肝螺杆菌LAMP快速检测方法的建立及初步应用

根据肝螺杆菌fla B基因保守区域设计一组特异性引物,经过条件优化、特异性和敏感性分析,成功建立了肝螺杆菌LAMP快速检测方法。结果显示,建立的LAMP扩增方法仅能检测出肝螺杆菌,其他常见细菌未见特异性扩增。检出肝螺杆菌最低模板量为86.9fg/L,是普通PCR所需模板量的1/10。本研究建立的LAMP快速检测方法具备操作简单、特异性好、灵敏度高的优点,结果易于观察,对仪器设备要求低,适宜推广应用。     

江苏地区猪圆环病毒2型流行病学调查

应用复合PCR方法,对江苏地区的162份可疑病料进行了检测,结果72份病料为PCV2阳性,17份为PCV1阳性,其中7份同时感染PCV1和PCV2。从发病时间看,以9~11月发病最多,阳性率高达54.67%。样品较多的保育猪和育肥猪的阳性率分别是26.03%和68.12%。通过流行病学调查,表明该病已在江苏地区呈流行趋势。同时对18头PCV2阳性猪病料的心、肝、脾、肺、肾、脑、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结、扁桃体进行PCV2检测,结果有7头PCV2阳性猪的各个脏器都能检测出PCV2;在这些脏器中,肺、腹股沟淋巴结、扁桃体的检出率都为100%,较其他受检脏器更适合作为PCV2的检测样品。     

H5亚型禽流感疫苗免疫肉鸡、水禽后抗体消长规律的研究

通过对父母代肉鸡、水禽禽流感病毒H5血清血凝抑制抗体水平连续跟踪监测。探讨Hs亚型禽流感疫苗免疫肉鸡、水禽后抗体消长规律。结果表明：雏鸡7日龄时母源抗体水平达最大值,20日龄时母源抗体下降到极低水平,雏鸡最佳首次免疫日龄为10日龄左右,二次免疫应根据鸡群母源抗体水平于首次免疫后100d左右进行。雏鹅、鸭3日龄进行首次免疫,水禽对禽流感疫苗产生良好的免疫应答,并于免疫后25-30d达到抗体高峰,但首次免疫抗体维持时间不长,最佳二次免疫时间应在首次免疫后30d左右进行。     

我国部分地区禽病原性大肠杆菌的分离与鉴定

从江苏、广东、河南、新疆、四川、北京、黑龙江等１８个省、市、自治区临 有典型大肠杆菌病病变的病禽１０５１羽采集病料,分离培养和鉴定出５９５株大肠杆菌。经Ｏ血清型测定,除１４４株未能定型、１１株自凝外,共出４４０个分离株的Ｏ血清型。这些 ５０个血清型,但以Ｏ１８、Ｏ７８、Ｏ２、Ｏ８８、Ｏ１１、Ｏ２６、Ｏ４、为、Ｏ１２７６、Ｏ１３１等１０个血清型为主,这些分离株覆盖了６０个血清型,但以血Ｏ１８、Ｏ７８     

鸡Toll样受体15单克隆抗体的制备及其初步应用

旨在制备鸡Toll样受体15 (ChTLR15)的特异性单克隆抗体(mAb),并初步应用.利用PCR技术扩增ChTLR15第162-386位氨基酸,克隆于载体pET-30a中进行诱导表达,获得高纯度的重组ChTLR15 (162-386 aa)蛋白.然后采用皮下多点注射方式将ChTLR15免疫6周龄的雌性BALB/c小...     

猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的研制

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)JYC株全病毒作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,融合后经间接ELISA进行杂交瘤筛选,共获得4株能分泌针对PRRSV单克隆抗体(简称单抗)的杂交瘤细胞株,分别命名为2G7、6G7、7F2和7E8,其亚类均为IgG1;单抗腹水的间接ELISA效价分别为10×215、10×211、10×215、10×214;间接ELISA试验结果表明,4株单抗与实验室保存的江苏地区临床分离的12株PRRSV以及VR-2332均发生特异性反应,而与猪常见其他病毒如猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(HCV)、猪圆环病毒2(PCV2)均无反应性;间接荧光试验表明,4株单抗与Marc-145细胞感染的PRRSV均呈特异性的荧光反应。因此这些单抗均可用于ELISA方法以及间接荧光试验,从而为建立快速、敏感的PRRSV的抗原检测方法奠定了基础。     

