猪流行性腹泻病毒重组核蛋白作为检测抗原的初步应用

为确定猪流行性腹泻病毒（PEDV）重组N蛋白作为检测抗原的可应用性,将N基因克隆至pProHTa载体,构建重组表达载体,而后转化大肠杆菌BL21感受态细胞并诱导表达。将表达的可溶性融合蛋白经Ni^＋亲和层析柱纯化,并对其进行Western blot、dot-ELISA、间接ELISA等免疫学实验分析。结果表明,重组N蛋白具有良好的抗原性和较高的敏感性,与其他腹泻病病毒的抗血清无交叉反应。因此,猪流行性腹泻病毒重组N蛋白作为检测抗原在监测病毒感染及评价疫苗免疫效果方面具有较高的应用价值,是代替全病毒作为检测抗原的良好抗择。     

猪脑心肌炎病毒的分离与鉴定

从规模化猪场疑似病例组织病料中分离到5株脑心肌炎病毒（EMCV），对其中的2株（EMCV BJC3和EMCV HB1）进行了系统鉴定。结果表明，病毒粒子大小约为27nm，呈圆形；2株病毒均不耐酸，对氯仿不敏感，对胰蛋白酶敏感性有所不同，60℃加热1h可被灭活，二价阳离子对病毒没有明显的保护作用。用EMCV多克隆抗体作间接免疫荧光，分离毒株感染的BHK-21细胞的胞浆中可见特异性荧光。对分离毒株进行了VP1和3D基因的扩增和序列测定，结果表明，2个毒株VP1基因的核苷酸序列同源性为99．49％，氨基酸序列的同源性为98．46％，与GenBank中EMCV毒株的核苷酸序列同源性介于81．61％～99．59％，氨基酸序列同源性在95．5％以上；3D基因扩增片段序列与其它毒株的核苷酸与氨基酸序列同源性均为100％。基于VP1基因的系统进化树表明，2株分离毒均位于进化树的主干上，变异度不大。由此表明，EMCV感染已在我国猪场存在。     

规模化猪场脑心肌炎病毒感染的血清学调查

脑心肌炎病毒(EMCV)可引起猪的脑炎、心肌炎和母猪繁殖障碍,该病已在世界上多个国家暴发和流行。我国对EMCV及其所致疾病的研究工作还处于起步阶段,为了揭示EMCV在我国规模化猪场的感染情况,我们应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对2005-2006年间采集自全国13个省市46个规模化猪场的3250份血清样本进行了EMCV抗体检测,结果显示,各省阳性率在39.64%~90%之间,平均抗体阳性率为72%,监测的46个猪场都存在EMCV感染,猪场感染阳性率为100%;对不同生长阶段猪群检测结果表明,EMCV抗体阳性率随猪龄的增长而升高,且不同生长阶段猪抗体阳性率差异极显著;成年公猪的抗体阳性率高于成年母猪。本项调查表明,我国规模化猪场已经普遍感染EMCV,这应引起我国养猪业警惕,并做好该病的综合防控。     

玉米胚芽粕对鹅营养价值的评定

为了探索玉米胚芽粕对鹅的营养价值和不同方法、不同鹅品种对其真代谢能、常规养分利用率的差异,分别选取150日龄健康五龙鹅和青农灰鹅公鹅各24只,各设4个处理组,每个处理组6只,试验鹅单笼饲养,每天强饲120 g,采用全收粪法进行测定.结果表明,五龙鹅、青农灰鹅种内4个处理组之间真代谢能(THE)、粗蛋白(CP)、粗脂肪(EE),A基酸(AA),中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)、粗纤维(CF),it,(Ca),磷 (P)利用率差异均不显著(P>0.05).两品种之间,第2,4处理组青农灰鹅THE、CP真利用率显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于五龙鹅;第3,4处理组青农灰鹅EE利用率显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于五龙鹅.第1,3或4处理组五龙鹅NDF,CF利用率显著(P<0.05)高于青农灰鹅相应各处理组.由此可知,鹅对玉米胚芽粕的养分有较高的利用率;同品种不同处理下鹅对玉米胚芽粕的THE,常规养分利用率差异均不显著;不同品种鹅对玉米胚芽粕的养分利用率存在一定差异.     

