牦牛源BVDV非结构蛋白NS5A的原核表达及抗原表位分析

【目的】利用原核表达系统体外表达牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)NS5A基因,获得非结构蛋白NS5A,对其进行核苷酸、氨基酸序列分析,以解析BVDV非结构蛋白NS5A的功能。【方法】参考BVDV-1型毒株V006的NS5A基因序列(GenBank登录号:KX170647)设计并合成1对特异性引物,以分离到的牦牛BVDV GSTZ毒株cDNA为模板,PCR扩增NS5A基因片段,并克隆至表达载体pET-28a (+)中,构建重组原核表达载体pET28a-NS5A。经酶切初步鉴定及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,然后利用IPTG诱导表达。经10% SDS-PAGE电泳及Western blotting分析鉴定重组蛋白的表达,并根据NS5A基因的序列构建遗传发育进化树,利用DNAStar软件预测NS5A蛋白的亲水性、表面可塑性和抗原性等特性,并结合二级结构的预测对NS5A蛋白的B细胞抗原表位进行预测。【结果】PCR扩增NS5A目的基因片段为1 488 bp,双酶切和测序鉴定结果证明,重组质粒pET28a-NS5A构建成功。经10% SDS-PAGE电泳及Western blotting鉴定重组蛋白,表达出了大小为55 ku的目的蛋白,大小与预期结果相符。通过对不同BVDV毒株NS5A基因序列构建遗传发育进化树,显示GSTZ毒株NS5A在遗传进化特征上属于BVDV-1型。NS5A蛋白的亲水性主要位于12—21、32—69、75—113、120—135、143—147、152—163、165—180、215—230、265—274、296—340、348—378、389—447、455—463、469—495位氨基酸处,表面可塑性主要位于14—18、37—42、76—81、86—109、154—160、169—178、218—228、297—309、348—358、365—373、414—442、430—437、454—460位氨基酸处,柔性区域较多,主要位于14—21、37—43、67—82、86—93、97—110、152—158、169—179、218—231、240—255、296—310、313—328、344—359、364—373、413—422和472—483位氨基酸处。NS5A蛋白的B细胞抗原表位主要位于15—18、76—81、154—158、169—178、218—228、297—309、348—358、365—373和414—422位氨基酸处。【结论】成功表达并鉴定了牦牛源BVDV的非结构蛋白NS5A,系统发育进化树表明BVDV GSTZ株基因型属于BVDV-1型,NS5A蛋白具有良好的抗原性,为深入解析BVDV非结构蛋白NS5A的自身结构功能、免疫学特性以及进一步研究非结构蛋白对病毒复制的影响提供参考。     

四川省林区森林火灾特点及灭火对策

四川省地形复杂，气候差异较大，一旦发生森林火灾，灭火人员难以接近，扑救难度大，危险性高。武警森林部队作为灭火主力军，应根据不同的山情、火情、社情及林情精研战法。制定出相应的对策，以期达到更好地保护森林资源的目的。     

松根浸提渣制造活性炭中间试验报告

松根浸提渣具有多管胞、多树脂道的结构,在小试和批量生产试验中经炭化、烟道气造孔活化得到结构特殊,吸附性能优异的活性炭:1.具有较大的比表面积(S=1369m~2/g)和微孔(=84),在液相脱色,净化中具有广泛的适应性;2.吸附法A焦糖液,达到国家一级品标准——目前国内还只能用氯化锌法生产这个指标的活性炭,但却无法解决生产过程中氯化锌所造成的污染和微量氯化锌滞留在炭中的问题;本试验证明,正确的选择原料(如松根渣)可以制造无毒、优质的糖用炭;3.产品适于做脱色炭中的高档产品—味精炭,对酞酸钠中的色素、杂质吸附能力超过味精炭的国内名牌水解木素活性炭和在国际市场上声誉很高的台湾炭业公司的A类味精炭。松根渣粒度分布适宜,适用于国内现有的连续化生产的活化炉。松根经切碎,汽油浸提事实上已起到了净化松根浸提渣活性炭原料的作用。松根浸提渣含汽油和大约4.6—5.6％的树脂,易燃易爆。敦化松根浸提厂已积压废渣五万余吨,占大半厂区,堆高超过厂房,成为威胁该厂所在地区安全的重大隐患,研究松根浸提渣的利用不仅是发展木松香的需要,同时也是该厂继续生产的重要课题。国外有松根浸提生产的国家已注意到浸提废渣的利用问题,保加利亚已有用松根浸提渣生产活性炭的企业,苏联决定1979年在浸提松香厂用松根浸提废渣生产脱色活性炭。根据国内、国际市场对高档脱色炭的需要情况和松根浸提渣的结构特点,我们对松根浸提渣制造活性炭进行了必要的试验室准备和大批量的生产试验,在检验产品性能时除在试验室与一些应用范围广泛的脱色炭进行吸附性能比较外,还进行了必要的使用鉴定。小型试验根据一般气体活化法生产活性炭的工艺路线,小试按着: 原料→炭化→活化→后处理→成品的过程进行。     

