增强型绿荧光蛋白突变体mut4EGFP在大肠杆菌中的表达与纯化

增强型绿荧光蛋白突变体mut4EGFP(EGFP／V163A／S175G)是一种发光能力更强、更稳定的新型绿色荧光蛋白。为了获得大量高纯度的蛋白,将mUT4EGFP基因插入原核表达载体pTWINl中,使之与几丁质结合域(CBD)-内含肽(intein)融合,获得原核表达质粒pTWIN-M4。将pTWIN-M4转化大肠杆菌BL21(DE3)plyss,IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳分析,结果显示,CBD-intein-mut4EGFP融合蛋白在BL21(DE3)plysS中获得高效表达并以可溶性蛋白的形式存在。进一步采用几丁质柱纯化系统对表达产物进行纯化,得到了高纯度的mut4EGFP．     

伪狂犬病流行现状及我国应采取的防制措施

１伪狂犬病的流行现状伪狂犬病（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ,Ａｕｊｅｓｚｋｙ′ｓｄｉｓｅａ－ｓｅ）在自然条件下能感染猪、牛、羊、犬、猫、兔、鼠、野猪、貂、熊、狐等动物。除猪以外,其他动物感染伪狂犬病病毒后,具有发热、奇痒和急性脑脊髓炎等典型症状,均为致死...     

应用微量中和试验进行猪伪狂犬病血清学调查

应用细胞培养微量中和试验（固定病毒稀释血清法）对来自２４个猪场共４２６份血清进行了猪伪狂犬病血清学调查。共检出阳性血清１７１份,血清阳性率达４０．１％,出现血清阳性的猪场有２０个,占所检测猪场的８３．３％,说明伪狂犬病在我省及我国流行相当严重。对其中５０份血清的中和指数（固定血清稀释病毒法）进行了检测,结果中和效价大于１∶２血清的中和指数都在１０２．５以上。     

我国猪群中多杀性巴氏杆菌的基因型分析

本研究旨在了解我国猪群中流行的多杀性巴氏杆菌(Pm)的主要基因型。利用荚膜基因分型、脂多糖(LPS)基因分型、多位点序列分型(MLST)对2013年12月—2017年12月4年间来源于我国各地区规模化猪场患有疑似呼吸系统疾病的病死猪肺、鼻拭子、气管、肝等样品中分离鉴定的Pm进行基因型分析,并对23种主要毒力基因进行检测。结果表明,当前在我国猪群中流行的Pm的荚膜基因型为A(48.85%)、D(42.75%)、F(2.67%),优势基因型为A和D;LPS基因型为L3(25.00%)和L6(75.00%)型,优势基因型为L6;MLST基因型为ST3(21.25%)、ST10(27.50%)、ST11(42.50%)、ST12(2.50%)、ST16(2.50%)、ST74(1.25%)及ST75(2.50%),优势基因型为ST3、ST10和ST11。如果将荚膜基因型、LPS基因型和MLST基因型组合起来看,当前在我国猪群中流行的Pm的主要基因型为荚膜:脂多糖:MLST基因型A:L3:ST3(20.00%)、A:L6:ST10(26.25%)及D:L6:ST11(42.50%)。毒力基因检测的结果发现部分毒力基因的分布表现出一定的"基因型偏好性"。结果提示,D:L6:ST11是我国猪群中流行的多杀性巴氏杆菌的主要基因型,可能与我国猪群中由多杀性巴氏杆菌导致的呼吸道疾病密切相关。     

乳胶凝集试验检测鸡传染性鼻炎血清抗体的研究

将Ａ型和Ｃ型鸡副嗜血杆菌培养后,菌落计数,离心计数,离心后用０．０１ＭｐＨ７．４磷酸盐缓冲液洗涤菌体２次。经过对致敏温度、致敏时间、致敏乳胶的菌体浓度及菌体的处理方式等条件的选择,建立了检测鸡传染性鼻炎血清抗体的乳胶凝集试验。与琼脂扩散试验相比,特异性一致,但更加敏感,且操作简便、快速。结果说明,该方法有较好的应用前景,尤其适用于本病的现场快速诊断。     

五里湖湖滨带水体富营养化程度的灰色聚类法评价

通过监测五里湖湖滨带水体2007年全年的水质状况,将各水质监测指标进行多元线性回归分析,选定总磷（TP）、总氮（TN）、化学需氧量（CODMn）、氨氮（NH4^＋-N）四项指标作为聚类指标,参照中国湖泊富营养化评价标准,将富营养化分为4个级别作为4个灰类,将指标监测数据和灰类值进行无量纲化处理后,通过灰色聚类法对五里湖水体春、夏、秋、冬4季及年均的富营养化程度进行了评价。结果表明：2007年一年内,五里湖湖滨带水体都处于富营养（Ⅲ）级状态。通过对评价结果进行分析和探讨,揭示了五里湖富营养化发展的趋势,为今后五里湖环境保护和水体富营养化治理提供了科学依据。     

