鸭瘟病毒dUTPase基因克隆、原核表达及在病毒感染宿主亚细胞中的定位分析

根据笔者实验室新发现的鸭瘟病毒（DPV）dUTPase基因（GenBank登录号DQ486149）序列设计1对引物,PCR扩增后将产物亚克隆至pET32a（＋）原核表达载体,获得表达质粒pET32a-DU。然后将其转化至E．coliBL21（DE3）进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测显示诱导表达蛋白约66．8ku,与预期表达蛋白大小一致。薄层扫描分析表明重组蛋白占菌体总蛋白的36．2％,主要以包涵体的形式存在。重组蛋白纯化后制备兔抗血清,间接EUSA效价为1：409600。通过免疫荧光技术进行DPVdUTPase亚细胞定位检测,结果显示最早可在感染后4h的胞质中检测到特异性荧光,12h大量点状绿色荧光聚集于胞核;24h后胞核内点状荧光减弱,而胞质点状荧光增强;48h胞核和胞质荧光均显著减弱。本研究为DPVdUTPase基因功能和DPV致病机理的研究提供了重要数据。     

德国牧羊犬超数排卵技术的探索与研究

为了研究超数排卵技术在德国牧羊犬上的应用效果,试验以南方某警犬基地犬龄为4岁左右经产的德国牧羊犬为供体,采用卵泡刺激素-促黄体生成素(FSH-LH)法对19头德国牧羊犬实施超数排卵。试验分为2组,a组共4头犬分为试验组(Ⅰ组)和对照组(Ⅱ组),每组2头,通过手术取卵研究超数排卵效果;b组共15头,按激素施用剂量分为3组(Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组),每组5头,观察并统计每头犬的产仔数变化情况。结果表明:90%的德国牧羊犬有较明显的超数排卵反应。FSH用量为140 IU时,平均采卵数增加了91.7%,产仔数增加了83.3%;FSH用量为120 IU时,产仔数增加了10.5%;FSH用量为160 IU时,产仔数增加了22.2%。说明FSH剂量为140 IU时可获得最好的超数排卵效果。     

复合酵母培养物对奶牛产奶性能、氮排放及血液生化指标的影响

为研究饲料中添加复合酵母培养物对奶牛产奶性能、氮排放及血液生化指标的影响,选取年龄、体重、产奶量及泌乳期相近(135±15) d的荷斯坦奶牛24头,随机分为4组,每个处理6个重复,对照组和3个试验组的复合酵母培养物添加量分别为精料浓度的0,0.8%,1.0%,1.2%,随精料饲喂,测定产奶量、乳成分、氮排放及血液生化指标,结果表明,1)试验2组日均产奶量显著高于对照组(P<0.05),各试验组分别比对照组提高8.48%,10.05%,8.97%。2)复合酵母培养物能显著提高乳脂和乳蛋白率(P<0.05),显著降低牛奶体细胞数(P<0.05),以试验2组最低。3)在氮排放量上,试验2组显著低于对照组(P<0.05),各试验组比对照组分别降低8.47%,12.01%,9.36%。4)在血液生化指标方面,复合酵母培养物能提高血清中总蛋白、球蛋白、血糖、胰岛素水平(P<0.05),降低尿素氮水平(P<0.05)。由此可见,本试验条件下,综合考虑产奶量、乳成分、氮排放及血液生化指标,复合酵母培养物的最佳添加量为精料浓度的1.0%。     

同时检测猪圆环病毒2型、猪细小病毒和伪狂犬病毒连接酶检测反应-PCR基因芯片检测方法的建立

为快速、灵敏、准确地同时检测和鉴别猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)和伪狂犬病毒(PRV)的方法,本研究采用连接酶检测反应(LDR)-PCR和基因芯片技术建立一种新型检测方法.首先在3种病毒的保守区内分别设计一对LDR探针,两端各连接一段通用序列,依次进行LDR、通用引物荧光标记扩增和芯片杂交,同时比较引物标记和Cy5 -dCTP标记方法的灵敏度.结果表明该方法可以特异地检测PCV2、PPV和PRV3种病毒,而对牛病毒性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、猪圆环病毒1型检测结果均为阴性;对3种病毒的最低检测限少于10个拷贝;Cy5-dCTP标记检测的灵敏度显著高于引物标记.利用建立的方法对41例临床样品进行检测,与普通PCR检测结果符合率为97.6％～100％.该方法的建立为基础研究和临床应用提供了技术平台.     

