弓形虫MIC3基因真核表达质粒的构建及在 IBRS-2细胞内的表达

采用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的基因,克隆入pMD18-T载体,转化至E.coliDH5α感受态细胞,经抗性平板筛选、小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定后,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1。然后筛选含有目的基因的重组质粒,并转染IBRS-2细胞,在G418压力下进行筛选,利用SDS-PAGE、Western blot和ELISA检测表达情况。结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank上相应基因序列(AJ132530)的一致性达99.9%,构建的真核表达质粒pcMIC3能在转染的IBRS-2细胞中表达分子量约为39.2ku的MIC3,且表达的蛋白质具有良好的免疫活性,为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定了基础。     

猪轮状病毒感染研究进展

猪轮状病毒感染是由猪轮状病毒引起的一种传染病,多发生于仔猪。其典型症状为腹泻。此病分布广泛,引起严重经济损失。本文对病原学、流行病学、临床症状、发病机理、免疫、诊断、防制等方面的研究进展进行了综述。     

抗独特型抗体及其在兽医领域中的研究进展

1974年,瑞典免疫学家Jerne提出免疫网络学说,认为,机体免疫系统内的各个细胞克隆,通过自我识别,相互刺激,或相互制约,构成一个动态平衡的网络结构.构成网络结构的物质基础,就是位于抗体分子上的独特型和抗独特型.此后一系列实验证明了其理论的正确性和科学性,独特型抗体成为了一个新的研究热点,开辟了疾病预防、诊断、治疗的新方向,如今抗独特型抗体不仅在人类疾病的受体寻找、肿瘤癌症治疗、免疫、诊断等方面得到广泛应用,而且在兽医领域也得到同样的发展.本文综述了抗独特型抗体的产生原理、制备和检测、模拟抗原的分子基础、在动物疫病中的应用以及存在的问题.     

2020年养猪科技新技术盘点

"物极必反,困则思变",非洲猪瘟和新冠疫情没有让养猪行业止步不前,反而促使人们去尽最大努力探索养猪科技新技术.无抗替代技术、发酵混合饲料技术、区块链+畜产品溯源技术和生猪期货合约上市等承压前行,在不平凡的2020年交上了不俗的答卷.     

猪接种PRRSV Nsp2Δ1882-2241弱毒株后血清细胞因子的变化特征

为了解Nsp2Δ1882-2241缺失后弱化的高致病性PRRSV（TJM株）对宿主免疫学应答的刺激机理,本研究分析了免疫猪血清中的细胞因子及变化规律。将14头4周龄易感仔猪随机分为3组：第1组接种PRRSV TJM-F92株,为免疫组;第2组接种高致病性PRRSV TJ-F5毒株,为攻毒组;第3组不接种疫苗及病毒,为对照组。接种后28d,用TJ-F5毒株攻击试验猪,于不同时间点采集血样,用ELISA法测定血清中的PRRSV抗体、IL-2、IL-10、IL-12p40、TNF-α、IFN-α和IFN-β水平。结果显示：（1）与对照组和攻毒组相比,免疫组猪IL-12p40水平持续上调,于免疫后28d受PRRSV强毒攻击后,其水平开始缓慢降低,但仍高于攻毒后的对照组。（2）免疫组IL-2水平在接种疫苗后的前21d内无明显升高且低于攻毒组,在受到强毒攻击后其IL-2水平却有明显升高。（3）免疫组IL-10水平与对照组无明显差别,并在免疫14d后一直显著低于攻毒组（P〈0.01）。（4）免疫组接种疫苗后的前21d内,TNF-α水平保持稳定,28d明显上调。攻毒组TNF-α水平0～28d一直低于对照组,且在21d达到最低（P〈0.01）。免疫组在28d受强毒攻击后,其TNF-α水平下降且在攻毒7d时最为明显（P〈0.01）,此后恢复到正常水平。（5）免疫组免疫后28d时IFN-α水平升高,在受到强毒攻击后再次显著降低（P〈0.01）。免疫组IFN-β水平一直低于对照组和攻毒组,不因强毒攻击而变化。以上结果提示,IL-12上调在PRRSV免疫保护中起明显作用;另外,上调TNF-α及下调IL-10都是基因缺失疫苗发挥效力的潜在机制。     

