热应激对雏鸡自然杀伤(NK)细胞活性和T淋巴细胞转化率的影响

１００羽雏鸡笼养于２０℃，相对湿度为７５％的环境中，然后将试验组鸡（５０羽）转移至４０℃，相对湿度为９０％的环境中，观察热应激对雏鸡自然杀伤（ＮＫ）细胞活性和Ｔ淋巴细胞转化率的影响。结果表明，在应激２ｈ内，Ｔ淋巴细胞转化率显著降低（Ｐ〈０．０５），而ＮＫ细胞活性则显著升高（Ｐ〈０．０５）。耐过允的Ｔ淋巴细胞转化率在６～８ｈ后基本恢复正常，ＮＫ细胞活性也接近正常水平。对应激鸡的胸腺、法氏囊、脾脏的病理组织学动态观察发现，应激持续６～８ｈ后，均出现出血、萎缩、颗粒变性、水泡变性、脂肪变性为特征的变化。     

从实践教学入手,改革动物病理学教学

我国动物病理学现行的课程体系和教学内容是五十年代形成的,改革开放以来虽经多次改革,但仍未脱离旧有的窠臼。教学方法基本上还是单一的“满堂灌”,这种教学方式不利于学生能力的培养,不利于理论联系实际,不利于发挥学生的主观能动性。     

HSP70及HSP70 mRNA在热应激肉鸡组织中的定位

利用间接法免疫组织化学技术和RNA探针原位杂交技术，研究了HSP70 及HSP70 mRNA在热应激6 h处理肉鸡心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脾脏、胸腺和法氏囊等组织中的分布。结果显示，热应激6 h时HSP70 mRNA主要分布在肉鸡肝脏和肺脏中的血管壁及其周围，心肌纤维也有少量阳性信号，而脾脏、法氏囊和胸腺等组织未检出现阳性信号；热应激6 h时HSP70主要分布在所检肉鸡各种组织的血管壁。提示HSP70与热应激肉鸡心血管系统具有相关性，可能与心血管系统的功能和损伤有关。     

抗朊蛋白单抗用于牛海绵状脑病检测和细胞型朊蛋白在中枢神经组织中的定位和分布

朊病毒病（又称传染性海绵状脑病）的病原是致病型朊蛋（PrP^Sc），聚集在牛脑中能够引发牛海绵状脑病（BSE）。利用自制的单抗4C11和国外同类单抗进行免疫组织化学（IHC）的比较染色，结果显示单抗4C11和国际上常用的单抗在BSE阳性切片的IHC染色结果上没有显著差异；利用单抗4C11结合IHC方法检测中国山东省150例牛脑样品的实验表明，所有送检样品中IHC的检测结果均为阴性，而且IHC方法比较适合于我国BSE的检测；对中枢神经组织内细胞型PrP^c的IHC定位结果显示，PrP^c在牛脑组织不同部位的分布有差异。     

SYBR Green Ⅰ模式荧光RT-PCR鉴别新城疫病毒毒力

【方法】根据NDV的F蛋白裂解位点附近的序列，设计分别对应于NDV强毒和弱毒的两对引物，然后用SYBR Green Ⅰ模式的荧光RT-PCR方法比较两对引物对同一NDV的RNA扩增效率以及扩增产物的Tm值，来区分NDV的毒力。【结果】对8株NDV进行检测并测定其鸡胚平均致死时间（MDT），荧光RT-PCR方法的检测结果和MDT测定的结果完全一致，说明此荧光RT-PCR法可用于NDV毒力检测。     

bcl-2基因在成年和胚胎鸡免疫器官中的表达及其与细胞凋亡的关系

用一步法从17 日龄来克亨SPF鸡胚和90 日龄成年鸡的法氏囊、脾脏和胸腺组织中提取总RNA(TRNA),用鸡B-细胞淋巴瘤/白血病-2基因 (bcl-2) cDNA探针进行Northern blot杂交。发现bcl-2 在成年和胚胎鸡的不同免疫器官中表达量不同, 成年鸡bcl-2 的表达量多少依次为胸腺、脾脏、法氏囊, 而胚胎鸡则是胸腺、法氏囊、脾脏。同时用流式细胞法测定这些器官的细胞凋亡情况, 胚胎鸡法氏囊、脾脏和胸腺的细胞凋亡率分别是0.40% , 0.68% 和0.38% ; 成年鸡则是6.98% , 1.17% 和0.61% 。结果表明, 鸡bcl-2 基因通过阻抑细胞凋亡直接调控正常免疫器官的发育, 在淋巴细胞发育过程中bcl-2是免疫细胞亚型选择的重要调节物。     

热应激对鸡脾脏和法氏囊细胞凋亡的影响及其调节

18只AA肉鸡于22℃饲养。30日龄时，随机分成3组，分别进行0、5和10h的41℃高温应激处理。用流式细胞仪检测应激后不同时间脾脏和法氏囊细胞DNA含量、细胞凋亡率以及Caspase-3和Bcl-2的表达。结果表明，应激处理0、5和10h时，脾脏DNA合成期（S期）细胞比例分别是4．67％、5．11％、4．78％，法氏囊s期细胞分别是30．52％、24．71％、24．04％；脾脏和法氏囊细胞凋亡率分别是0．22％、0．42％、0．32％和0．32％、0．62％、0．41％；脾脏和法氏囊caspase-3表达阳性细胞率分别为5．49％、10．36％、9．80％和8．60％、10．51％、9．41％；Bcl-2表达阳性细胞率脾脏分别是31．32％、24．01％和29．26％，     

鸡胚免疫器官组织学发育过程观察

通过对孵化至12-21日龄鸡胚的免疫器官胸腺、脾及腔上囊进行组织学连续性观察，较为详细地描述了鸡胚免疫器官的组织发育过程。观察结果显示，胸腺的组织结构发育和形成较早，自12日龄起胸腺就已形成原始的胸腺小叶；虽然脾在12日龄时就已初具轮廓，但脾直到18日龄才开始隐约形成形态可辨的红髓和白髓；腔上囊淋巴滤泡自鸡胚发育到17日龄时即渐趋明显，但完整的滤泡皮质和髓质结构在出壳前仍然处于分化成熟阶段。     

鹅星状病毒基因Ⅰ型和Ⅱ型双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

鹅星状病毒(goose astroviruses, GAstV)作为一种雏鹅新发病原,对养鹅业造成巨大经济损失,在尚无有效治疗手段情况下,加强疫病及时检测和防控十分重要。为建立快速、特异且灵敏的鉴别GAstVⅠ型和GAstVⅡ型的病毒检测方法,本研究根据GAstVⅠ和GAstVⅡ的保守区域RdRp基因序列,设计合成2对特异性引物和2种不同荧光基团标记的TaqMan探针,建立了一种双重荧光定量PCR检测方法,以达到在同一反应体系中同时定量检测GAstVⅠ和GAstVⅡ的目的。结果显示,GAstVⅠ和GAstVⅡ的最小检出量分别为43.3、6.49 copies·μL^-1;重复试验的变异系数不超过0.5%;该方法对DPV、GPV、GTMUV、GRV、AIV(H9N2)等病毒核酸无交叉反应。综上表明,本研究建立的可鉴别GAstVⅠ和GAstVⅡ的双重荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强、重复性好。可用于临床GAstVⅠ和GAstVⅡ的快速鉴别诊断,也可用于两种基因型GAstV的定量分析。