贵阳地区犬细小病毒NS1基因的克隆及序列分析

为了解贵阳地区犬细小病毒(CPV)非结构蛋白NS1的遗传变异进化状况,试验采用PCR检测、分子克隆、测序及生物信息学软件对分离自贵阳的8株CPV的NS1基因进行序列分析。结果表明:成功扩增并克隆测序得到8株CPV NS1基因,全长为2 007 bp,共编码668个氨基酸;分离株间NS1基因核苷酸序列的同源性为98.4%～99.8%,与10株犬类参考毒株CPV NS1基因序列的同源性为98.3%～99.6%,与其他11株非犬类参考毒株NS1基因核苷酸的同源性为39.4%～99.1%。说明CPV NS1基因具有一定的种属特异性,其亲缘关系越近同源性越高。     

不同浸泡时间和温度条件对文定果种子萌发的影响

文定果(Muntingia colabura Linn.)是热带地区的先锋树种,在我国华南地区零星栽培,具有极大开发价值。以深圳市梅林公园文定果种子为试验材料,设置了5个浸种时间条件(0h、12h、24h、48h、72h,)和4个温度条件(15℃、20℃、25℃、30℃),探讨文定果种子的萌发特性。结果表明:在5个浸种时间条件中,文定果种子在浸泡24h后有最高的平均发芽率(70.01%)和平均发芽势(52.26%);4个温度条件中,在25℃条件下种子发芽率和发芽势均达到最大值(70.23%、55.07%)。     

复方中草药对三穗麻鸭鸭坦布苏病毒净化后核心群生产性能及免疫指标的影响

为了开展三穗麻鸭鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus, DTMUV)的净化及探索净化后复方中草药对核心群生产性能及免疫指标的影响,试验采集胎粪、血液、泄殖腔棉拭子、蛋清样本共170 573份,应用ELISA、PCR方法进行鸭坦布苏病毒抗原检测。依据检测结果淘汰阳性鸭,结合禽病的综合防控措施,实施5个世代鸭坦布苏病毒净化方案,建立鸭坦布苏病毒核心净化群,并测定其繁殖性能指标(产蛋率、受精率、孵化率、雏鸭成活率、育成率)。在净化后4世代,从核心群中挑选7日龄三穗麻鸭共120只,分为4组,分别为低、中、高剂量组及对照组,每组3个重复,每个重复10只。低、中、高剂量组在基础日粮中分别添加0.1%、0.2%、0.3%的复方中草药,对照组只饲喂基础日粮,连续饲喂30 d后测定其生产性能指标(平均日增重、平均日采食量、料重比、平均终末体重、平均产蛋量)及免疫指标[免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)]。结果表明：经过5个世代净化,三穗麻鸭鸭坦布苏...     

芳香植物在深圳公园中的应用探析

为进一步挖掘深圳公园绿地景观生态功能的新内涵,探索公园绿地的"香化"途径,对深圳22个公园的芳香植物种类、应用频度、配置方式、应用需求等现状进行调查分析,并对芳香植物苗木生产供应情况进行摸底.结果表明,目前深圳公园应用的芳香植物约105种,存在芳香氛围弱、缺乏特色、功能性不明显等应用问题,但市民对公园应用芳香植物的需求...     

畜禽源3种革兰氏阴性杆菌多重PCR检测方法的建立与应用

为建立一种可准确、快速鉴定畜禽临床病例中3种常见革兰氏阴性杆菌的多重PCR检测方法,本试验针对大肠埃希菌23S rRNA基因、巴氏杆菌KMT基因和沙门氏菌invA基因分别设计合成了1对特异性引物,构建可同时快速鉴别大肠埃希菌、巴氏杆菌和沙门氏菌的多重PCR反应体系,并进行反应条件优化及方法性能评估。结果显示,所建立的方法最佳引物浓度分别为1.0、1.5和1.0 μmol/L,最佳退火温度为56 ℃。性能评价结果显示,所建立的多重PCR检测方法具有较好的特异性和敏感性,其中对沙门氏菌检测敏感性最高,为1.44 pg/μL。对70株革兰氏阴性临床分离细菌进行检测,结果表明,所建立的多重PCR检测方法能实现3种临床分离细菌的快速准确鉴定。本方法的建立为相关临床病例快速诊断及流行病学调查提供了有效的技术支持。     

固沙樟子松种子萌发与幼苗生长对干旱胁迫的响应及抗旱性评价

  目的  明确引种区不同生命周期阶段樟子松Pinus sylvestris var. mongolica固沙林在种子萌发期的天然更新优势。  方法  以科尔沁沙地南缘不同林龄樟子松固沙林种子为材料,采用聚乙二醇（PEG 6000）溶液（0、-0.054、-0.177、-0.393和-0.735 MPa）模拟不同干旱胁迫处理（ck、T₁、T₂、T₃和T₄）的方法,研究了其种子萌发与幼苗生长对干旱胁迫的响应特征及抗旱性。  结果  在干旱胁迫下,樟子松种子总体表现为萌发率下降,种子萌发时滞增加,萌发速率下降,萌发历时T₄处理下显著缩短（P < 0.05）;樟子松种子萌发对干旱胁迫的响应还存在林龄间差异,28年生樟子松种子萌发率响应干旱胁迫的阈值最大,林龄小的种子萌发历时延长。在干旱胁迫下,幼苗生长相对值均有所下降,且总体随着干旱胁迫的加强先增大后减小,胚根长则有所增大,胚芽长和胚轴直径随着干旱胁迫的加强呈减小的趋势;林龄小的幼苗生长对干旱胁迫的响应更敏感。采用隶属函数法综合分析,不同林龄樟子松在种子萌发期抗旱性由强到弱依次为16、28、35、54年生。  结论  樟子松种子通过降低萌发率、推迟萌发、延长萌发持续时间、减缓萌发速率、增加胚根生长适应干旱胁迫,种子萌发期的抗旱性随林龄的增加而降低,宜选用青壮年樟子松种子,结合立地条件进行人工促进樟子松固沙林的天然更新。     