乳酸菌融合表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白与大肠杆菌LTB及其诱导免疫应答的研究

为研究传染性法氏囊病毒(IBDV)保护性抗原VP2与E.coli不耐热肠毒素B亚单位(LTB)在戊糖乳杆菌(L.pentosus)中的共表达及其免疫原性,本研究以乳酸杆菌表面表达型和分泌表达型质粒pPG-1和pPG-2为载体,以VP2为目的基因,构建VP2基因单独表达及与LTB基因融合表达的4种重组L.pentosus,分别命名为pPG-1-VP2/L.pentosus、pPG-1-VP2-LTB/L.pentosus、pPG-2-VP2/L.pentosus及pPG-2-VP2-LTB/L.pentosus。表达的重组蛋白分子量大小分别约为47 ku、55 ku、45 ku及53ku。将构建的重组L.pentosus分别口服免疫SPF雏鸡,以IDEXX试剂盒测定体液免疫应答水平,结果显示,不同表达方式的重组L.pentosus均可以刺激机体产生特异性循环抗体和分泌抗体(sIgA),其中pPG-2-VP2-LTB/L.pentosus诱导产生的抗体滴度高于其它组。MTT法检测不同表达方式的重组乳酸菌免疫雏鸡外周血淋巴细胞增殖反应,结果显示特异性抗原对免疫雏鸡淋巴细胞的增殖指数显著高于未免疫组,表明重组菌能够刺激机体产生特异性细胞免疫应答。这些结果表明4种重组菌均能够刺激机体产生局部黏膜免疫和全身系统免疫应答;并且带有黏膜免疫佐剂LTB融合表达试验组高于VP2蛋白单独表达组。     

抗菌肽的作用机制与应用前景

各种感染性疾病日益严重地威胁着人类的健康,虽然新的抗生素不断被发现,但是随之而来的细菌耐药性也日益增强,新型抗感染药物的开发日趋显得重要。抗菌肽是在诱导条件下,由动植物产生的一类分子质量在4 ku左右的免疫多肽。它具有较小的分子质量,良好的耐热性和较小的抗原性,且具有广泛的抗菌活性。某些抗菌肽还具有抗病毒、抗真菌及抑制癌细胞生长的作用。因此,抗菌肽有望发展成为一种新型抗菌药和抗肿瘤药物,对人类健康将产生深远的影响。     

种植年限对紫花苜蓿地土壤pH值和磷酸酶活性的影响

为科学评价种植苜蓿的改土效应和提高苜蓿对土壤磷素养分的利用效率,以1年生、2年生、3年生、4年生和6年生紫花苜蓿地为试验对象,研究了种植年限对盐碱地土壤pH值和土壤磷酸酶活性的影响.结果表明:随着种植年限的增加,土壤pH值总体上呈下降趋势,6年生苜蓿地较1年生苜蓿地土壤pH值下降了O.13;在0～40cm土层内,土壤pH值随土层深度的增加而升高,但40～50cm土层土壤pH值出现明显的下降.根际土壤磷酸酶活性高于非根际,二者均随种植年限的增加先升后降,随土层深度的增加而降低.不同生长年限苜蓿地各土层土壤pH值与土壤磷酸酶活性均呈负相关,表明试验条件下土壤pH值降低有利于土壤磷酸酶活性的提高.     

