东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库的构建

本项研究的目的是构建东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库,为筛选东方田鼠抗血吸虫病抗性相关基因奠定基础.用TRIzol试剂提取东方田鼠肝脏总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA.在双链cDNA末端加上EcoRⅠ/HindⅢ定向接头并用EcoRⅠ和Hind Ⅲ酶切,使其两端分别带EcoRⅠ和HindⅢ粘性末端.用Mini Column纯化、收集300 bp以上的双链cDNA片段,再连接于带有EcoRⅠ和HindⅢ末端的T7 Select 10-3b载体,经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示cDNA文库.经测定,库容量为1.3×107 PFU/mL,扩增后文库滴度为1.8×1011 PFU/mL.对从原始文库中随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为91.7%,阳性克隆片段大小分布在200 bp～1 000 bp,其中有95.5%的插入片段大于300 bp.用日本血吸虫童虫可溶性抗原对文库进行了初筛,得到了21个ESTs,将这些阳性噬菌体克隆和血吸虫童虫共培养,其中大部分克隆诱导的童虫死亡率比阴性噬菌体对照高出2%～13%.     

新城疫病毒D90毒株对肺癌A549细胞生物学特性的研究

本试验采用细胞培养、吖啶橙染色、电镜、流式细胞仪等方法,研究了新城疫D90病毒株对肺癌A549细胞的体外杀伤作用。D90感染的细胞经吖啶橙染色后,可见到典型的细胞凋亡的形态学变化;电镜下可观察到凋亡小体,同时也观察到了典型的坏死细胞;流式细胞仪的分析结果表明,在24h的时间段,病毒的作用机制主要表现为凋亡,在48h时间段内,病毒的作用机制主要表现为坏死。人胎儿肝细胞单层培养物中接种D90后,未观察到细胞病变。结果表明,新城疫D90毒株作用于肺癌A549细胞的机制主要为凋亡与坏死相结合,因此它有期望成为一种有效的抗肿瘤生物制剂。     

苜蓿茎秆的拉伸力学特性试验

本研究对低含水率的苜蓿茎秆不同部位进行了拉伸力学特性试验。结果表明,同一植株不同位置的拉断载荷从顶部到根部呈明显增加趋势,一般根部的拉断载荷是顶部的2～4倍;抗拉强度变化趋势不明显;苜蓿茎秆试样上部、中部和下部的平均直径分别是1.72mm、2.03mm和2.21mm,平均壁厚分别是0.18mm、0.22mm和0.31mm,平均抗拉强度分别为77.06594MPa、96.24907MPa和75.27600MPa,平均载荷分别是59.50628N、105.68330N和121.33230N;验证分析表明,苜蓿茎秆中部和下部的抗拉强度与截面积的相关性较好,上部茎秆的相关性稍差。     

pVAX1/SjTSP2 DNA疫苗免疫预防小鼠日本血吸虫病的效果评估

为评估SjTSP2分子作为日本血吸虫DNA疫苗候选抗原分子的潜力,本实验扩增了编码该分子的DNA片段,构建了重组真核质粒pVAX1/SjTSP2,检测其在哺乳动物细胞中表达情况后,通过基因枪轰击法免疫小鼠,应用ELISA、流式细胞术等检测重组质粒诱导的免疫反应,计算减虫减卵率,评估对小鼠日本血吸虫病的免疫保护效果。间接免疫荧光试验结果显示该质粒能在293T细胞中表达。质粒免疫小鼠诱导了显著升高的特异性IgG抗体和IFN-γ、IL-4等细胞因子。小鼠免疫保护试验结果表明,免疫组小鼠虫荷数较PBS对照组增加12.4%(P=0.368),但肝组织虫卵减少10.01%(P=0.486)。说明制备的DNA疫苗能刺激小鼠产生较强的免疫反应,但诱导的免疫保护作用并不理想,为血吸虫DNA疫苗研究提供了参考数据。     

应用鸡胚接种试验研究中草药的抗新城疫病毒作用

为了筛选出高效的抗新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)中草药,采用鸡胚接种试验测定了常用清热解毒中草药的体外抗NDV作用.结果表明矮地茶、侧柏叶、贯众、诃子、虎杖、白蔹、夏枯草、黄连对新城疫病毒具有较好的杀灭作用.     

