猪繁殖与呼吸综合征病毒R98弱毒株的分离鉴定与ORFs3～7基因特性研究

应用特异性引物从猪血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）中扩增出S1蛋白基因,PCR产物纯化后克隆入pGEM-T载体中,得到重组质粒pTS1。用EcoRI和Not I双酶切pTS1,回收目的基因S1片段将其定向克隆到pPICZαA中,构建重组质粒pPICZαAS1。用BstXI酶切pPICZαAS1使其线性化,并电转至感受态毕赤酵母细胞GS115。PCR法鉴定阳性重组子,用1%甲醇诱导表达后,进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果显示,在酵母菌培养基上清中检测到相对分子质量为73000的重组蛋白,且该重组蛋白可与HEV多克隆抗体发生特异性血清学反应,表明HEV的S1蛋白片段在毕赤酵母中获得成功表达。     

人HIF-1α基因重组减毒沙门氏菌载体的构建及稳定性检测

利用RT-PCR方法从低氧预处理的A549细胞中获得HIF-1α基因片段,将其定向插入pIRES-SEQ质粒NheⅠ、MLuⅠ2个酶切位点之间,得到真核表达载体pIRES-HIF-1α;采用电转化方法将其电转化入减毒沙门氏菌Ty21α中,获得重组减毒沙门氏菌菌株TPH;转染A549细胞,RT-PCR法检测HIF-1α基因表达,ELISA方法检测HIF-1α蛋白表达;TPH菌株在氨苄青霉素(+)和氨苄青霉素(-)LB培养板上分别传代40代,每10代提取质粒进行PCR及酶切鉴定.结果表明:试验成功构建了携带HIF-1α基因的重组减毒沙门氏菌TPH,其可在体外细胞中稳定表达HIF-1α基因及蛋白,TPH可稳定遗传.     

城市动物园规划设计三元论——以广州动物园为例

以广州动物园规划为例,提出城市动物园规划设计的三元论。动物园规划设计应满足动物和游客的需求,采用以动物为本、融于自然,以人为本、归于自然,以自然环境为本、人与动物相融合的设计理念。阐述动物园设计必须从动物、人、环境三元素出发,建立动物园规划设计框架系统,为城市和野生动物园规划设计提供参考和借鉴作用。     

黄河三角洲水稻生产现状及发展对策——以东营市为例

针对东营市水稻生产现状,分析在品种、田间管理、产业发展等方面存在的问题,提出开展耐盐优质高产新品种选育研究、推进科技成果创新与集成、加强基础设施建设、培育和壮大新型农业经营主体、推进稻米品牌产业化等发展对策。     

棉田黄萎病菌致病型结构初步研究

棉花黄萎病是棉花生产中的主要病害之一,广泛分布于世界各产棉国.控制该病的猖獗危害,已成为棉花生产可持续发展的主要问题[1].利用不同抗性的棉花品种对棉黄萎病菌的选择作用,从棉田中分离获得不同的黄萎病菌菌系,在温室中采用2个抗病性差异明显的品种对其致病力进行测定,以明确同一块棉田是否存在不同致病力菌系.     

环境因素影响牦母牛最高月产奶量的研究

牦母牛的最高月产奶量是具有重要育种价值和生产意义的数量性状,研究影响最高月产奶量的环境因素,可以通过提高月产奶量来实现提高牦母牛产奶性能的目的.孕前期体重和管理因素对最高月产奶量的影响极显著(p＜0.01),孕后期简单补饲的影响显著p＜0.05).孕前期体重因素中最差水平组可减少最高月产奶量达 18.3kg(49.75%,p＜0.01),管理因素中最好水平组比最差水平组增加最高月产奶量达14.9kg(5.92%,p＜0.01),孕后期简单补饲组比对照组增加最高月产奶量达5.6kg(11.9,p＜0.05).     

新疆牛梨形虫病单一与混合感染的流行病学调查

【目的】分别以纯化的重组蛋白GST-MSA-2c、GST-HSP20、GST-Tams1作为抗原,对2006～2008年全疆14个地州的牛梨形虫病流行病学进行调查。【方法】使用三种已建立的牛梨形虫病间接ELISA检测方法。【结果】(1)在三年采集的1340份血清样品中共检出牛梨形虫阳性血清280例,感染率为20.90%,其中牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、泰勒梨形虫单一感染率分别为8.21%(23/280)、15.71%(44/280)和43.93%(123/280)。(2)新疆牛梨形虫混合感染上升,为15.35%,甚至出现个别的三重感染。(3)2008年在流行区内的牛梨形虫感染率高达74%(37/50),单一感染和混合感染分别64.85%(24/37)和35.15%(13/37),流行区的混合感染率明显增高。【结论】新疆牛梨形病的流行病学特征是感染率逐年增加,疫区不断扩大,混合感染使疫情趋于复杂化。这是新疆首次利用血清学方法对全疆牛梨形虫病进行大规模的流行病学调查。     

犬传染性肝炎病毒Hexon基因原核表达条件的优化与表达蛋白的活性

[目的]为了提高犬传染性肝炎Hexon蛋白基因在大肠杆菌中的表达量,研究Hexon基因蛋白的最佳表达条件和表达蛋白的活性.[方法]在大肠杆菌菌株BL21(DE3)培养过程中,选择诱导剂(IPTG)的最佳加入时间、诱导剂(IFTG)浓度、诱导时间以及不同温度条件观察对Hexon融合蛋白表达的影响,以确定最佳表达条件,并用Westem-blot检测重组蛋白的生物活性.[结果]大肠杆菌BL21(DE3)在37℃培养2.25h后,添加终浓度为2.0 mmol/L的IPTG,27℃培养8 h,Hexon重组蛋白表达量最高(1.67mg/mL),所表达的重组蛋白能与犬传染性肝炎阳性血清相结合.[结论]在高浓度IPTG诱导和冷培养条件下,Hexon蛋白基因的表达量最高,表达出的重组蛋白具有很好的反应原性,为进一步研究六邻体蛋白的作用机理及亚单位疫苗的研究提供了实验基础.     

Immunization of BALB/c mice with Brucella abortus 2308ΔwbkA confers protection against wild-type infection

Brucellosis is a zoonotic disease that causes animal and human diseases. Vaccination is a major measure for prevention of brucellosis, but it is currently not possible to distinguish vaccinated animals from those that have been naturally infected. Therefore, in this study, we constructed the Brucella (B.) abortus 2380 wbkA mutant (2308ΔwbkA) and evaluated its virulence. The survival of 2308ΔwbkA was attenuated in murine macrophage (RAW 264.7) and BALB/c mice, and it induced high protective immunity in mice. The wbkA mutant elicited an anti-Brucella-specific immunoglobulin G response and induced the secretion of gamma interferon. Antibodies to 2308ΔwbkA could be detected in sera from mice, implying the potential for use of this protein as a diagnostic antigen. The WbkA antigen would allow serological differentiation between infected and vaccinated animals. These results suggest that 2308ΔwbkA is a potential attenuated vaccine against 16M. This vaccine will be further evaluated in sheep.     

菱形新概念车转向性能分析

采用线性三轮模型分析了菱形新概念车的转向性能,并推导出转向稳定性因子和横摆角速度增益传递函数.通过8自由度非线性模型的仿真,分析了菱形车的阶跃转向响应特性.仿真结果表明,菱形车在高、低速时具有快速、稳定的转向响应特性.与相关统计数据对比分析表明,采用菱形方式布置车轮除了在低速时具有灵活的转向特性外,高速时具有与传统车轮布置方式相当的动态转向响应特性.