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TANK结合激酶1(TBK1)是病毒感染时IRF3、IRF7磷酸化及Ⅰ型干扰素表达的关键酶,在抗病毒天然免疫应答和获得性免疫应答中发挥重要作用。为研究TBK1基因敲除对猪伪狂犬病病毒(PRV)复制的影响,首先利用CRISPR/Cas9技术构建猪TBK1基因稳定敲除PK-15细胞系,并利用CCK-8检测敲除TBK1对PK-15细胞活力的影响。然后利用流式细胞术检测PRV-GFP荧光强度,用RT-qPCR检测PRV-gB、PRV-gE、PRV-TK、IL-1β、IFN-β和ISG15的转录水平,用Westernblot检测PRV-gB和PRV-gE蛋白表达水平,以及通过滴度测定检测子代病毒的感染力,综合评价TBK1基因稳定敲除PK-15细胞对PRV病毒复制的影响。结果显示:T7E1检测结果显示TBK1基因外显子2区的3个sgRNA靶位点均切出了目的条带,选取编辑效率最高的TBK1-sgRNA1细胞系进行单克隆化培养,获取6株稳定敲除TBK1基因的单克隆细胞,随机选取4号细胞株进行CCK-8检测,结果显示敲除TBK1对PK-15细胞活力无影响。流式检测结果显示PRV-GFP感染阳性细胞占总PK-15细胞的56.89%,PRV-GFP感染阳性细胞占总PK-15-TBK1-/-细胞的77.95%,表明PK-15-TBK1-/-细胞可以促进PRV-GFP复制。RT-qPCR及WB检测显示该细胞系可以促进PRVmRNA转录和蛋白表达。滴度测定结果显示,PRV-QXX在PK-15细胞复制后TCID50为10^6.8TCID50·0.1mL^-1,而在PK-15-TBK1-/-细胞中复制后TCID50为10^8.5TCID50·0.1mL^-1。另外,RT-qPCR结果显示该细胞系可以抑制PRV感染引起的IL-1β、IFN-β和ISG15转录上调。以上结果表明TBK1基因敲除PK-15细胞系促进PRV复制,可能与IL-1β、IFN-β和ISG15转录水平抑制有关。 相似文献
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不同投饲率对黄颡鱼幼鱼生长和存活的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
将黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco Richardson)幼鱼(体长1.621±0.1561cm,体重0.093±0.02g)放养在12个容水50L(40cm×30cm×41.6cm)水槽中,每个水槽30尾,投喂含粗蛋白40.53%、粗脂肪13.14%的配合饲料,以搅碎的泥鳅(Misgurnus anguilli-caudatus)为黏合剂(二者的比例为4∶1),投饲率为15%(1组)、20%(2组)、25%(3组)和30%(4组),每组三个重复。60d的饲养表明,4组鱼的成活率最高(81.57%),1组最低(18.75%),2组和3组分别为54.83%和54.54%。统计分析表明,随投饲率增加,鱼的增重率不断增加,2、3、4组鱼的增重率显著高于1组(P<0.05),但这三组间差异不显著(P>0.05)。1组鱼的呼吸代谢率高于其他组是生长缓慢的原因。本实验证明,黄颡鱼夏花培育期间,投饲率以25%~20%为宜。 相似文献
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盐度对鸭绿沙塘鳢幼鱼存活和生长的影响 总被引:7,自引:0,他引:7
在水温25.0℃~28.0℃下,将平均体重为(0.038±0.005)g的健康鸭绿沙塘鳢(Odontobutis yaluensis)幼鱼直接从淡水放入盐度9.0~14.0(梯度1.0)的水槽(45 cm×31cm×30 cm)中,其12、24、48、72和96h半致死盐度分别为13.56、12.76、10.41、9.92和9.74;放入盐度为28.2的海水中,其50%成活时间为37m in5 sec;经逐渐升盐、驯化后,在盐度0、2.0、4.0、6.0和8.0下饲养60d,结果表明,盐度为0时,鱼生长极显著地慢于其他盐度(p<0.01),盐度为2.0时生长最快,肠蛋白酶和淀粉酶活性高,鳃小片上细胞略膨大,球形,界线清晰,鳃充分张开,其它盐度间鱼的生长速度差异不显著(p>0.05),盐度8.0时鳃细胞萎缩变形,呼吸表面积减少。刚进入盐度2.0的头15 d里,鱼生长显著快于其他组鱼,之后差异不显著,即低盐水刺激鱼生长。 相似文献