施氮量对马铃薯块茎淀粉积累及相关超微结构的调节效应

为明确施氮量对不同淀粉型马铃薯块茎淀粉积累及相关超微结构的调节效应,选用高淀粉品种‘克新22号’和低淀粉品种‘克新19号’,设置0（CK）、75、150、225和300 kg/hm²共5个施氮量处理,测定不同施氮量处理的块茎淀粉含量、淀粉产量以及块茎淀粉粒、淀粉体的个数和粒径,并分析了马铃薯块茎淀粉含量与淀粉粒、淀粉体之间的关系。结果表明：施氮量在0~300 kg/hm²时,‘克新22号’和‘克新19号’品种块茎的淀粉含量随施氮量的增加呈不断降低的趋势。其中施氮量为0（CK）kg/hm²时,2个品种的块茎淀粉含量均达最高。2个品种块茎的淀粉产量随施氮量的增加则呈先增加后降低的趋势。其中施氮量为150 kg/hm²时,高淀粉品种‘克新22号’块茎的淀粉产量达到最高,为11.27 t/hm²;而低淀粉品种‘克新19号’施氮量为225 kg/hm²时,块茎淀粉产量达到最高,为8.99 t/hm²。2个品种块茎淀粉粒和淀粉体的数量均随施氮量增加呈不断减少的趋势,淀粉粒和淀粉体的平均粒径随施氮量增加均呈不断变小的趋势,2个品种块茎微观淀粉粒的含量随施氮量增加呈不断降低的趋势,与块茎的淀粉含量随施氮量的增加呈不断降低的趋势一致。2个品种块茎中粒径（d）<30 μm的淀粉粒和淀粉体所占比例均随施氮量的增加呈不断增加的趋势,d≥30~50和≥50 μm的淀粉粒和淀粉体所占比例均随施氮量的增加呈不断降低的趋势。其中施氮量为0（CK）kg/hm²时,2个品种块茎中淀粉粒和淀粉体的数量最多、粒径最大,d<30 μm的淀粉粒和淀粉体所占比例最低,d≥30~50和≥50 μm的淀粉粒和淀粉体所占比例最高。综上所述,不同淀粉型马铃薯块茎淀粉积累及相关超微结构受施氮量的影响较大;应根据不同淀粉型马铃薯块茎的淀粉含量、淀粉产量及淀粉粒和淀粉体等超微结构的变化确定品种适宜的施氮量。     

抗伪狂犬病毒Ea株单克隆抗体的制备及鉴定

将伪狂犬病毒Ea株纯化后免疫雌性Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/O的骨髓瘤细胞融合,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)进行筛选,获得了2株抗PRV的单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为3G7E3和4A6F5,其细胞培养上清及小鼠腹水效价(ELISA)分别为1:212、1:212及1:100×212、1:100×212。特异性试验和免疫荧光结果显示,3G7E3和4A6F5仅与PRV反应,而与PPV、PRRSV、JEV和HCV等病毒不发生交叉反应;用单抗建立的夹心ELISA试验能检出伪狂犬病毒。表明本研究所获得的2株单抗是PRV特异性的。这2株分泌抗PRV单抗的杂交瘤细胞株的获得为进一步建立准确快速的抗原检测方法奠定了基础。     

鸡源大肠杆菌的质粒及染色体DNA分析

为研究鸡源大肠杆菌分子流行病学规律,选用４０株鸡源大肠杆菌（均含有质粒）,应用指纹法对其质粒及染色体ＤＮＡ进行了分析。对菌株的质粒图谱比较表明,来源相同的菌株,其图谱相同或相似;来源不同的菌株,其图谱一般不同。选取ＨｉｎｄⅢ对质粒ＤＮＡ进行酶切,进一步证实了质粒图谱分析的结果。对菌株质粒型（ｐｌａｓｍｉｄｔｙｐｅ,ＰＴ）进行数值聚类分析,得出ＰＴｓ间的聚类树状图,更直观地反映出菌株间的遗传关系。试验中还发现,多数鸡源大肠杆菌含有大质粒,它们可能含有毒力相关基因。选用ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲＩ分别对染色体ＤＮＡ进行酶切,均能够产生较易于识别的酶切图谱,菌株的图谱与其来源也具有一致性     

应用复合多聚酶链反应方法快速鉴别伪狂犬病弱毒疫苗与野毒

本研究根据伪狂犬病病毒（ＰｒＶ）共有ｇＢ和疫苗株缺失的ｇＥ基因序列分别设计合成１对通用（ＰＢ１／ＰＢ２）和１对鉴别引物（ＰＥ１／ＰＥ２）,以在我国广泛使用的疫苗株Ｂａｒｔｈａ－Ｋ６１及从国内外收集的野毒株Ｓ、ＳＵ、Ｆ、Ｌ、Ｙ、Ｍｉｎ－Ａ、Ｓｈｏｐｅ、Ｓ（川）、ＳＬ１、１０＃、ＥＡ（鄂Ａ）ＤＮＡ为模板在同一反应管中同时扩增ｇＢ和ｇＥ基因序列建立了复合多聚酶链反应（ＰＣＲ）方法。ＰＣＲ产物经２．０％琼