猪白细胞介素2基因的克隆和酵母表达

以伴刀豆球蛋白A（ConA）诱导的猪外周血淋巴细胞中提取的总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增出约500 bp的DNA片段,对阳性克隆进行测序与分析。结果：所克隆的基因与GenBank上公布的猪白细胞介素2（PoIL-2）基因的同源性为100%,表明试验成功获得了PoIL-2基因的全序列克隆;以该重组质粒为模板进行PCR,扩增出PoIL-2成熟蛋白的基因片段,连接真核表达载体pPICZαA,成功地构建了重组PoIL-2成熟蛋白基因的真核表达载体pPICZαA-PoIL-2;电转化pPICZαA-PoIL-2于巴斯德毕赤酵母X-33,诱导表达后进行表达产物的SDS-PAGE鉴定,结果表明试验成功地建立了重组PoIL-2的酵母表达系统。     

牧草-鹅-鲜食葡萄循环生态种养模式的构建与实践

为了提高葡萄园资源利用率和综合效益,构建了牧草-鹅-鲜食葡萄循环生态种养体系。实践表明,在设施葡萄园推广套种牧草养鹅、鹅粪生产有机肥料、有机肥料种植葡萄和牧草等高效配套技术,取得了良好的经济效益、生态效益和社会效益。实施牧草-鹅-鲜食葡萄循环生态种养是江苏沿海地区发展现代农业的一种有效生产模式。     

猪瘟病毒广西流行毒株E0基因的克隆与分析

应用RT-PCR方法对猪瘟病毒E0基因进行扩增、克隆及测序,用DNA Star分析软件对6株毒株与猪瘟兔化弱毒苗(HCLV)、石门(Shimen)株、Paderborn株、GXWZ02株的相应片段进行比较分析,构建了CSFV遗传进化树。序列分析表明,广西流行株与HCLV株、Shimen株、Paderborn株、GXWZ02株之间核苷酸的同源性分别为80.8%~81.5%、82.8%~83.3%、93.1%~94.2%、93.7%~94.2%,推导的氨基酸同源性分别为88.3%~89.7%、89.7%~91.1%、96.2%~97.7%、97.7%~99.1%;6株广西CSFV流行毒株与国内外已发表的14株病毒相应序列进行比较,构建遗传进化树,结果表明所比较的20株毒株分为2个基因群,广西流行毒株均属于基因群Ⅱ。本研究成功地对广西流行猪瘟病毒株的E0基因进行了测序分析,表明近年来广西流行毒株未发生较大的变异,但病毒株有远离疫苗株发展的趋势。     

猪红细胞生成素受体基因突变与血常规性状关联分析

本研究旨在探索红细胞生成素受体基因(EPOR)影响红细胞相关性状的分子机理.对EPOR基因第1内含子和第4内含子突变位点g.705G＞T和g.2373C＞T,以飞行时间质谱进行个体基因型分型,在构建的大白猪×民猪F2代资源群体内开展其与6种血常规性状(红细胞压积、血红蛋白、平均红细胞血红蛋白量、平均红细胞体积、红细胞计数及红细胞分布宽度)的关联分析.结果表明,第1内含子突变位点g.705G＞T未发现与血常规性状显著关联;第4内含子突变位点g.2373C＞T群体内只发现2种基因型,其中CT基因型个体的红细胞压积显著高于CC基因型个体(P＜0.05),但并未发现与其他性状显著关联.结果显示,EPOR基因突变可显著影响红细胞压积,说明该基因可作为影响红细胞压积的主效候选基因开展深入研究.     

泛素激活酶抑制剂对猪精子获能状态、膜重构及体外受精的影响

【目的】评估泛素激活酶(E1)对猪精子获能、膜重构和体外受精的影响。【方法】选取5头长白猪采集精液,以硫醇酯法评估泛素激活酶(ubiquitin activating enzyme, E1)抑制剂(TAK-243)对精子中泛素(ubiquitin, Ub)与E1结合的影响;将精子分为鲜精组(Fresh)、DMSO组(DMSO)、获能组(Capacitated)及2.4、4.8和7.2 nmol/L TAK-243组,鲜精组用2 mL PBS重悬精子沉淀;获能组用2 mL获能液重悬精子沉淀;DMSO组及2.4、4.8和7.2 nmol/L TAK-243组分别用2 mL含0.07%DMSO及2.4、4.8和7.2 nmol/L TAK-243的获能液重悬精子沉淀,使用微生物动(静)态图像检测系统检测精子的动力学参数;以Western blotting法检测精子的酪氨酸磷酸化水平;Zn²⁺荧光探针检测精子的Zn²⁺含量;花生凝集素染色检测精子的顶体膜重构;免疫荧光法检测顶体表面精子黏附蛋白(AQN-1、AWN)的表达;体外受精法检测TAK-243...     

