14d抗体达峰值。攻毒后3d便可见间质性肺炎,轻微的病毒性脑炎,实质器官颗粒变性;攻毒后7d出现典型的间质性肺炎、淋巴组织坏死、各段肠管大量嗜酸性粒细胞浸润及实质器官出现空泡变性。在攻毒后2~4周内,肺一直表现典型的间质性肺炎,病毒性脑炎逐渐加重,肾上腺变性坏死,胰腺轻微的炎性细胞浸润,甲状腺轻微充血、出血,实质器官出现严重的空泡变性。PRRSV抗原阳性信号出现在淋巴组织(淋巴结、脾、扁桃体)、气管、心、肝、肺、肾、胃、十二指肠、空肠、回肠、甲状腺、肾上腺、颌下腺、子宫、大脑及小脑内;盲肠、结肠、直肠、膀胱、胰腺、输卵管及卵巢均未见到阳性信号。阳性信号主要位于感染细胞的胞质中,偶尔出现在核内。试验结果表明:HP-PRRSV人工感染4月龄莱芜黑猪具有广泛的组织嗜性,并导致广泛的组织损伤,但临床症状表现轻微,未见死亡现象,4月龄莱芜黑猪对HP-PRRSV感染具有较强的抵抗力。试验结果为进一步研究HP-PRRSV对我国地方猪与外源品种猪的致病性差异提供了一定的理论依据。 相似文献
1000.
为了解我国健康猪群中猪博卡病毒(PBoV)的感染状况,从屠宰场内采集猪淋巴结、脾脏和扁桃体等组织,分别采用套式PCR进行猪博卡病毒1型和2型的检测。结果表明,28份样品中有2份样品用猪博卡病毒2型引物可扩增出439 bp的特异性条带;结构蛋白VP1基因序列分析表明,这2份样品均为猪博卡病毒2型感染,且其VP1序列与猪博卡病毒参考株HM053694的同源性最高,分别达93.8%和93.3%,同属PBoV1/PBoV2进化分支;而与另一个猪博卡病毒V6/V7进化分支的同源性仅为35.1%~39.2%,距离较远。 相似文献