盐度对企鹅珍珠贝耗氧率和排氨率的影响

研究了企鹅珍珠贝在不同盐度下(22、26、30、34、38)耗氧率和排氨率的变化规律,旨在为其养殖管理提供科学依据。所用贝的体质量规格平均为7.46 g(A组)、17.61 g(B组)和28.57 g(C组)。结果显示,当盐度为18时企鹅珍珠贝出现死亡,在盐度22~38范围内,耗氧率和排氨率与体质量呈负幂函数关系,可表示为Y=aWb。随着盐度的增加,企鹅珍珠贝的耗氧率也在逐步增加,当盐度为34时,耗氧率达到峰值,当盐度继续增加时,耗氧率会降低。随着盐度的增加,排氨率一直呈上升趋势,盐度为38时,排氨率最高。当盐度在22~34之间时,3种规格企鹅珍珠贝的O∶N值随盐度的升高而逐步增大,在盐度34时达到最大值,然后开始下降。根据耗氧率和O∶N值的变化幅度推测其适宜盐度范围为26~34。上述结果表明,企鹅珍珠贝对低盐度适应较差,在养殖生产中应根据盐度变化调整吊养水层。     

大珠母贝种苗海区深水中间培育技术研究

开展了大珠母贝种苗不同深度和密度的养殖试验,以优化、筛选合适的养殖密度和深度,为大珠母贝养殖提供技术支撑.贝苗初始大小为平均壳长4.11 mm,平均壳高3.89 mm,平均体重0.0143 g,养殖水深包括3、5、7m和海底(12 m)(贝苗密度为2 000个/笼),养殖密度包括500、1000、1 500、2 000、2 500个/笼(养殖水深为5m).经过两个月的养殖,7 nm水深的贝苗生长最快,平均壳长达30.80 mm(平均生长速度为0.41 mm/d),平均体重达3.34 g(平均生长速度为36.69 mg/d);密度为500个/笼的生长较快,平均壳长达30.15 mm(生长速度为0.42 mm/d),平均体重达3.18 g(生长速度为31.90 mg/d).深度组中存活率最高的是海底组(12 m),为17.7％,明显高于其他3组(P＜0.05),最低的是3m组,为6.9％;密度组存活率最高的是1 500个/笼组,为15.3％,显著高于其他组(P＜0.05),最低的是2 500个/笼组,为7.4％.不管是深度组还是密度组,第1个月与第2个月的平均壳长增长没有明显差异,而第2个月的平均体重增长明显大于第1个月.说明大珠母贝苗海区养殖适宜在较深水层、密度为1 500-2 000个/笼的条件下进行.     

斜带石斑鱼神经坏死病毒CP基因 shRNA干扰载体的构建及效果评价

利用Invitrogen公司的在线生物学软件分析斜带石斑鱼神经坏死病毒CP基因,设计针对CP基因不同位置的小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰序列[其结构特征为正链(19 nt)-环(4 nt)-负链(19 nt)]。化学合成这些序列,并退火连接为双链干扰片段,将双链干扰片段定向克隆到干扰载体pENTRTM/U6中,构建shRNA干扰载体pshRNA-124、pshRNA-896和pshRNA-NNV。然后,用脂质体转染法分别将3种shRNA干扰载体和pEGFP-CP基因共转染导入黑头呆鱼(FHM)肌肉细胞,荧光显微镜观察细胞荧光强度,分析荧光抑制效率,Real-time RT-PCR检测CP基因mRNA的表达水平变化。结果表明,在pEGFP-CP与shRNA干扰载体共转染组,pshRNA-124、pshRNA-896、pshRNA-NNV的荧光抑制效率分别为47%、68%、51%。3种shRNA干扰载体都有干扰效果,均能干扰绿色荧光蛋白的表达,其中pshRNA-896干扰效率最好。Real-time RT-PCR检测表明,干扰质粒pshRNA-124、pshRNA-896、pshRNA-NNV对pEGFP-CP基因的沉默效率分别约为60%、96%和55%,与对照组相比差异显著(P<0.05)。研究表明,靶向斜带石斑鱼神经坏死病毒CP基因的shRNA干扰载体构建成功,为进一步运用RNA干扰技术进行CP基因的功能研究奠定了基础。     

马氏珠母贝“南珍1号”

正第五届全国水产原种和良种审定委员会第三次会议审定通过了白金丰产鲫等12个水产新品种,现予公告。为推广优良品种,提高养殖效率,本刊将分期刊登这些品种的繁殖及养殖技术。     

大珠母贝两个野生群体遗传多样性的微卫星分析

利用6对微卫星DNA分子标记对三亚和北海的大珠母贝群体进行遗传多样性分析。结果表明,两个群体的平均等位基因数A分别为10．5和9．7,平均有效等位基因数N。为7．0和6．3,平均观察杂合度Ho为0．588和0．445,平均期望杂合度Hc为0．859和0．828,平均多态信息含量PIC为0．853和0．796;卡方检验发现只有位点Pmx＋022、Pmx16—41和Pmxl6—23在三亚种群中Har—dy—Weinberg平衡偏离不显著（P〉O．05）,其他位点在两个种群都有不同程度的偏离。     