青藏高原东部高寒沼泽湿地动态变化及其驱动因素研究

20世纪中后期以来,在全球气候变化和人类活动的影响下,青藏高原湿地生态系统变的极其敏感和脆弱。运用遥感与地理信息系统技术,以Landsat TM/ETM+/OLI遥感影像为主要数据源,解译了青藏高原东部甘南和川西北地区1991、2000、2010和2016年4个时期的沼泽湿地;利用转移矩阵和湿地动态度,分析了沼泽湿地的空间变化、转移方向和变化速率;采用景观指数,分析了沼泽湿地景观格局变化;结合气象数据和相关统计资料并利用灰色关联度法,分析了沼泽湿地变化的驱动因素。结果表明: 1)研究区沼泽湿地主要分布在东北部,1991-2016年4个时期的面积分别为6739.89、6231.39、5849.59和5649.35 km²,处于持续减少的状态,26年间面积共减少了1090.54 km²。2)26年来,研究区沼泽湿地的动态度从-7.54%减小至-3.42%,面积变化速率持续减慢,高寒草地是沼泽湿地转出和转入的主要类型。3)沼泽湿地的斑块数量先增加后减少,斑块密度持续增大,反映了沼泽湿地的破碎程度增高;最大斑块指数先降低后小幅升高,斑块形状指数先升高后小幅下降,反映了沼泽湿地的优势度降低,景观形状趋于复杂化;分离度指数先增大后小幅减小,聚集度持续降低,反映了沼泽湿地从单独紧凑的状态趋向离散化发展。4)人为因素是影响青藏高原东部沼泽湿地面积变化的首要原因,其次受到气候因素的影响,各因子影响力大小依次是牧业生产总值>国民生产总值(GDP)>人口数量>温度>蒸发量。沼泽湿地面积与各因子呈明显的负相关关系,面积随牧业生产总值、GDP、人口数量、温度和蒸发量的增加而减小。     

鲤春病毒血症病毒单克隆抗体制备及鉴定

为制备鲤春病毒血症病毒(SVCV)单克隆抗体(MAb),本研究用纯化的SVCV免疫BALB/c鼠,通过杂交瘤细胞技术,制备2株抗SVCV的MAb,分别命名为2A3和3H7。经间接ELISA检测腹水效价为1:10240和1:12150。亚类鉴定证实,这2株亚类均为IgG1型。经非竞争酶免疫试验测定2A3和3H7的抗体亲和力常数分别为4.86×108L/mol和1.86×109L/mol,3H7相对亲和力高于2A3。MAb 2A3和3H7的饱和度均为1:400,叠加试验所得增值指数为63.2%,大于50%。抗体反应增值结果表明:两株MAb分别针对不同抗原位点。免疫印迹分析检测表明,两株纯化的MAb均可与SVCV抗原发生特异反应。     

基于GIS的中国苜蓿资源分布和生产力分析

针对目前我国苜蓿种植缺乏合理的规划和布局、盲目引种等问题,于2006年初对全国苜蓿种植县开展了的问卷调查,对目前苜蓿资源情况进行了全面了解,并利用地理信息系统（GIS）对其空间分布和生产力状况进行了详细分析。研究表明,截止到2005年全国16个省区的614个苜蓿分布旗县的苜蓿累计保留面积达254.77万hm2,占全国人工草地面积的50.8%;并按照面积数据分布情况将其划分为5级（小于333hm^2、333～3333hm^2、3333～10000hm^2、10000～33333hm^2、33333～74313hm^2）,各级分别占苜蓿总面积的0.83%、14.49%、28.84%、42.45%、13.62%;苜蓿平均干草单产为10150kg/hm^2,占总面积的46%;根据数据分布情况将干草产量数据划分为5级（小于3000kg/hm^2、3000～7500kg/hm^2、7500～12000kg/hm^2、12000～18000kg/hm^2、18000～31005kg/hm^2）,各级分别占总面积的14.32%、21.31%、46.75%、14.86%、0.83%;全国苜蓿种子田面积17.29万hm^2,种子平均单产为325.13kg/hm^2。