狂犬病病毒GX074株P蛋白48～78位区域氨基酸联合M蛋白突变株的构建及特性研究

为探究广西狂犬病病毒街毒GX074株P蛋白联合M蛋白对生物学特性的影响，实验以构建的弱毒疫苗株rRC-HL感染性cDNA克隆质粒pRC-HL为基础，将GX074株P蛋白的48～78位区域氨基酸及M蛋白联合替换到pRC-HL相同位置，进行突变病毒的拯救，经间接免疫荧光实验及序列测定获得突变体rRC-HL(GX074P^48～78M)。结果表明，突变体病毒rRC-HL(GX074P^48～78M)基因组稳定，拯救后的荧光灶小于亲本弱毒rRC-HL株，大于亲本强毒GX074株及CVS-11株；在细胞中的复制能力表现出与rRC-HL株相似的特点，多步生长曲线显示突变体病毒滴度略低于rRC-HL,而稍高于GX074株及CVS-11株。说明突变体毒株rRC-HL(GX074P^48～78M)相较于亲本弱毒rRC-HL株复制能力有所降低，比亲本强毒GX074株复制能力略高。     

有效阻断猪链球菌传播模式的探索

为了探索中越边境地区防控人感染猪链球菌的有效模式，试验选取3个猪场作为猪链球菌病免疫场和非免疫场，运用PCR和ELISA方法评估猪场免疫防控猪链球菌2型的效果，即选择边境地区东兴市、大新县和那坡县作为猪链球菌2型免疫示范区，对猪群接种猪链球菌2型疫苗后监测屠宰场和免疫场的猪链球菌2型抗体水平，以及通过培训等方式对普通群众和密切接触的相关人员普及猪链球菌病防控知识，并调查了免疫示范区人感染猪链球菌的情况。结果表明：免疫场猪群在免疫猪链球菌2型疫苗2次后产生较高的抗体水平，能极显著降低猪链球菌的感染率(P<0.01)。2016—2020年免疫示范区东兴市、大新县和那坡县猪链球菌2型疫苗免疫平均密度达到73.24%,免疫场猪链球菌2型抗体水平合格率为93.37%。3个县(市)实行免疫后，连续5年人感染猪链球菌数为0。说明在猪场进行猪链球菌2型疫苗免疫，能有效阻止猪群感染猪链球菌；在中越边境建设猪链球菌免疫示范区，通过加强疫苗免疫、抗体监测及防控培训切断了猪链球菌传人的途径，实现了人员零感染猪链球菌。     

2019-2021年鸭坦布苏病毒广西流行毒株遗传多样性分析

【目的】研究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)广西毒株分子遗传特征,以期了解、掌握DTMUV广西毒株流行新特点,为及时调整、制定有效防控措施提供数据支持。【方法】采集2019-2021年广西各地的鸭组织病料,采用已建立的实时荧光定量RT-PCR方法检测DTMUV,根据毒株检测年限和来源地选取部分阳性样品进行DTMUV全序列扩增及测序,并进行序列相似性、重要蛋白关键氨基酸位点、系统发育、全序列重组及遗传进化速率分析。【结果】共获得8株DTMUV全序列,基因组全长为10 992 bp,为广西毒株。广西毒株之间开放阅读框(ORF)及E、NS5基因的核苷酸序列相似性分别为97.9%~99.8%、97.0%~99.9%和97.8%~99.9%,氨基酸序列相似性分别为99.1%~99.9%、99.0%~100%和99.3%~99.9%;与国内外参考毒株的核苷酸序列相似性分别为86.4%~99.3%、85.8%~99.5%和87.1%~99.2%,氨基酸序列相似性分别为96.0%~99.8%、94.8%~100%和97.5%~99.9%,且与水禽源TMUV相似性高于其他宿主源。与疫苗株FX2010相比,DTMUV广西毒株E蛋白共有11个氨基酸位点发生变异,其中第43、150、153、326、403、464及487位为广西毒株独特的氨基酸突变。ORF遗传进化分析结果显示,广西毒株均分布于2.1亚群,而源自广西的GX2011和GX2015株隶属于2.2亚群,表明DTMUV广西流行毒株进化趋势不完全一致;E、NS5基因系统发育趋势与ORF相似。重组分析结果表明,GXBH01-2019、GXZS02-2020、ziYY150901及HB2016株检测有重组信号。E、NS5基因的遗传进化速率估算分别为1.31×10^-3和1.30×10^-3替换/(位点·年),表明二者进化较为同步。【结论】当前DTMUV广西流行毒株表现为与主要流行毒株亲缘性较近,E蛋白发生特有氨基酸突变,进化趋势不一致,存在重组现象等分子特征,结果为制定有效防控措施提供了基础数据。     

鹅细小病毒、番鸭细小病毒及鸭圆环病毒多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与临床应用

为建立鉴别检测鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)及鸭圆环病毒(DuCV)的方法，本研究分别针对GPV、MDPV NS基因与Du CV Rep基因，设计特异性引物和Taq Man探针，经优化反应条件，建立了同一体系中同时鉴别检测GPV、MDPV及Du CV的Taq Man荧光定量PCR方法。利用该方法检测GPV、MDPV、Du CV及禽流感病毒、新城疫病毒、鸭瘟病毒、减蛋综合征病毒、鸭坦布苏病毒、番鸭呼肠孤病毒等主要水禽源病毒，结果显示，该方法仅能扩增出GPV、MDPV及Du CV，与其他主要水禽源病毒均无交叉反应，特异性强；利用该方法检测等体积混合后的GPV、MDPV及Du CV质粒标准品混合物，结果显示，该方法对3种质粒标准品的检测限均为7.5×10¹拷贝/μL，普通单一PCR对上述3种质粒标准品混合物的检测限均为7.5×10³拷贝/μL，表明本研究建立方法的敏感性高于普通PCR；该方法组内与组间重复性试验的变异系数均小于2.0%，重复性好。利用该方法与MDPV和GPV双重荧光定量PCR方法及Du CV荧光定量PCR方法同时检测...