ELISA检测兰州不同动物粪便中轮状病毒抗原及临床意义

为探讨动物轮状病毒检测的临床价值及本地轮状病毒在不同动物中的流行情况,本研究以秋冬季腹泻的动物为研究对象进行采样,应用轮状病毒单克隆抗体检测其抗原的方法,检测粪便中的轮状病毒。在进行牛、羊、犬粪便轮状病毒检测中发现犬的阳性率最高,其次是牛和羊。表明本地的轮状病毒感染主要集中在幼犬中。本试验为今后动物轮状病毒在临床应用中的检测及动物轮状病毒检测试剂盒的研制等作以参考。     

犬瘟热病毒感染机制及其诊断方法研究进展

本综述介绍了犬瘟热病毒的6种结构蛋白N、P、L、F、H和M蛋白在病毒入侵宿主和宿主细胞内繁殖的功能;简要描述了犬瘟热病毒入侵动物机体感染传播的机制,其中细胞受体SLAM和PVRL4解释病毒的趋向性;介绍了临床诊断、试验动物法、血清学方法和核酸诊断等鉴别诊断犬瘟热的方法及其优缺点.通过系统了解犬瘟热病毒的感染途径及其诊断方法,有助于发现控制犬瘟热病毒传播的新方法.     

Identification and Molecular Characteristics Analysis of Porcine Epidemic Diarrhea Virus Variants

To ascertain a diarrhea case in a pig farm in Shandong province,the pathological changes of dead piglets were observed and nested RT-PCR test was carried out on 7 diarrhea samples for porcine epidemic diarrhea virus (PEDV).Pathological examination revealed that intestine was detected as enlargement,hyperemia and edema.After histological examination,the typical microscopic lesions of intestine were disappearance of epithelial cells,villus shrinkage and shortening.The result of nested RT-PCR showed that all of the 7 samples could amplify a specific target band of PEDV.Molecular characteristics of two field strains showed that they had an amino acid homology of 92.3% to 92.4% with vaccine CV777 and 96.6% to 98.6% with other previous field strains which sequences were downloaded from GenBank.Phylogenetic tree analysis further revealed that all of PEDV strains could be mainly divided into two clusters of G1 and G2. G2 consisted of the field strains of our study and other field strains from USA,China and so on,which had the same sequence characteristics of two insertions and one deletion,while G1 consisted of all vaccines of CV777 and several older field strains from China and Korea.These results indicated that our field strains were the dominant strains in recent epidemic diarrhea occurrence.Moreover,its molecular characteristics might be a characterization of differentiating the field and vaccine strains.     

一种利用气相色谱快速检测瘤胃体外发酵液中三甲胺浓度的方法

本试验旨在建立一种利用气相色谱快速检测瘤胃体外发酵液中三甲胺浓度的方法.瘤胃体外发酵试验设置2个组,对照组(n=4)和试验组(n=4),试验组每个发酵瓶中添加0.0414 g三甲胺盐酸盐,发酵24 h.采用10 mol/L氢氧化钾溶液对发酵液样品进行预处理,使用WEL-PEG20M色谱柱和氢火焰离子检测器对三甲胺进行分...     

畜牧兽医类期刊文后参考文献英文刊名著录问题

指出畜牧兽医类期刊参考文献中英文刊名著录存在的问题,列举了畜牧兽医学科领域常见英文刊名及缩写对照表,供作者参考.     

布尔山羊乳腺炎病原菌的分离与鉴定

应用三种方法对来自一个布尔羊场的50份奶样进行隐性乳腺炎检测，并对检出的阳性乳样进行细菌分离鉴定。结果表明，所用的三种方法具有良好的一致性；该羊场的隐性乳腺炎检出率为18％（9／50），阳性乳样中细菌检出率为77.8%(7/9),分离到6株病原菌，通过进一步鉴定，证明葡萄球菌和无乳链球菌是引起该场布尔山羊隐性乳房炎的主要病原菌，其次为大肠杆菌和巴氏杆菌。这就提示，对于布尔山羊，同样需要重视乳腺炎的预防与治疗。