犬细小病毒VP2蛋白的原核表达与纯化

为了研究犬细小病毒（canine parovirus,CPV）VP2蛋白的结构和功能,本试验对CPV VP2蛋白进行表达和纯化。采用大肠杆菌表达外源蛋白的方法,将CPV VP2基因插入原核表达载体pET-32a（+）中构建重组原核表达载体pET-VP2,转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,在不同IPTG浓度、诱导温度和诱导时间条件下进行原核表达,确定最佳诱导条件。最佳条件下的诱导产物经超声破碎离心后,利用镍柱对重组蛋白进行纯化并用SDS-PAGE和Western blotting进行双重鉴定。结果显示,重组质粒pET-VP2经双酶切鉴定分别获得大小为5 900 bp左右的载体条带和1 755 bp左右的目的基因条带,成功构建了pET-VP2重组质粒;重组VP2蛋白的分子质量约为64 ku,与预期大小一致,且在37℃、1.0 mmol/L IPTG、诱导5 h条件下表达量最高,条带最亮;蛋白超声破碎后经SDS-PAGE发现,只在沉淀中出现了目的条带,而上清中并未出现相应条带,说明重组蛋白均以包涵体的形式存在;纯化后获得的重组蛋白,经SDS-PAGE和Western blotting双重鉴定,均在64 ku处出现条带,说明纯化后的蛋白为重组蛋白pET-VP2。本试验通过对CPV VP2蛋白的原核表达及纯化成功获得了大量纯度较高的CPV VP2蛋白,为今后制备CPV VP2蛋白多克隆抗体及进一步研究该蛋白在对治疗犬细小病毒病中的临床应用价值提供了基础理论依据。     

H6N6亚型禽流感病毒感染鸭免疫器官中3种细胞因子的表达变化

为探讨鸭感染H6N6亚型禽流感病毒(AIV)后对免疫器官中细胞因子IL-2、IL-10和IFN-α转录水平的影响,建立荧光定量PCR方法对胸腺、脾脏、法氏囊中的IL-2、IL-10和IFN-α3种细胞因子检测,研究非免疫鸭感染H6N6亚型AIV后1、3、5 d各细胞因子在免疫器官中的变化。结果显示,建立的荧光定量PCR方法标准曲线相关系数R²为0.996～1.000,扩增效率为92.2%～93.6%,相关性较好,熔解曲线整齐单一,变异系数均小于9%,可用于后续试验;鸭在感染H6N6亚型AIV后的一定时间内免疫器官中的IL-2、IL-10和IFN-α呈现不同程度的转录水平变化,以及不同的细胞因子在不同组织之间的转录水平差异较大,其中IL-2在法氏囊中的转录水平比在胸腺和脾脏中变化明显较大;而IFN-α在胸腺和脾脏中的转录水平高于法氏囊;IL-10在免疫器官中转录水平较低。还发现H6N6亚型AIV感染鸭后免疫器官中的IL-2、IL-10、IFN-α转录水平在一定时间内为先上升后下降趋势,并且在感染后5 d降到最低。表明感染H6N6亚型AIV对鸭免疫器官中IL-2、IL...     

深圳市园林树池构造设计研究

树池承担着保护植物的功能,设计巧妙的树池还具有塑造园林景观特色、彰显环境氛围的重要作用。近年来深圳城市园林树池的建设存在诸如设计同质化严重、土壤环境恶劣、空间狭窄等问题。通过分析休憩型树池、艺术型树池、生态型树池等优秀树池类型及案例,从前期实地调研、土壤改良、树种选择等方面提出建议,并提出引根技术、隔根技术及组合式种植模块应用的树池构造设计新技术及新工艺。     

混菌发酵黑木耳合成γ-氨基丁酸的工艺优化

采用鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)和酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)混菌发酵黑木耳(Auricularia heimuer)合成γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)，在单因素实验的基础上，采用响应面法对发酵条件进一步优化。鼠李糖乳杆菌发酵阶段探讨了液固比、装液量、发酵时间、接种量对γ-氨基丁酸产量的影响；酿酒酵母菌发酵阶段探讨了发酵时间、接种量、发酵温度、摇床转速对γ-氨基丁酸产量的影响。结果表明：在鼠李糖乳杆菌阶段，最优条件为发酵时间18 h、接种量2%(V∶V)、液固比100∶1(mL∶g)、装液量60%，在酿酒酵母菌阶段，最优条件为发酵时间49 h、接种量1.5%(V∶V)、摇床转速160 r·min^-1、发酵温度30℃；在最优发酵条件下，黑木耳发酵液的γ-氨基丁酸产量为1.117 g·L^-1。