湖南省长沙市羊布鲁氏菌病基线调查

为了解湖南省长沙市布鲁氏菌病流行现状,对奶羊养殖场(户)和种羊场采用普查策略,对其他羊养殖场(户)采用两阶抽样策略,选择羊群并选定群体中个体,采集血样进行布鲁氏菌抗体检测。同时,通过问卷调查和查阅资料等方式,分析布鲁氏菌病感染和传播风险。结果显示:全市羊布鲁氏菌病表观场群流行率为1.54%(95%CI:0.42%~3.91%),表观个体流行率为0.60%(95%CI:0.43%~0.80%);4个阳性群集中分布于长沙县和宁乡县;和以往监测数据相比,长沙市的羊群布鲁氏菌病流行率和人间发病率均呈下降趋势,说明前期的防治策略取得积极成效。总体来说,长沙市布鲁氏菌病流行率较低,疫情处于稳定控制状态,因而可以分区域逐步实现全市布鲁氏菌病净化。     

放牧对武功山草甸土壤微生物生物量及酶活性的影响

以武功山山地草甸为研究对象,通过分析不同放牧强度对土壤微生物生物量碳氮以及酶活性的影响,旨在为退化草甸修复提供理论依据。结果表明:1)不同土壤微生物生物量碳氮含量表现为0-20cm土层20-40cm土层,除20-40cm土层轻牧和中牧的土壤微生物生物量氮无显著差异外(P0.05),随放牧强度增加,土壤微生物生物量碳氮含量均显著降低(P0.05);2)可溶性碳氮含量在0-20和20-40cm土层间无显著差异(P0.05),均表现为在0-20cm土层轻牧显著大于中牧和重牧(P0.05);3)碱解氮和易氧化碳含量表现为在不同土层,轻牧和中牧含量均显著高于重牧(P0.05);4)土壤β-葡萄糖甘酶、β-N-乙酰氨基葡萄糖甘酶和脲酶活性表现为在不同土层下,轻度和中牧均显著高于重牧(P0.05);5)相关性分析表明,不同放牧强度土壤β-葡萄糖甘酶、β-N-乙酰氨基葡萄糖甘酶和脲酶活性与微生物生物量碳氮均呈显著性正相关(P0.05)或极显著正相关(P0.01)。     

广西禽巴氏杆菌的分离及其特性的测定

1990～1997年间,本研究室从广西不同地区鸡场死于禽巴氏杆病菌的家禽中分离并鉴定13株禽巴氏杆菌（包括鸡源的12株,鸭源的1株）。菌株经中国兽药监察所进行Carter定型,结果为荚膜A型。13个分离菌株都100％致死本地三黄鸡。     

猪妊娠过程中胎盘发育及其调控基因研究进展

胎盘是母体与胎儿进行营养物质、气体及废弃物交换的重要器官。妊娠过程中,猪胎盘功能是影响母猪产仔数、死胎数及断奶前死亡率的最重要因素之一。作者介绍了猪妊娠早期胎盘的建立过程及形态变化、妊娠中期胎盘褶皱的形成、妊娠后期胎盘的进一步发育,阐述了这3个妊娠阶段猪胎盘的形态变化与其对应的胎盘功能之间的关系,并介绍了目前所发现的调控猪胎盘建立和发育的相关基因,包括透明质酸酶（HYAL）、组织蛋白酶（CTSB和CTSL1）及乙酰肝素酶（HPSE）基因,为提高母猪胎盘效率、增加母猪繁殖力提供科学依据。     

柔嫩艾美耳球虫表面抗原SAG2基因的克隆与表达

根据生物信息学预测的基因序列设计引物,应用RT-PCR方法从柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子总RNA扩增获得了鸡柔嫩艾美耳球虫表面抗原2(surface antigen 2,SAG2)基因序列,将其与pGEM-T easy载体连接后转化E.coliDH5α,筛选阳性克隆,以带有限制酶切位点的特异性引物用PCR方法扩增不含SAG2 N端信号肽序列的ORF序列后克隆至表达载体pET-32 a(+),构建了重组表达质粒pET-32 a(+)-SAG2,并将其转化至E.coliBL21(DE3)。经IPTG诱导,获得了SAG2重组抗原在大肠杆菌的高效表达,重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35%,融合蛋白的分子量约为47 ku。菌体经超声处理后进行SDS-PAGE分析表明,表达蛋白以包涵体的形式存在。     