一种广谱微生物消毒剂过硫酸氢钾复合粉的稳定性研究

为确定过硫酸氢钾复合粉的有效期和包装运输条件,以电位滴定法和碘量法测定过硫酸氢钾复合粉中氯化钠和有效氯的含量,并分别用影响因素试验、加速试验和室温长期留样试验对过硫酸氢钾复合粉进行稳定性研究。影响因素试验结果表明过硫酸氢钾复合粉对湿度较敏感,6个月加速试验的结果显示双层铝箔纸可以作为合适的包装材料,室温留样1年后,样品各项检测指标均符合质量标准的规定。稳定性试验结果表明本品在密闭、遮光的贮存条件下性质稳定,室温下贮存期可暂定为2年。     

Ⅰ型鸭肝炎病毒RNA聚合酶基因的克隆及原核表达

根据Ⅰ型鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus,DHV-Ⅰ）ZJ-Ⅴ株基因组序列（GenBank登录号：EF382778）,设计了一对扩增RNA聚合酶基因（RNA-dependent RNA polymerase,RdRp）的特异性引物,以ZJ-Ⅴ株基因组为模板,扩增DHV-Ⅰ的RdRp基因。运用DNAStar软件对ZJ-Ⅴ株病毒与GenBank上已发表的其他不同DHV毒株的RdRp基因序列进行同源性比较和遗传进化分析,结果表明,ZJ-Ⅴ株与A型DHV-ⅠR85952株（DQ226541）的同源性为97.1%,亲缘关系最近,与2株台湾新型（B型）DHV之间为76.9%和77.0%,与C-GY株和4株韩国新型（C型）DHV株之间为76.2%~76.5%,亲缘关系较远。将RdRp基因克隆至原核表达载体pET-32a（＋）,获得重组表达质粒pET-RdRp,转化宿主菌E.coli BL21（DE3）,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示RdRp蛋白分子量约为65 kDa,Western blot检测证明RdRp蛋白能与Ⅰ型鸭病毒性肝炎阳性血清产生特异性免疫反应,具有良好的免疫学活性。本文为进一步研究DHV-Ⅰ的复制机理奠定了基础。     

在实验室饲养条件下花鼠日食量与食物种类的关系

为了掌握花鼠(Eutamias sibiricus)日食量和食物种类的关系,在实验室饲养条件下对花鼠的日食量和食物种类的关系进行了研究。结果表明,花鼠的平均日食量为(15.35±1.09)g,性别间平均日食量无显著差异,花鼠体重与日食量呈正相关,y=0.0487x+90.102。     

犊牛蛔虫病流行病学调查及防控对策

[目的]为有效防控犊牛蛔虫病,[方法]采用选点入户、化验查卵、驱虫试验、剖检查虫等方法,[结果]查明蛔虫病发病率64.99％(20％ ～100％);致死率13.81％(4％ ～60％).粪便蛔虫卵检出率80.40％,E.P.G平均(291±125)枚.驱虫试验排虫率91％,头均(50±19)条;剖检查虫头均(53±13...     

不同酵母培养物对绵羊瘤胃体外发酵参数的影响

为验证不同类型及比例的酵母培养物(YC)对绵羊瘤胃体外发酵参数的影响。采用全因子试验设计,在发酵底物条件下分别添加不同类型及比例的YC,一个对照组、4个试验组,测定体外发酵参数浓度;发现YC-3能极显著降低培养液pH和丙酸浓度,显著增加异丁酸浓度和乙丙比。在体外条件下添加1%、2%YC均能显著增加培养液中乙酸浓度,添加4%YC能极显著降低异戊酸的浓度。YC不同来源和不同水平影响绵羊瘤胃体外发酵pH、丙酸及乙丙比等发酵参数,用于指导畜牧生产实际。