几种主要禽疫病诊断基因芯片的制备及初步应用

进行了几种主要禽疫病诊断基因芯片制备及其初步应用研究。试验分别设计和克隆鉴定了NDV、IBV、AIV和IBDV的靶基因重组质粒。以克隆的靶基因重组质粒为模板。分别进行PCR扩增制备靶基因并纯化，以基因芯片点样仪将制备的靶基因点制在氨基化的基片上，经干燥、水合、紫外线交联和洗涤后，成功制备了NDV-IBV-AIV-IBDV诊断基因芯片。试验应用CY3荧光标记制备的探针进行芯片的检验，结果表明制备的NDV-IBV-AIV-IBDV诊断基因芯片质量好，可对NDV、IBV、AIV和IBDV进行诊断检测，具有检测灵敏性好，特异性高和芯片可重复检测的优点。试验对30个临床样品进行初步应用检测，结果表明该诊断基因芯片技术与RT—PCR检测技术检出率基本一致，并具有同步诊断检测多种疫病的优点。     

基因芯片用于病原微生物的检测和分型

1用于病原微生物检测和分型的基因芯片种类 1．1寡聚核苷酸检测芯片寡聚核苷芯片是报道最多的一种检测芯片。它是先从GenBank等核酸数据库中获得用于制作芯片的相关病原基因，然后用生物软件在病原科、属、种和型的保守基因区内设计出寡核苷酸探针，用于病原微生物科、属、种和型的鉴定；在各种微生物特有基因区内设计出鉴别探针，用于不同微生物的鉴别；在不同型的病原变异区内设计型和亚型鉴别探针，用于病原型和亚型的鉴定。将设计的探针在核酸数据库进行同源性比较，     

实时荧光定量PCR检测胸膜肺炎放线杆菌方法的建立及应用

研究建立检测胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的实时荧光定量PCR方法,并运用建立的检测方法对临床病料进行应用检测.根据GenBank报道的胸膜肺炎放线杆菌apxⅣA基因3'端391 bp核苷酸保守序列,设计1对特异引物扩增117 bp核苷酸片段,建立检测APP的实时荧光定量PCR方法和标准曲线,并利用该方法对收集肺脏组织和人工感染组织材料进行APP核酸定量检测.结果表明,构建的实时荧光定量PCR检测方法具有良好敏感性、特异性、重复性和临床应用性.该方法的建立为APP的临床高效诊断和APP感染的发生、发展和转归研究提供了一种有效手段.     

猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（pGM-CSF)基因的克隆与原核表达

通过RT-PCR方法,从经ConA刺激的猪外周血淋巴细胞中扩增出猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（pGM-CSF）编码区的cDNA并将其克隆至pMD-19T载体,序列测定表明pGM-CSF基因的长度为435 bp,编码144个氨基酸。通过PCR方法获得缺失其N端17个氨基酸残基信号肽序列的成熟pGM-CSF蛋白基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a（+）,构建重组表达质粒pET-GM并转入大肠杆菌(Escherichia coli )BL21（DE3）中进行诱导表达。经SDS-PAGE电泳和Western blot分析表明,表达的重组蛋白分子量约31 kD,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30.4% 。采用Ni2+-NTA亲和层析柱对经稀释复性的重组蛋白进行纯化,并采用MTT法以TF-1细胞检测纯化产物的生物学活性。结果表明,重组蛋白可有效刺激TF-1细胞增殖,其活性达到3.43×105 IU/mg。     