利用分散液-液微萃取和反相高效液相色谱-荧光检测器测定硒蛋白多糖中硒含量

本试验介绍了一种利用分散液-液微萃取前处理并将一种新型反相色谱柱应用于高效液相色谱-荧光检测器(HPLC-FLD)测定硒蛋白多糖中硒含量的方法.该方法以2,3-二氨基萘(DAN)为螯合剂,400μL乙腈为分散剂,120μL氯苯为萃取剂,硒(Ⅳ)与2,3-二氨基萘的螯合物(Se-DAN螯合物)经乙腈稀释后进行高效液相色谱...     

高铜对肉鸡肾脏线粒体抗氧化功能的影响

本文旨在了解高铜对肉鸡肾脏线粒体抗氧化功能的影响.选用1日龄科宝肉仔鸡120只,随机分成4组,分别喂以对照日粮(Cu 11 mg/kg,对照组)和高铜日粮(Cu 110 mg/kg,高铜Ⅰ组;Cu 220 mg/kg,高铜Ⅱ组;Cu 330 mg/kg,高铜Ⅲ组),检测梯度剂量硫酸铜在不同的饲喂时间(12日龄、24日龄、36日龄、48日龄、60日龄)肉鸡肾脏线粒体超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)的指标.结果显示:高铜Ⅱ组与高铜Ⅲ组SOD、GSH-PX、MDA都呈现代偿性升高,然后有降低的趋势.提示日粮中铜浓度达到220 mg/kg时,肾脏线粒体功能紊乱.     

不同猪种ESR基因多态性的PCR-RFLP分析

运用PCR-RFLP方法,检测了杜洛克、约克夏、长白猪、皮特兰、梅山猪、二花脸猪、枫泾猪、荣昌猪、苏太猪等9个国内外猪种的ESR基因PvuⅡ位点多态性。结果表明,在约克夏猪、二花脸猪、枫泾猪和苏太猪中检测到了AA、AB、BB 3种基因型,在杜洛克猪、皮特兰猪中检测到AB、BB 2种基因型,在长白猪、梅山猪、荣昌猪中只检测到了AB基因型。在本研究中不同品种的A、B基因频率差异显著,总体上在国外猪群体中A等位基因为优势等位基因,而地方猪种中B等位基因为优势等位基因。     

4种豆科牧草总皂苷含量的测定及其生长过程中含量的变化

以香草醛-冰醋酸为显色剂,采用分光光度法,测定三萜皂苷的含量,对波长、精密度、重现性和稳定性进行检测。并分别对鹰嘴紫云英Astragalus sinicus、红豆草Onobrychis viciaefolia、百脉根Lotus cornicμLatus和小冠花Coronilla varia 4种豆科牧草中皂苷的含量进行测定。结果表明,此方法简便易行,精密度高,重现性好,在25 min内测试结果稳定可靠。4种豆科牧草在整个生育时期总皂苷含量的变化不完全一致。鹰嘴紫云英和红豆草在初花期总皂苷含量最低,产草量较高,牧草品质优良,适宜青饲或调制干草;盛花期总皂苷含量丰富,产草量最高,宜作为生产中提取皂苷产品的原料。小冠花总皂苷含量始终较低,是一种优质的豆科牧草,不会使反刍家畜产生臌胀病。红豆草、鹰嘴紫云英、小冠花和百脉根4种豆科牧草在整个生育期皂苷含量均为叶中多于茎中。     

多年生黑麦草在高温胁迫下生理生化特性的变化

通过盆栽试验模拟高温胁迫对黑麦草(Lolium perenne)生理生化特性的影响,比较其3个品种的耐热性,并测定高温处理昼夜2种温度下(38℃/28℃)黑麦草的6种生理生化指标的变化.结果表明:随着胁迫时间的延长,各品种叶片的相对电导率和丙二醛(MDA)含量呈递增趋势,游离脯氨酸(Pro)含量亦呈递增趋势,其增加幅度与胁迫时间成正相关;叶绿素呈现持续下降趋势;过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)活性则呈先上升后下降的趋势.综合评价名仕最为耐热,热销和帅旗2代耐热性没有明显差异.