乙型脑炎病毒结构蛋白基因的克隆表达与免疫特性分析

研究分别克隆了乙型脑炎病毒SA14-14-2株的结构蛋白C、PrM/M及E蛋白基因.将3个结构蛋白基因分别插入表达质粒pET30(a)中,成功构建3个原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后利用IPGT诱导,SDS-PAGE分析结果表明,3个结构蛋白获得了表达,表达产物大小与预期一致.Western-blot分析结果表明:表达产物中PrM/M和E蛋白具有很好的免疫反应性,可被抗乙型脑炎病毒血清很好地识别;而C蛋白的免疫反应性较差,不能很好地被乙型脑炎病毒阳性血清识别.该结果提示,乙型脑炎病毒结构蛋白中除E蛋白外PrM/M蛋白也很可能具有诊断抗原的应用潜能.     

桦木酸对小鼠免疫器官抗氧化能力的影响

本试验旨在研究桦木酸(BA)对小鼠免疫器官抗氧化能力的影响.选取健康的昆明系小鼠28只,随机分为4组(每组7只),每天每只分别按每千克体重0、0.25、0.50、1.00 mg的剂量给予BA,BA混悬于0.2 mL1％可溶性淀粉溶液中.以灌胃方式给予,每天灌胃1次,连续灌胃14 d后,检测各组小鼠脾脏和胸腺中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GHS-Px)活性,丙二醛(MDA)含量以及总抗氧化能力(T-AOC).结果表明:BA可使小鼠脾脏和胸腺中SOD、GSH-Px活性以及T-AOC升高,MDA含量降低.其中,每千克体重灌胃0.50 mg BA能显著或极显著提高脾脏和胸腺中GSH-Px活性和T-AOC(P＜0.05或P＜0.01),显著或极显著降低胸腺和脾脏中MDA含量(P＜0.05或P＜0.01);每千克体重灌胃1.00 mg BA能显著或极显著提高脾脏和胸腺中SOD活性、T-AOC以及脾脏中GSH-Px活性(P＜0.05或P＜0.01),极显著降低胸腺和脾脏中MDA含量(P＜0.01).由此得出,BA能有效地增强小鼠免疫器官的抗氧化能力.     

山东规模化养殖场毛皮动物多重感染病原学分析

2012—2013年间,山东10个地市多家毛皮动物养殖场养殖的毛皮动物（狐狸、貉子、水貂）出现腹泻,皮肤湿疹,神经症状,空怀、流产、出血性肺炎等症状和病变类似的疫情,为探明其病因,本研究对发病规模化毛皮动物养殖场发病情况进行调查,并对送检的病料进行病原学检查,结果发现,犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒感染率分别为54.21%、47.30%、31.35%;肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、肺炎双球菌、大肠杆菌、沙门杆菌、绿脓杆菌、加德纳菌的感染率分别为37.58%、25.05%、21.81%、14.04%、12.53%、10.37%、8.21%;犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、肺炎双球菌6种病原的单独感染、二重感染、三重感染、四重感染分别为22.03%、39.52%、36.07%、2.38%,未见五重以上的感染。结果表明,近两年造成山东规模化场毛皮动物发病主要原因是由犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒与肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、肺炎双球菌多重感染所致,这为规模化毛皮动物养殖场有效地控制疫病提供了理论依据。     

恩诺沙星及其代谢产物在奶山羊的药动学及乳中药物浓度

本试验研究单剂量静脉注射、肌肉注射和乳房灌注恩诺沙星（2.5mg/kg)在健康奶山羊的药动学及乳中药物浓度。采用HPLC法测定血浆和乳中恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星的浓度，用统计矩原理处理血浆中药物浓度－时间数据，计算非房室模型的药动学参数。静脉注射、肌肉注射和乳房灌注恩诺沙星的t1/2β分别为1.32、1．55、0．99h;AUC为1．06、3．04、2．66mghL^-1；恩诺沙星的代谢分数为35．01％、44．06％、45．73％；环丙沙星的t1/2β为1．81、2．94、2．32h。乳中的药物浓度高于同期血中药物浓度，且乳中环丙沙星浓度高于恩诺沙星浓度并维持更长的时间。     

猪链球菌2型分离株对野生斑马鱼的致病性

以野生斑马鱼为模式动物,对6株mrp＋epf＋sly＋猪链球菌2型（SS2）分离株进行致病性比较。斑马鱼经腹腔接种不同稀释度的SS2分离株,连续观察5d,Kaplan-Meier生存曲线分析并统计半数致死量（LD50）。结果显示,6个分离株对斑马鱼的LD50在10^5cfu-10^6cfu之间,临床株与非临床株的毒力差异不显著（P〉0.05）。从攻毒后死亡的鱼腹腔和脑可分离到SS2,并伴有腹腔出血及肝、肠、脑部炎性病变。表明SS2可感染斑马鱼,为进一步研究SS2的体内感染机制及毒力因子功能等奠定了基础。     

