利用微卫星标记分析迪庆黄牛的遗传多样性*

 采用分布在黄牛基因组15条染色体上的15个微卫星标记对迪庆黄牛60个样品进行了群体遗传变异检测分析。共检测到63个等位基因,每个座位的等位基因数从2~6不等,有效等位基因数在2.0000~4.0000之间,平均每个座位等位基因数（4.2000±0.8619）个,有效等位基因数（3.552 9±0.531 2）个,群体平均表观杂合度、期望杂合度及平均多态信息含量分别为0.9958±0.0161,0.7098±0.0637和0.6573±0.0851。结果表明,迪庆黄牛群体遗传变异丰富。     

青贮巨菌草乳酸菌的分离鉴定及其对蚕豆秸秆青贮发酵的效果

【目的】从青贮巨菌草中筛选分离抑菌性能良好的乳酸菌,并研究其对蚕豆秸秆青贮发酵的效果。【方法】从青贮巨菌草中分离纯化乳酸菌;用指示菌(大肠杆菌K88、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌)筛选获得拮抗菌;综合菌落形态、革兰氏染色和16S rDNA分析对其进行鉴定;通过生长曲线、产酸和抑菌能力、抗生素耐药性等确定青贮乳酸菌的特性;用筛选到的具有较强抑菌能力的乳酸菌发酵蚕豆秸秆,检测蚕豆秸秆的常规营养成分,并进行感官评价和霉菌毒素含量测定,确定所筛选乳酸菌对青贮发酵的效果。【结果】从巨菌草青贮产物中筛选到1株可抑制大肠杆菌K88、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的乳酸菌R-01,并将其鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。该菌生长优良,产酸性能好,有较强的抑菌能力;对多种抗生素有较强的耐药性;将该菌作为添加剂,能有效提高青贮蚕豆秸秆的营养价值并降低霉菌毒素含量。【结论】筛选鉴定的R-01乳酸杆菌具有优良的生长、产酸、抑菌及耐药特性,可使青贮饲料快速酸化,能有效保持饲料营养成分,降低霉菌毒素含量并提升青贮整体效果,可作为青贮发酵菌株使用。     

微卫星DNA分子标记技术及其在动物学研究中的应用

笔者阐述了微卫星DNA的结构及其多态性分析原理和微卫星标记DNA技术的实践方法．并简要介绍了近年采微卫星DNA分子标记技术在遗传多样性、遗传图谱构建和QTL定位、群体遗传结构分析和杂交优势预测以及疾病与疾病诊断研究等方面的应用。     

5个鸭群体遗传关系的微卫星标记分析

选用12个微卫星标记对5个鸭群体（金陵黑鸭、樱桃谷鸭、乌嘴鸭、莆田黑鸭和三穗鸭）的进行了了群体内杂合度、多态信息含量和群体间遗传距离进行检测和分析。结果表明，12个微卫星标记只有7个在5个群体中检测到多态性，5个群体的平均杂合度在0．5308-0．6347之间，其中金陵黑鸭的平均杂合度最高，乌嘴鸭的最低。基于Nei氏标准遗传距离构建的系统发生树结果表明，樱桃谷鸭独聚为一大类，金陵黑鸭与乌嘴鸭聚集为一类，莆田黑鸭和三穗鸭聚集为一类。上述5个群体7个微卫星座位的检测和分析结果为这些鸭群体的资源利用提供了参考依据。     

猪GSKIP基因ceRNA调控网络及其蛋白互作分析

利用RT-PCR技术从版纳微型猪近交系睾丸组织中扩增出GSKIP全长编码序列并分析其分子特征,对GSKIP基因进行功能注释,分析其与非编码RNA(miRNA和lnRNA)间的调控关系,并构建ceRNA转录调控网络,进一步分析GSKIP蛋白的基本功能,构建多物种进化树和相互作用蛋白网络.通过RT-PCR获得了BMI GSKIP CDS区全长420 bp,该基因含4个外显子;基因功能分析表明,GSKIP主要参与Wnt信号通路;基因靶向作用分析表明,猪GSKIP受ssc-miR-181c、ssc-miR-181b、ssc-miR-181a、ssc-miR-335和miR-644-5p等5个miRNA的靶向调控;蛋白质结构分析表明,GSKIP包含1个DUF727结构域,α螺旋在二级结构中占比最高;多物种进化分析表明,BMI GSKIP氨基酸序列在哺乳动物中较为保守,与绵羊和牛的亲缘关系最为接近;蛋白互作网络分析表明,BMI GSKIP与10个蛋白存在相互作用.     