橡栲胶用作建材工业外加剂的试验研究

在湿法水泥生产中掺入０．０８％的橡栲胶，可使入窑生料装降低２％的水分，因而降低了烧炉的热损耗，缩短烧时间。在混凝土中加入０．２５—０．５％的橡栲胶，能明显提高混凝土的塑化缓凝性能，其初凝时间推迟３６ｍｉｎ—２ｈ４８ｍｉｎ，终凝时间推迟１ｈ５８ｍｉｎ—３ｈ４９ｍｉｎ，有利于夏季和大体积施工及大型混凝土搅拌站的输送和施工等。在水泥沙浆中掺入０．２５—１．０％的橡栲胶，能显著地提高其力学性能，２８天龄期时，其抗压强度超过空白的８％左右．     

海塘盐土种竹的初步研究

讨论了在中盐中碱盐土（含盐量０．３０％～０．５０％，ｐＨ８．０１～８．９９）上引种角竹、雷竹的技术，采用及时中耕、地表覆盖、增施有机肥料以及施用微量元素等改良盐碱土措施，加快脱盐、脱钙，提高盐土种竹的成活率。     

舟曲林区落叶松人工林经营密度的研究

本文通过对舟曲林区沙滩、铁坝林场落叶松人工林的立木胸径和冠幅的调查,用数理统计原理进行了林木调查因子的差异性检验,得出胸径与冠幅的相关受其影响不显著,进而用胸径与冠幅的相关关系推导出胸径与密度的回归方程式为N=-43.4840+1992.9909 D~(-1),然后根据此式编制经营密度表,依表确定落叶松人工林定量间伐,从而使林分密度达到合理密度。     

乌天麻与红天麻在自然条件下花期相遇调控技术

在自然条件下,乌天麻和红天麻花期相差20~30 d,在相同条件下试验栽培,乌天麻和红天麻花期相差7~8 d.通过利用薄膜小棚和海拔高差,调控乌天麻与红天麻发育过程,促其花期相遇并获得成功,且调控成本比室内加温低,实用性强,为乌天麻和红天麻杂交育种开辟了一条新途径.     

丙酮回收用活性炭微结构的研究

利用AS-703比表面积、孔径分布测定仪对几种回收丙酮溶剂的商品活性炭进行了比较深入的剖析,从微观结构上阐明了影响丙酮回收用活性炭的主要因素,并提供了国产化样品,与进口商品活性炭相比较具有价格低吸附性能好等优点.微孔容积的大小决定了丙酮吸附量的多少,而与总孔容积关系不大.丙酮回收用活性炭的孔径主要集中在1nm左右,微孔容积在0.40～0.50cm3/g.     

北美红杉生态因子的研究状况

北美红杉自然分布范围狭窄 ,通过 10 0多年的努力 ,北美红杉已在 2 0多个国家成功引种。许多学者对北美红杉的生态因子进行了大量的研究。为了解国内外的研究状况 ,从影响北美红杉分布和生长的光、温度、雾、土壤 4个重要的生态因子出发 ,结合该树种自然分布区的生态环境 ,对其研究成果进行了概括和分析