莱氏野村菌cq菌株感染家蚕的特性及菌株产生的晶体

莱氏野村菌(Nomuraea rileyi)cq菌株为昆虫致病性真菌,能感染家蚕发生绿僵病。显微镜下观察菌株体外培养产生的分生孢子呈卵圆形或椭圆形,大小为3.2～4.6μm×2.5～3.2μm,分生孢子梗单生,具有3～4个轮状分支,每个分支着生2～3个瓶梗,瓶梗基部膨大,在瓶梗顶端尖处着生分生孢子。在感染莱氏野村菌的家蚕幼虫血液中可观察到菌株产生的大量豆荚状、酵母状芽生孢子,病蚕血液呈浑浊的乳白色,体表出现褐色病斑,反应迟缓,尸体逐渐僵化,被鲜绿色的孢子粉覆盖。另发现该菌株在感染家蚕幼虫的体表和血液中能产生菱形晶体,同时菌株在体外培养基上培养时也观察到大量的正八面体菱形晶体,且改变培养温度和pH值,晶体产生的时间延长,形状和大小也会发生变化,出现长方形、正方形六面体形状及不规则形状晶体。推测莱氏野村菌cq菌株产生的晶体可能是有利于菌株感染家蚕的一种次生代谢产物。     

1例规模化猪场暴发高致病性繁殖与呼吸综合征（HPPRRS）与圆环Ⅱ型（PCV-2）混合感染的诊治

四川省邻水县的1个规模化猪场60-60日龄猪只430头相继暴发疲病,采集15头病猪血清样品和2头病死猪肺和脾脏组织病料,采用HPPRRSV RT—PCR试剂盒（军事兽医研究所涂长春教授惠赠）检测,结果是8份血清（占55．8％）和2份病料（100％）为阳性。同时,6份血清和2头病死猪肺和脾脏组织病料用PCV-2 PCR试剂盒（自制）检测,结果是3份血清（占50％）和2份病料（100％）为阳性;结果表明：该猪场暴发了HPPff,RSV和PCV2混合感染。     

Initial cooling time before freezing affects post‐thaw quality and reproductive performance of rabbit semen

The aim of this study was to investigate the effect of initial cooling time at 5°C during semen cryopreservation on post‐thaw quality and reproductive performance of rabbit semen. Pooled semen samples (n = 6) were divided into two subsamples and cooled at 5°C for 45 or 90 min. After cooling, the semen samples were diluted to a ratio of 1:1 (v:v) with a freezing extender composed of Tris‐citrate‐glucose (TCG) containing 16% of dimethylsulfoxide and 0.1 mol/L sucrose. The semen was subsequently loaded in 0.25 ml straws, equilibrated at 5°C and frozen in liquid nitrogen vapor. After thawing, sperm motility, viability, osmotic resistance, acrosome and DNA integrity were assessed. Our results indicate that the longer cooling time, that is, 90 min before cryopreservation significantly improves sperm post‐thaw viability, motility and fertility. In fact, reproductive performances obtained with semen frozen after a 90 min cooling time were similar to those produced by fresh semen insemination. Hence, the present research provides an effective freezing protocol for rabbit semen that will allow for the creation of a sperm cryobank for the conservation of Italian rabbit genetic resources, as well as the use of frozen semen doses in commercial farms.     

卫星搭载对羊草种子萌发及细胞学效应的研究

试验研究了"实践八号"航天育种卫星搭载羊草种子后的萌发及根尖细胞学效应。结果表明:太空诱变后羊草种子的萌发能力降低,但与对照差异不显著(P>0.05);太空诱变促进了羊草根尖细胞的有丝分裂活动,分裂指数较对照增加24.17%;太空诱变使羊草根尖细胞在有丝分裂过程中产生微核、染色体断片、染色体粘连、落后染色体、游离染色体等畸变类型。其中,单微核是主要的核畸变类型,染色体断片为主要的染色体畸变类型。"实践八号"卫星搭载对羊草根尖细胞有明显的诱变效应。     

猪MEF2a基因的克隆与表达

为了进一步了解猪MEF2a基阒的结构与功能,本研究采用生物信息学结合RT-PCR的方法,克隆了猪的MEF2a基因,获得了它的2个变异体序列.结果表明,猪MEF2a variant 1基因cDNA长1 524 bp(EF576923),编码508个氨基酸,分子量为54.481 ku;variant 2基因cDNA长1 416 bp(EF576922),编码471个氨基酸,分子量为50.846 ku.MEF2a两个变异体的氨基酸序列同源性为86.79%,第1aa～77aa和第132aa～470aa完全一致,第78aa～131aa是高变区,variant2与variant1相比,在第224aa～258aa处存在34个氨基酸(102 bp)的,缺失.利用Real-time PCR方法检测了MEF2a的表达.结果表明,MEF2a mRNA是一个广谱表达基因,在心、肝、胃、脾、肾、肺、大肠、小肠、背肌和腿肌中都能检测到,在腿肌中优势表达.MEF2a variant1与马和家鼠构成一个小类群,而variant 2与牛和人构成了另外一个小类群,推测MEF2a基因在进化过程中发生了较为明显的变异.