复方二氯异氰尿酸钠和双季铵碘中和剂中和效果考察

采用悬液定量杀菌试验程序，对两种中和剂配方进行了中和剂鉴定试验，以便对复方二氯异氰尿酸钠和双季铵碘两种消毒剂的消毒效果进行评价。试验结果表明，中和剂配方Ⅰ（含3％吐温-80、0．5％硫代硫酸钠）对复方二氯异氰尿酸钠，中和剂配方Ⅲ（含3％吐温-80、0．5％亚硫酸钠、适量卵磷脂）对双季铵碘均有良好的中和效果，且末见中和剂配方Ⅰ、中和剂配方Ⅲ及其相应中和产物对指示菌金黄色葡萄球菌的生长有明显影响。因此认为，中和剂配方Ⅰ、中和剂配方Ⅲ可分别用于复方二氯异氰尿酸钠和双季铵碘消毒剂消毒效果的鉴定。     

重组GP5AB蛋白间接ELISA检测PRRSV抗体方法的研究

利用GST-GP5AB重组蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化,建立了用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的间接ELISA方法。抗原最适包被浓度为2μg/mL,最佳封闭液为0.15%BSA,37℃封闭2 h后,再4℃封闭24 h,血清最适稀释度为1∶200,其作用时间为60m in,酶标抗体最适稀释度为1∶20 000,最适作用时间为90 m in,37℃显色10 m in,S/P≥0.284为阳性,S/P≤0.26为阴性,介于二者之间为可疑的判定标准。该抗原与猪其他4种临床症状类似的疾病的阳性血清反应呈阴性。批内和批间重复性试验结果,变异系数均小于7%,表明本方法具有较好的特异性和重复性。应用本方法初步检测了一些疫苗免疫仔猪血清样品,并与重组N蛋白和PRRSV抗原同时进行比较,结果显示3种抗原检测的结果基本一致。     

3种生长素对蓝叶忍冬枝条扦插生根的影响

以蓝叶忍冬(Lonicera korolkowi‘Zabclii’)为材料,研究了2种不同浓度(50、100 mg·L-1)的生长素吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA)和萘乙酸(NAA)在不同处理时间(30、60 min),对蓝叶忍冬生根部位、根数和根长的影响。结果表明,3种生长素对蓝叶忍冬枝条扦插生根都产生了一定的影响,IAA处理增加蓝叶忍冬的生根率和根数,但抑制根的伸长。NAA处理对蓝叶忍冬生根效果不明显,仅对根长有一定的促进作用。与对照相比,50 mg·L-1IBA处理60min显著增加了蓝叶忍冬的生根率和根数(P0.05)。另外,3种生长素对蓝叶忍冬枝条生根部位也有影响,3种生长素处理都可以增加皮层生根数,对切口愈伤组织的生根有一定的抑制作用。其中IBA处理对生根部位影响的效果最明显,100 mg·L-1处理30 min可以显著提高皮层生根数并抑制愈伤组织生根(P0.05)。综合比较3种生长素促进生根的效果,IBA最好,IAA和NAA次之。     

美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光RT-PCR检测方法的建立

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）美洲株的基因序列,设计U1和U6两套PCR引物和荧光探针,建立了扩增U1和U6基因的荧光RT-PCR用于检测美洲型PRRSV。用10倍倍比稀释的质粒DNA、cDNA、RNA进行扩增以检测其灵敏度,同时对猪瘟（HCV）、猪伪狂犬（PRV）等7种病毒进行特异性检测。结果显示建立的扩增U1和U6基因的荧光RT-PCR可用于检测PRRSV,其灵敏度为10个拷贝的质粒DNA,而与HCV等非PRRSV无交叉反应。本研究所建立的荧光RT-PCR具有快速、灵敏、准确、低污染等优点,可用于PRRSV样品的检测。     

新疆兵团昭苏垦区家畜包虫病防控情况调查

为了解新疆昭苏垦区包虫病防控工作近况,对新疆生产建设兵团农四师76团和77团饲养的家犬和家畜进行包虫病调查。结果表明,两个团场分别饲养犬1 004条和620条,养殖家畜58 253头(只)和64 848头(只);犬感染细粒棘球绦虫感染率为9.76%(98/1 004)和15.98%(81/507);77团家畜感染包虫病感染率26.45%(338/1 278)。