中国海南三亚大珠母贝不同年代种群的遗传变异研究

利用10个多态微卫星标记对中国海南三亚海域大珠母贝（Pinctada maxima）3个不同年代（2007、2009和2010）群体的遗传变异进行了分析,每个群体30个样品。10个位点共扩增出60个等位基因,平均每个位点6（2—8）个,3个群体分别丢失了1、2和4个稀有等位基因。平均期望杂合度（Hc）、平均多态信息含量（PIC）、平均Shannon多样性指数均呈下降趋势。各群体均存在一定程度的杂合子缺失。30个数据中（3个种群×10个位点）有18个偏离了Hardy—Weinberg平衡。两两群体间的平均近交系数（FIS）介于0．2273～0．2601之间,平均遗传分化指数（FST）介于0．0204～0．0462,遗传分化显著（P〈0．01）。结果表明,3个年代群体遗传多样性水平已经出现了逐渐降低的趋势,遗传结构存在显著差异,近交程度增加,因此,人工繁育工作中应注意避免近亲繁殖和遗传多样性的降低。     

合浦珠母贝热休克蛋白hsp70基因的克隆与表达分析

采用同源克隆和RT-PCR技术对合浦珠母贝(Pinctada fucata)热休克蛋白hsp70基因进行了克隆和表达分析。获得cDNA全长序列2 365 bp,其中3’非编码区域(UTR)为318 bp,5’UTR为88 bp,开放阅读框(ORF)为1 959 bp,编码652个氨基酸,分子量约为71.39 kD,理论等电点为5.22,并含有3个HSP70家族的签名序列IDLGTTYS、DLGGGTFD和EEVD。同源性分析表明,合浦珠母贝HSP70的氨基酸序列与太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)等双壳贝类的相似性高达86%以上,基于氨基酸序列的聚类分析表明,合浦珠母贝与牡蛎属种类亲缘关系最近。高温、高盐刺激后,半定量RT-PCR检测发现hsp70基因的表达明显增加,高温刺激的表达量高于高盐刺激,高温刺激组不同组织的表达量由大到小依次为鳃、消化腺、外套膜、肌肉、性腺,高盐刺激组不同组织的表达量由大到小依次为鳃、外套膜、肌肉、消化腺、性腺,表明HSP70参与了机体对刺激的应答过程。该基因的克隆为进一步深入研究合浦珠母贝的抗逆机理及其遗传改良奠定了重要基础。     

合浦珠母贝遗传连锁图谱的构建

用AFLP标记构建了印度合浦珠母贝(Pinctada fucata)全同胞家系的遗传图谱。用经过筛选的36对引物组合对父母本和62个子代个体进行遗传分析,共得到1 547个标记,包括581个1∶1分离标记。母本分离标记294个,其中178个符合1∶1孟德尔分离规律;父本分离标记287个,其中182个符合1∶1孟德尔分离规律。雌性框架图包括33个遗传标记,分布在14个连锁群中,标记间平均间隔24.3 cM,有2个3联体,11个连锁对,图谱总长度为488.5 cM。雄性框架图包括53个遗传标记,分布在19个连锁群中,标记间平均间隔30.5 cM,有4个3联体,10个连锁对,图谱总长度为1 035.5 cM。雌雄两个框架图中AFLP标记的分布都较均匀。雌雄基因组估算长度分别为1 168.4 cM和2 037.1 cM,图谱覆盖率分别为41.8%和50.8%。本研究为进一步构建高密度遗传连锁图谱及QTL定位分析奠定了基础。     

合浦珠母贝家系遗传多样性与性状相关性

采用8对微卫星引物对合浦珠母贝12个家系的遗传多样与性状的相关性进行分析,结果显示,平均等位基因数(Ao)、平均有效等位基因数(Ae)、平均观测杂合度(Ho)、平均期望杂合度(He)和平均多态信息含量(PIC)等遗传参数与性状的表型参数总体上呈凸形曲线关系,表明中等遗传参数的家系性状表型普遍较好.但总体上,生长较快的家系,各遗传参数平均较大.     

添加光合细菌对糙海参幼苗培育阶段的影响研究

以受精后24h孵化出的糙海参（Holothuria scabra）耳状幼体为研究对象,探讨养殖水体不同量光合细菌对糙海参苗期生长、成活、消化道消化酶活性和养殖水体水质变化的影响。试验设4个处理,光合细菌（浓度为1×10^11cfu·mL^-1）添加量分别是0m L（组1,对照组）、50m L（组2）、100m L（组3）和150m L（组4）,每个处理设3个重复,每个重复放养4×10^4尾幼体于室内水泥池（5m×3 m×1.5m）中,试验周期为41 d。结果表明,添加光合细菌组的糙海参出苗体质量和成活率均显著高于对照组（P〈0.05）,而组3和组4的体质量和成活率又明显优于组2（P〈0.05）,组3和组4之间的差异不显著（P〉0.05）。添加光合细菌还能不同程度地影响糙海参苗体消化道蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶的活性,试验组3种酶的活性均显著高于对照组（P〈0.05）,而组3和组4的蛋白酶活性和纤维素酶活性显著高于组2（P〈0.05）,淀粉酶活性在3个试验组之间无显著差异（P〉0.05）。在试验第10天后,各试验组氨氮（NH3-N）和亚硝酸盐含量显著低于对照组（P〈0.05）,在试验第20天后,各试验组化学需氧量（COD）的值显著低于对照组（P〈0.05）,而总磷（TP）的差异不大（P〉0.05）。表明光合细菌可以促进糙海参幼体的生长,提高消化酶活性和成活率,并改良育苗水体水质。