版纳微型猪近交系免疫排斥相关基因B4 GALNT2的克隆、表达及功能生物信息学分析

为探讨B4GALNT2基因在异种器官移植排斥反应中的作用,以版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line, BMI)为试验动物,研究BMI B4GALNT2基因的序列、结构和表达等特性。通过RT-PCR方法从扁桃体组织中获得B4GALNT2基因cDNA序列,先后应用qPCR和Western Blotting分别检测其mRNA及蛋白质在多种组织中的表达情况,并对蛋白质结构特征进行相关生物信息学分析。获得BMI B4GALNT2 CDS序列1 509 bp,编码502个氨基酸(GenBank核酸登录号:KU358546;蛋白质登录号:ANH21179.1),功能生物信息学分析显示该蛋白含有半乳糖转移酶结构域,有一个跨膜结构,无信号肽。荧光定量结果显示其mRNA在扁桃体、脾脏和淋巴结等重要免疫组织中相对高表达,Western Blotting结果同样显示BMI B4GALNT2蛋白在扁桃体等免疫组织中相对高表达。明确了B4GALNT2基因在BMI多组织中的表达情况,以及B4GALNT2蛋白质的基本结构和功能特征,为进一步深入探究B4GALNT2基因在猪-人异种移植免疫排斥方面的分子机制奠定基础。     

绿色荧光蛋白基因原核表达质粒pET32a-AcGFP1的构建及其在大肠杆菌中的高效表达

 为了构建绿色荧光蛋白AcGFP1基因的原核表达载体pET32a AcGFP1,并诱导使其在大肠杆菌中高效表达,本研究以pIRES AcGFP1质粒为模板,采用PCR技术特异性扩增绿色荧光蛋白AcGFP1基因,通过酶切和连接使其与原核表达载体pET32a（+）构成重组子,经PCR、酶切和测序鉴定后,重组质粒转化大肠杆菌Rosetta（DE3）,用不同浓度的异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达绿色荧光蛋白,经15% SDS PAGE鉴定,结果显示：重组质粒pET32a AcGFP1中的AcGFP1序列与Clontech公司的pIRES AcGFP1质粒的AcGFP1序列完全一致,表明本实验已成功构建了含有绿色荧光蛋白基因AcGFP1的原核表达质粒。此外,pET32a AcGFP1转化Rosetta（DE3）,经不同浓度的IPTG诱导,SDS PAGE检测均获得高效表达,为今后构建pET32a(+) TAT AcGFP1融合表达载体以及深入研究TAT的细胞膜穿透作用的机制奠定基础。     

新型实验动物--近交系猪的应用前景

随着生物科学的迅猛发展，对实验动物的要求越来越高，渐渐由一般实验动物过渡到了近交系动物，而近交系猪因具有遗传背景清楚、基因纯合度高、与人体在很多方面相似等独特的优点而成为特有疾病的动物模型。现已被广泛应用在器官移植、转基因研究等方面，在其他生命科学领域中也具有综合开发利用价值，其应用前景十分广阔。     

槟榔江水牛群体遗传结构的RAPD分析

 为探讨RAPD标记在水牛遗传多样性方面检测的应用价值，以及了解槟榔江水牛的群体遗传结构状况，研究采用随机扩增多态性DNA标记技术对槟榔江水牛20个个体进行了遗传变异分析，从70个随机引物中筛选出15个多态性丰富的引物对其所有个体的总基因组DNA进行了PCR扩增，结果15条引物共产生105种扩增片段，多态片段95条，平均每条引物的扩增带数为7，各引物多态性片段范围在2～12之间，多态频率在40%～100%之间，多态座位平均为90.48%。表明槟榔江水牛的遗传多样性较丰富。     

版纳微型猪近交系KITLG基因克隆、组织表达及功能特性分析

【目的】研究KITLG基因在猪生殖细胞发育过程中的作用。【方法】从Gen Bank下载猪KITLG序列作为参考序列,设计特异引物从版纳微型猪近交系(BMI)附睾组织中扩增KITLG基因完全编码序列及部分侧翼序列;应用半定量PCR技术检测BMI 10个重要组织的KITLG m RNA转录表达水平,并对KITLG翻译的蛋白质序列进行多种功能生物信息学分析,预测KITLG蛋白质的功能,最后构建KITLG的多物种氨基酸系统进化树。【结果】扩增得到BMI KITLG编码区序列长825 bp,编码274个氨基酸,序列已提交Gen Bank,基因登录号KU705624,对应的氨基酸登录号AOC89042。多组织相对半定量表达分析表明:KITLG基因在附睾、心、脾、肺、肾、胃中高表达,在大脑、肝、小肠和睾丸中低表达。功能生物信息学分析表明:KITLG存在1个保守结构域SCF,有1个跨膜螺旋结构,存在N端信号肽序列,N末端和C末端均亲水,二级结构以α螺旋为主,有5类功能活性位点。系统进化分析表明:KITLG在进化中高度保守,且与牛、羊的亲缘关系最近。【结论】研究结果为探索BMI KITLG基因在生殖细胞发育过程中的作用及功能奠定基础。