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脂肪酸是乌龙茶香气形成的关键前体。选择18个茶树品种的闽北乌龙茶(毛茶与其复焙茶)和3个茶树品种的闽南清香型乌龙茶,采用硫酸-甲醇法制备脂肪酸甲酯,运用气相色谱-质谱分析其脂肪酸的组成及含量。结果表明,福建乌龙茶中检测到11种脂肪酸,含量较高的主要是含16个和18个碳原子的脂肪酸;闽北乌龙茶的脂肪酸总量及不饱和度均低于闽南乌龙茶;十六碳酸(C16:0)、顺,顺-9,12-十八碳二烯酸(C18:2)和顺,顺-9,12,15-十八碳三烯酸(C18:3)等9种脂肪酸的含量在品种间差异显著,以雀舌的C18:3和多不饱和脂肪酸含量最高;复焙对闽北乌龙茶的脂肪酸的影响与其碳原子数和不饱和度有关,其中二十二碳酸(C22:0)和二十四碳酸(C24:0)全部降解,但含量下降最多的脂肪酸是C18:3。由此可见,福建乌龙茶的脂肪酸含量及组成差异特征与其产地有关,并受茶树品种和工艺的影响。 相似文献
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为了研究吊水饥饿处理对土塘养殖大口黑鲈(Micropterus salmoides)鱼肉品质的提升效果,本研究在种植苦草(Vallisneria spiralis)的清水池塘中,比较了不同暂养时间下(0、1、4、7、10、13、16 d),鱼肉的营养成分、质构特性和土腥味物质的变化情况。结果发现,暂养不同时间后:(1)大口黑鲈鱼肉的水分含量显著下降至74.90±2.40%(第7 d),灰分含量显著上升,达到1.27±0.17%(第7 d);总糖含量先下降,后恢复至初始含量水平0.49±0.03 g/100 g(第13 d)。(2)鱼肉中不饱和脂肪酸新增加3种(C20:3n3、C20:4n3、C22:4n6),总脂肪酸达到23种(第10 d);游离氨基酸有16种,氨基酸滋味活性值(taste active value,TAV)随着暂养时间延长有显著变化(P<0.05),其中具有鲜味的谷氨酸TAV>1(第4 d),呈苦味的组氨酸TAV<1(第16 d)。(3)暂养10 d后,鱼肉硬度和咀嚼性显著增加(P<0.05)。(4)鱼肉中土腥味物质2-MIB和GSM含量分别由开始的0.42±0.01 μg/Kg和0.54±0.06 μg/Kg下降到0.33±0.05 μg/Kg、0.35±0.06 μg/Kg(第16 d)。本研究表明清水池塘暂养处理能显著改善大口黑鲈的鱼肉品质,综合提升效果和经济效益,暂养时间为10 d较好。 相似文献
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石棉县草科-田湾地区曾经多次发生大型泥石流,造成了严重的人员伤亡和财产损失。在大渡河流域石棉县地质灾害详查资料的基础上,以一级分水岭为界限,采用单沟泥石流风险评估方法对草科-田湾地区的26条泥石流沟进行了分析,确定了危险性和易损性的主要影响因素,并逐一分析了各条泥石流沟的危险性、易损性和风险性评价。然后采用由点至面的方法得到了泥石流风险性分布图,进而确定了各风险区的分布范围。结果表明,草科-田湾地区村庄附近的泥石流的危险性以中度风险和高度风险为主,沿沟谷有一定的分布特征。可为汛期地质灾害预警预报及今后治理次序提供参考依据。 相似文献
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乳铁蛋白肽是乳铁蛋白在酸性条件下经胃蛋白酶裂解,从N端释放的具有两亲性的阳离子多肽,具有广谱抗菌等诸多生理功能。目前,乳铁蛋白肽主要是通过水解乳铁蛋白来获得,成本昂贵,转基因技术是大规模生产乳铁蛋白肽的最佳途径,试验比较了常用碳源和氮源对已构建的基因工程菌的菌体生物量及蛋白表达量的影响,并采用正交试验对工程菌的发酵与诱导表达条件进行优化。结果表明:可溶性淀粉和牛肉膏可以提高菌体生物量,并且具有较高的融合蛋白表达量,所以分别采用淀粉和牛肉膏作为发酵培养基的碳源和氮源。正交试验结果表明可溶性淀粉7 g/L、牛肉膏30 g/L、氯化钠6.7 g/L,发酵温度37℃、诱导时间8h和转速200 r/min时可得到较高的菌体生物量和融合蛋白表达量。 相似文献