H9N2禽流感病毒HA2基因重组杆状病毒的表达

从pMD18-THA阳性质粒扩增了H9N2亚型禽流感病毒的HA2基因，将扩增到的HA2基因克隆至昆虫杆状病毒转移栽体pBlueBacHis2A中。将其与杆状病毒共转染于Sf9昆虫细胞，经蚀斑筛选纯化重组杆状病毒，用其感染Sf9昆虫细胞，并优化表达条件。SDS-PAGE和Western-blotting分析表明，表达产物的分子质量约为27ku。Dot-ELISA分析表明，表达的HA2融合蛋白可与鸡抗HgN2亚型血清发生特异性反应，而与H5和H7亚型抗血清间无交叉反应。     

鸭卵黄免疫球蛋白的提纯及兔抗鸭IgY(H+L)HRP标记抗体的制备

鸭免疫抗体的准确、灵敏检测不仅有助于鸭免疫系统的研究,更有助于鸭类疾病的预防和控制。我国是世界养禽大国,更是世界主要鸭类养殖地和消费国,鸭类疾病的防控直接影响到我国鸭类养殖业的持续、健康、快速发展。ELISA是一种高效、灵敏的鸭抗体检测技术,然而,到目前为止,尚无理     

猪精液稀释保存技术要点

1猪精液稀释的现状17℃保存,每天混匀两次,保存2～3天。2猪精液稀释保存技术要点2.1关于稀释粉溶解需准备:双蒸水(D.D.W.)、量筒、烧杯、磁力搅拌器、搅拌棒。2.1.1提前用量筒测量1升的双蒸水,注入烧杯。开始溶解前的双蒸水的温度是35℃～37℃左右。2.1.2一边将稀释粉缓慢地倒入,一边轻轻用     

猪精液稀释保存技术要点

<正>1猪精液稀释的现状17℃保存,每天混匀两次,保存2～3天。2猪精液稀释保存技术要点2.1关于稀释粉溶解需准备:双蒸水(D.DW.)、量筒、烧杯、磁力搅拌器、搅拌棒。2.1.1提前用量筒测量1升的双蒸水,注入烧杯开始溶解前的双蒸水的温度是35℃～37℃左右。2.1.2一边将稀释粉缓慢地倒入,一边轻轻用搅拌器搅拌。为了避免包装上附着的垃圾混入,提前擦干净     

葡萄皮和籽中游离酚和结合酚组成及抗氧化活性比较

为了提高葡萄加工副产物的综合利用率,以巨峰葡萄为原料,分离葡萄皮和籽中的游离酚与结合酚,采用HPLC法分析其组成及含量,并通过DPPH和FRAP法比较其体外抗氧化活性。结果表明,葡萄皮游离酚以儿茶素为主,籽游离酚以儿茶素和表儿茶素为主;葡萄皮和籽中结合酚均以绿原酸和表儿茶素为主;4种多酚均表现出明显的抗氧化活性,其活性大小为籽游离酚皮游离酚皮结合酚籽结合酚。本研究结果为葡萄加工副产物资源的合理利用提供了数据支持。     

禽流感病毒检测方法的研究进展

禽流感(Avian Influenza,AI)是由A型流感病毒引起的一种病毒性传染病,它于1887年在意大利首次被发现,现已呈广泛性传播和全球性分布,是世界动物卫生组织规定的A类传染病,我国也将此病列为一类动物疾病[1].     

禽白血病的危害及防控

禽白血病是由病毒引起的禽类各种可传播的肿瘤性疾病.有关禽白血病危害的研究报道可以追溯到19世纪末期,但当时对养禽业的影响较小,在很长一段时间内没有受到人们足够的重视.20世纪90年代后,由禽白血病病毒引起肉种鸡严重的成髓细胞性白血病,造成了巨大的损失,近年来由禽白血病造成死亡及淘汰的直接经济损失逐年增加,而由禽白血病感染后造成的免疫抑制、对疫苗应答能力下降、继发感染等的间接经济损失更是无法估量.正确认识禽白血病对养禽业的危害,采取有效的防控措施,是目前摆在我们面前亟待解决的问题.     

PRRSV变异株ORF6基因重组杆状病毒的构建及其在昆虫细胞的表达

参照GenBank中登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)XH-GD株ORF6(M蛋白)基因序列,设计合成了一对引物,扩增PRRSV ORF6基因.将该基因克隆于转移质粒载体pFcDNA3.1(+)中,获得重组转移质粒pFcDNA3.1-ORF6并将其转化DH10Bac细胞,得到重组穿梭质粒Bacmid-ORF6,再将其转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBacmid-ORF6,经PCR鉴定证实目的基因正确地插入到杆状病毒基因组的CMV启动子下游;经过问接免疫荧光试验(IFA)检测,M蛋白在SD细胞中得到了表达,而且表达的产物具有特异免疫学反应性.     

H5亚型禽流感病毒多肽疫苗的初步研制

本试验利用生物软件对H5亚型禽流感病毒A/CK/GD/178/04的血凝素进行抗原特性分析,结合关于禽流感病毒血凝素抗原位点的文献报道,选定97～212位氨基酸和369～529位氨基酸两个区域作为多肽表位候选区域.利用本实验室自主研发的原核表达载体pBT载体,串联表达HA的两个区域,经SDS-PAGE和Western Blotting分析,证明重组产物得到表达,Ni2+柱纯化重组蛋白后,对2周龄SPF鸡进行免疫,经HI试验检测该重组蛋白可以刺激机体产生HI抗体.本研究为H5亚型AIV多肽疫苗的进一步研制奠定了基础.     

鹅细小病毒不同毒株VP3基因的序列分析比较

分别将GPV4个分离株通过PCR技术，从病毒基因组DNA中扩增出病毒衣壳蛋白VP3完整基因片段，并与PMD18-T质粒载体连接，转化到感受态大肠秆菌TG1中，提取重组质粒经PCR鉴定和酶切鉴定后，对插入片段进行序列测定及分析。结果表明：VP3基因全长1605bp，编码534个氨基酸。不同毒株主要结构蛋白VP3基因同源性较高(95．64％—99．81％)。但强弱毒株间也存在一定差异。