猪胸膜肺炎放线杆菌、肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌联合检测芯片的研制及应用

本研究旨在建立联合检测胸膜肺炎放线杆菌、猪肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌的DNA芯片.用7个从3种病菌基因组中扩增出的不同特异性靶DNA制作基因芯片,并对芯片的靶DNA和探针浓度、杂交温度、重复性、特异性和灵敏度进行了研究.结果表明,检测芯片的特异性强,能与测试的李氏放线杆菌、猪鼻支原体和副猪嗜血杆菌等9种病原区分;灵敏度高,在50μL标记反应体系中,能检测到10～50 pg基组DNA,芯片可重复利用.用芯片对44株目标菌的不同型标准菌株、分离株和疫苗株进行了检测.其信号值≥1 000,信号噪音比(SNR)≥6.用芯片对45头病猪和97头健康猪的临床样品选择培养物进行了检测,其检出率分别为多杀性巴氏杆菌71.1%和49.5%、胸膜肺炎放线杆菌42.2%和26.8%、猪肺炎支原体20%和22.7%,混合感染率分别为42.2%和24.7%.在检测临床样品时,芯片法与PCR的符合率为97.8%～100%,与分离鉴定法的符合率为87.6%～95.6%.研究表明,研制的芯片特异性强、敏感性高、可重复使用,是一种能有效用于胸膜肺炎放线杆菌、猪多杀性巴氏杆菌和猪肺炎支原体鉴定和联合检测的新工具.     

肉鸡关节炎的诊断与防治

[目的]对四川某鸡场20日龄肉鸡发生的关节肿大、跛行和瘫痪疾病进行诊治。[方法]结合临诊症状,对病鸡进行病理剖检、病原分离和血清学诊断,并筛选敏感药物进行治疗。[结果]该疾病被确诊为葡萄球菌和大肠杆菌混合感染引起的鸡关节病,丁胺卡那霉素为该疾病的敏感药物,经治疗控制了疫情。[结论]该研究为生产上肉鸡关节炎的诊治提供了依据。     

1型传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及生物学特性

目的掌握四川省部分规模化养猪场猪传染性胸膜肺炎放线杆菌耐药基因流行规律与耐药表型相关性。方法对疑似患有猪传染性胸膜肺炎的病猪肺脏组织进行细菌分离鉴定和生化试验,并对分离株进行系统进化分析、耐药表型和耐药基因的检测。结果从病变肺脏组织分离到11株疑似猪传染性胸膜肺炎放线杆菌菌株,呈革兰氏阴性短杆状,生化试验和DNA分子生物学鉴定11株分离株为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌。11株分离株呈多重耐药现象,对四环素和多西环素耐药率为90.90%;对盐酸林可霉素、复方新诺明和链霉素耐药率为54.55%;对盐酸克林霉素、庆大霉素、氯霉素和氟苯尼考耐药率为27.27%;对卡那霉素和红霉素耐药率分别为18.18%和9.10%。检测到sul3、tetB、tetC、ermB、floR、ant(6')-Ia、aph(2')-Id和aac(6')-Ie-aph(2')-Ia 8种耐药基因,携带率分别为100%、40.0%、100%、100%、100%、85.7%、14.3%和14.3%,与耐药表型相符。结论该地区规模化养猪场发生呼吸道感染死亡育肥猪细菌性病原是猪传染性胸膜肺炎放线杆菌,表现为多重耐药;分离株携带较多的耐药基因且与表型一致,为该病的防控和临床用药提供了科学依据。     

蛋与蛋制品行业2006年国内外技术发展综合报告

我国是世界第一产蛋大国,禽蛋产量连续19年保持世界第一的位置。我国蛋品加工历史悠久,但目前现代化蛋品加工业还处于初级阶段。加工技术相对落后,加工品种比较单一,未能形成工业化生产的规模优势和品牌优势,在推进我国由世界禽蛋生产大国成为世界蛋品强国的道路上任重道远。     

新经济条件下的企业虚拟化经营

新经济在今天受到越来越多的关注,它对企业的组织形态、竞争战略、经营理念都产生了重要的影响.企业虚拟化经营在这种经济条件下应运而生.通过业务外包与采购、企业共生、策略联盟等虚拟化经营方式能有效地增强企业核心竞争力,赢得竞争优势.