禽病原性大肠杆菌O2和O78外膜蛋白型的初步研究

从１１个禽败血症Ｏ２和Ｏ７８大肠杆菌分离株提取的主要外膜蛋白（ＯＭＰ），出现了３个ＯＭＰ型。其中６个Ｏ２分离株、５个Ｏ７８分离株可分别归为２个ＯＭＰ型，但有１个ＯＭＰ型为两者所共有，结果表明，从江苏地区所分离到的禽病原性大肠杆菌具有多样性的ＯＭＰ型，而且这２个血清型菌株中存在着共同的ＯＭＰ型。     

掺沙对盐渍土土块崩解和土壤盐分淋洗的影响机理

黄河三角洲地区的土壤入渗性能差,且盐分含量高,掺沙可以加速盐渍土块崩解,改良土壤质地与结构,从而改善入渗性能和水盐在土壤运移过程。以黄河三角洲地区盐渍土土块为研究对象,采用室内土柱模拟试验,设置3种掺沙比例：CK （0）、S1（20%）、S2（50%）,土块组成：<1 mm （20%）,1~2 mm （28%）,2~5 mm （34%）,5~10 mm （18%）研究积水入渗条件下掺沙比例对相继2次入渗过程中盐渍土土块崩解及其对水盐运移的影响,从而明确掺沙对盐渍土的改良效果。结果表明,在第1次灌水淋洗和水分再分布后,用干筛法和湿筛法测量得到S1和S2土壤> 0.25 mm的土块含量,较对照组分别降低17.92%,15.50%和51.45%,32.00%;不同掺沙比例下,同一时刻的湿润锋和累计入渗量均表现为S2 > S1 > CK,且S1和S2的稳定入渗率在第1次和第2次入渗过程中,较对照组分别增加60.00%,66.67%和400.00%,900.00%;同一土层深度的脱盐率随掺沙比例增加,掺沙比例为50%时,脱盐深度比20%和对照组分别增加33.3%和45.45%,脱盐量分别提高1.19%~19.01%和4.21%~77.52%。综上,盐渍土掺沙可以有效促进盐渍土块崩解,提高入渗速率和洗盐效率。研究结果可为盐碱地改良提供参考依据。     

低致病性禽流感病毒与禽病原性大肠杆菌的联合感染试验

以１０＾５．１７ＥＬＤ５０的低致病性禽流感病毒（ｍｉｌｄｌｙ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ａｖｉａｎ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ,ＭＰＡＩＶ）气管内注射１０日龄ＳＰＦ鸡,２４ｈ后,重复感染一次,４８ｈ后,气管内注射禽病原性大肠杆菌３５３（０１８）、１２０（０１８）、０３７（０７８）、１６６（０７８）、０５５８（０２）、５３６（０８８）、１３２（０１１）和１７３（０２６）株,３×１０＾７ＣＦＵ／羽,连续观察５ｄ。结果：ＭＰＡＩＶ单独感染组死亡率为１３．３３％各大肠杆菌单独感染组的死亡率分别为３５３：１００．００％、１２０：６０．００％、０３７：８０．００％、１６６：８６．６７％、０５８：１０．００％、５３３６：９３．３３％、１３２：８６．６７％和１７３：２０．００％;ＭＰＡＩＶ与上述各分离株的联合感染组死亡率分别为１０     

鸡痘病毒载体复制非必需片段优化及强启动子的筛选

以痘苗病毒启动子Ｐ７．５调控的β－半乳糖苷酶基因为检测基因,分别插入三个复制非必需片段构成重组质粒,脂本介导转染鸡痘病毒中国疫苗株２８２Ｅ４感染原代鸡胚成细胞（ＣＥＦ）单层,蓝斑选纯化病毒;将重组病毒感杂次代ＣＥＦ,收获细胞后制备提取物,检测其中的β－半乳糖苷酶的活性,由此得到一个基因表达效率高的复制非必需片段ｐＦＰＶ７ｓ。根据痘苗病毒天然启动子Ｐ７．５的结构,人工合成４条寡核苷酸,形成一个早期和