牡蛎中GⅡ型诺如病毒巢式RT-PCR检测方法的优化与评价

为了解决目前巢式PCR法检测牡蛎样品中GII型诺如病毒时存在的非特异性扩增、假阴性等问题,本研究对NCBI数据库中在线获得的所有GII型诺如病毒序列进行系统分析,重新设计出针对GII型诺如病毒检测的通用型巢式PCR引物(NG2OF/NG2OR),并从基因型覆盖度、特异性、灵敏度和实际样品检测的稳定性几个方面对新设计的引物进行评估。结果显示：(1)新引物的特异性好,只对GII型诺如病毒进行有效扩增,且不受牡蛎样品本底的影响。(2)新引物灵敏度高,最低可检测至26.4个拷贝。(3)在对92个牡蛎样品进行检测时,新引物的阳性检出率为28.3%,比经典引物高出7.5%。因此,新建立的GII型诺如病毒巢式PCR检测方法在检测牡蛎样品时特异性更强,灵敏度更高,为牡蛎中诺如病毒的检测提供了一种新的、可靠的技术手段。     

卷烟主流烟气的中性香气成分分析

采用同时蒸馏萃取法,从卷烟主流烟气中萃取中性香气成分,对其进行气相色谱(GC)分析和气相色谱/质谱(GC/MS)鉴定.结果表明,在萃取时间为2 h,水浴温度为60 ℃的条件下,同时蒸馏萃取法能提取和分离出主流烟气中多种主要中性香气成分.在提取得到的中性香气成分中,质谱鉴定出了72种,其中:烃类17种,醛类7种,酮类23种,醇类9种,酯类8种,醌类1种,含氧杂环类2种,含氮化合物5种.所测标样的回收率为70.9%～85.4%.提取的25种含量较高的中性香气成分中,除植醇外,相对标准偏差均在10%以下.     

CPV-Bt对湖南马尾松毛虫的药效试验

以湖南马尾松毛虫发生地采集的马尾松毛虫为试验材料,选用CPV、Bt 2种微生物复配后对其进行室内药效试验,结果表明：Bt对越冬代松毛虫前12d死亡率的影响显著,死亡率与Bt浓度呈正比,Bt浓度为6×10^7个芽孢／mL时,死亡率可达70．36％;Bt使用浓度为5×10^6芽孢／mL时,第一代松毛虫（群体饲养）处理6d平均死亡率可达70．41％,Bt使用浓度为1×10^7芽孢／mL时,平均死亡率可达75．09％;CPV对越冬代松毛虫处理12d后残留种群带毒率影响显著,带毒率与CPV浓度呈正比,当CPV浓度为2×10^5个多角体／mL时,其带毒率可达53．68％;复配药荆按其对第一代松毛虫（单虫饲养）的药效（前6d死亡率）可分为5类,其平均药效（死亡率）最高达100％,最低的仅为43．12％;CPV-Bt复配药刺防治马尾松毛虫的越冬代和第一代,若只需达到70％杀虫率和50％残留种群带毒率水平,越冬代宜选用2×10^5个多角体／mL＋6×10^7个芽孢／mL,第一代宜选用5×10^4个多角体／mL＋1×10^7个芽孢／mL。     

内蒙古平原灌区“春麦冬播”种植效应及品种适应性

针对内蒙古春播小麦生育期短、干热风、高温逼熟等因素制约产量提高,且收获后光温资源极大浪费的现状,以及试种冬小麦发现的冬季冻害、春季干旱或"倒春寒"影响返青率及前茬限制等问题,本研究以"春麦冬播"种植模式为切入点,采用不同春化类型小麦品种,通过连续2年的田间试验,系统研究了不同小麦品种越冬出苗、叶片生理、根系性状及产量形成的差异,以期筛选适宜冬播的小麦品种。结果表明:供试的全部春性小麦品种及部分冬性品种可以以种子形式完成春化作用,第2年正常抽穗成熟。冬播条件下春季田间出苗率较春播小麦有所降低,但根系发达,对低温及干旱的适应性强。通过系统聚类筛选出适宜内蒙古平原灌区冬播的3个小麦品种,包括春性品种永良4号、冬性品种宁冬11号和半冬性品种河农7106,其共同特征为越冬出苗率高、抗逆性强、根系发达、产量表现较高,其中永良4号产量可达到与春播相同的水平。     

莲藕中甘薯潜隐病毒实时荧光定量PCR检测技术的建立及应用

甘薯潜隐病毒莲藕分离物(sweet potato latent virus-lotus,SPLV-lotus)在江苏省莲藕产区普遍引起发病,并且该分离物序列与已报道的SPLV甘薯分离物存在较大差异。为进一步监测SPLV-lotus在莲藕上的发生情况,针对SPLV-lotus的CP基因设计并优化特异性引物QSPLV-lotus3-F/QSPLV-lotus3-R,通过优化引物浓度和退火温度条件,构建标准曲线,建立了SPLV-lotus实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测技术。该方法特异性强,可以快速检测出SPLV-lotus,灵敏度为普通PCR的100倍,可广泛应用于脱毒莲藕SPLV-lotus的精确检测。     