酶联免疫分析技术及其在进出口动物产品兽药残留检测中的应用

进出口动物产品兽药残留对食品安全的影响越来越明显,日益成为阻碍国际间贸易的重要因素,这对食品兽药残留的快速检测提出了高要求。作者主要介绍酶联免疫分析技术的基本原理、分类和技术要点,并对其在动物产品兽药残留检测中的应用、问题和前景进行综述。     

利用柞蚕核型多角体病毒表达载体系统在柞蚕蛹中表达增强型绿色荧光蛋白

为了探讨外源蛋白在柞蚕蛹-柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)表达系统的表达水平和稳定性,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆到柞蚕核型多角体病毒转移表达载体pApM748BE中,获得重组质粒DNA,与ApNPV DNA共转染樗蚕(Phi-losamia cynthiam)培养细胞Pc-01后,用末端稀释法筛选获得重组病毒ApNPV-Δph/egfp+。将该重组病毒感染柞蚕蛹,采用SDS-PAGE和Western blot方法检测EGFP在柞蚕蛹中的表达,结果显示:在柞蚕蛹感染重组病毒ApNPV-Δph/egfp+后6 d,EG-FP就有明显的表达;感染后12～18 d,蛹体液中的EGFP含量保持较高水平,以EGFP标准样品定量分析EGFP在柞蚕蛹体液中的表达水平高于1 mg/mL;感染后30～39 d仍可以检测到蛹体液中EGFP的表达,而且蛋白稳定。研究结果表明,利用柞蚕核型多角体病毒作表达载体,可在柞蚕蛹中高效稳定地表达EGFP,并且EGFP在雌雄蛹间的表达水平无明显差异。     

犬瘟热、犬细小病毒胶体金二联检测卡研制

本研究通过细胞融合、间接ELISA方法筛选出4株可稳定分泌犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)和犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以此为基础研制了一种可同时检测CDV和CPV的胶体金二联检测卡,并对其特异性、灵敏度及准确性进行了测试。结果显示：4株杂交瘤细胞可稳定传代,分泌的单克隆抗体纯度高,效价均在1:320以上。制备的胶体金二联检测卡特异性强,只与CDV和CPV产生特异性条带,而不与其他犬类病毒反应;灵敏度高,最低检测限可达到10²拷贝/μL;准确性好,与荧光定量PCR结果的符合率高于88.0%,与市面上单一病毒检测卡的符合率高于97.2%。结果表明,本研究制备的CDV、CPV胶体金二联检测卡特异性强、灵敏度高、准确性好,兼具操作简便、肉眼可判读、结果易保存和无需特殊仪器设备等优势,可用于两种疾病的临床快速诊断和大规模检测工作。     

饲料中添加发酵豆粕对仔猪生长性能的影响

试验选择母猪胎次、初生体重相近的杜长大三元杂交哺乳仔猪24窝,随机分为对照组,试验Ⅰ、Ⅱ组,每组八窝。对照组饲喂常规乳猪料,试验Ⅰ、Ⅱ组分别饲喂添加10%、20%发酵豆粕的乳猪料,研究发酵豆粕对仔猪生长性能的影响。结果表明试验Ⅰ、Ⅱ组仔猪平均日增重、平均日采食量均显著高于对照组(P<0.05),而料肉比、腹泻率显著低于对照组(P<0.05);试验组Ⅱ平均日增重、平均日采食量高于试验组Ⅰ,料肉比、腹泻率低于试验组Ⅰ,但二者之间差异不显著(P>0.05)。     

南非II型口蹄疫间接ELISA检测方法的建立

为满足口岸对南非II型口蹄疫检测、监测的需求,在对南非II型口蹄疫抗原表位分析及相关基因合成的基础上,进行融合蛋白pGEX—VP1-VP3的体外表达,采用柱上酶切方法制备VP1-VP3蛋白。将纯化VP1-VP3抗原包被96微孔板,分别优化抗原包被浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度,确定阴性临界值。经反复优化,建立的南非II型间接ELISA检测方法的最佳抗原包被浓度为6．4ug／ml,血清最佳稀释度为1：200,酶标二抗最佳稀释度为1：4000,阴性临界值（0D450）为0．562。检测样品判定标准为：OD450〉0．622为阳性,OD450〈0．502为阴性,0．502≤OD450≤0．622为可疑。特异性试验结果表明,所建立方法与其它血清型口蹄疫间无交叉反应。南非II型口蹄疫间接ELISA检测方法的建立为我国口岸口蹄疫检疫提供了新的查验方法。