中早熟辣椒新品种‘农大7号’

‘农大7号’辣椒是以HP1016为母本,Y0931为父本杂交选育而成。植株长势强,平均株高78.7 cm,中早熟。果实羊角形,青熟果黄绿色,果面光滑,果肉厚,平均单果质量80 g,平均单株结果数26.8个。果实维生素C含量0.56 mg·g^-1,粗纤维含量1.15%。抗疫病、炭疽病等。适宜河南全省各地(含烟区)早春保护地种植。     

新疆部分地区苹果、核桃和杨树腐烂病的病原鉴定

树木腐烂病在新疆主林果种植区均有不同程度的发生,近年呈加重趋势。本研究在调查了新疆阿克苏、和田、伊犁、喀什和库尔勒等地区苹果树、核桃树和杨树3种林果腐烂病田间发病情况的基础上,重点对14个样本点的样品进行病原物的分离与鉴定。结果表明,各样本点3种林果均有不同程度的腐烂病发生,分离鉴定结果为引起苹果树腐烂病病原菌主要为Valsa mali var.mali(分离频率为64.5%),其次是V.mali var.pyri(25.8%)、V.malicola(3.2%)和V.nivea(6.5%);引起核桃树和杨树腐烂病病原菌为V.sordida(分离频率为83.3%和96%)和V.nivea(分离频率为16.7%和4%)。离体枝条及苹果果实上的致病性测定结果表明,3种林果上分离得到的病原菌均能感染原寄主。引起新疆部分地区苹果树腐烂病的主要病原菌是Valsa mali var.mali,核桃树和杨树腐烂病的主要病原菌是V.sordida。同时,基于实际生产中存在感病枯死杨树枝干作为苹果园、核桃园树体支撑木的现象,推测3种林果腐烂病菌间可能存在交叉感染的潜在风险。     

鳙30日龄生长性状的遗传参数

为了研究鳙早期生长性状的遗传改良潜力,利用2个亲本群体进行群体繁殖(组1)和人工授精(组2)实验,并分别采集672尾30日龄鱼苗,用于开展对早期生长性状的遗传分析。通过微卫星标记分别鉴定了其中628和660尾个体的亲本来源,并依此获取群体双列杂交的信息;亲本对应子代贡献率存在极显著差异。在2个繁殖组中,体质量和体长在家系间均存在极显著差异;在组2中,体质量和体长在交配设计间均存在显著差异。此外,杂交组合的2个生长性状均呈现出中亲杂种优势(0.39%～7.64%),其特殊配合力也均为正值(0.01～0.02)。基于动物模型和限制性最大似然法,鳙30日龄体质量和体长的遗传力估值分别为0.47和0.49,且均达到极显著水平。体质量和体长间存在极显著的遗传相关和表型相关,分别为0.89和0.83。研究表明,通过家系构建和群体杂交,可以获得具有生长优势的鳙鱼苗;鳙30日龄生长性状具有较高选育潜力,而亲本对子代贡献的不平衡现象在选育过程中需要引起重视。     

脑部特异表达rtTA调控元件转基因小鼠的构建

为获得一种可调控基因表达系统,避免传统转基因在胚胎发育早期表达的毒性作用或致死作用以及基因过度表达而造成难于分析的复杂多表型,应用分子生物学方法将四环素反式激活子rtTA克隆到仅在脑部能被激活的钙调蛋白依赖性蛋白激酶CaM kinase Ⅱα亚基启动子之后,将其通过显微注射方法注入FVB小鼠受精卵雄原核中获得四环素调控系统中反应组分的转基因工具鼠.经PCR及Southern检测,最终得到3只阳性小鼠(1公2母),表达检测结果显示,其中仅2只(1公1母)后代检测到rtTA表达产物.结果表明已成功构建四环素调控系统中的转基因工具鼠,为今后研究其他脑部基因功能提供便利.     

传染性法氏囊新城疫病毒二联疫苗株接种后气管黏膜损伤研究

为了研究传染性法氏囊病毒超强毒流行株VP2基因重组新城疫病毒（rlasota—vo2）二联疫苗株的免疫机制,用rlasota—vp2免疫2日龄SPF雏鸡,接种后分别在接种后的1,3,5,10,15,18d取气管,进行光镜、电镜观察,利用免疫组化染色方法检测病毒在气管内的分布;光镜观察发现,接种后第3d黏膜下层水肿,淋巴细胞、巨噬细胞浸润,黏膜上皮形成空泡状,表层有数层不成熟的细胞组成;接种后第10d,腺体腔闭塞。免疫组化染色（IHC）气管固有层细胞呈阳性反应,棕色颗粒出现在胞浆中。电镜观察发现接种rlasota—vp2后第3d纤毛细胞有脱纤毛现象。接种第3d杯状细胞破碎,黏液成分增多,黏膜下层的纤维裸露到表面;接种后第10d,可以看到纤毛细胞纤毛上有球形粒子,杯状细胞、基细胞大量增生;接种后第18d,纤毛细胞脱纤毛区域进一步增大。这说明气管黏膜的损伤是机体重要的防御机制和免疫机制的表现。