微卫星PCR聚丙烯酰胺凝胶银染法影响因素的分析研究

 微卫星PCR结合聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的DNA检测方法。此法分离小于500bP的DNA片段效果很好，分辨率极高，只相差1bp的片段也能分开，且可容纳相对大量的DNA。再结合银染法使该方法得到了广大科研工作着的青睐，本研究通过多方面摸索对该方法进行了总结和改良。     

明光小耳猪遗传多样性分析

为深入了解明光小耳猪群体遗传结构,使之得到更好的保护和利用,采用分布在家猪19对染色体上的76个微卫星标记对该猪种65个样品进行群体遗传变异分析.共检测到343个等位基因,每个座位的等位基因数从2到9不等,有效等位基因数在1.223 9～4.807 9之间,平均每个座位等位基因数为(4.513 2±1.205 5)个,有效等位基因数为(3.216 9±0.773 6)个,群体平均表观杂合度、期望杂合度及平均多态信息含量分别为0.944 2±0.159 5、0.668 5±0.094 5和0.610 3±0.108 3.结果表明,明光小耳猪群体遗传变异丰富.     

单核苷酸多态性的研究情况及应用

单核苷酸多态性（SNPs）作为新的遗传标记已广泛应用于基因定位、克隆和遗传多样性的研究。在畜禽的遗传育种过程中,人们一直在致力于寻找些可靠的遗传标记（Genetic Marker）来提高选择效率与效能。而遗传标记的内涵随着遗传学,特别是基因概念的发展而发展。遗传标记已逐渐从形态、细胞扩展到生化和分子水平上的标记。     

近交系猪群的现代化饲养管理

1近交系的命名 近交系是由全同胞兄妹或亲子连续20世代交配而育成的，其近交系数应达到或大于98．6％，且所有个体可以追溯到一对共同祖先。亲子配或全同胞配是近交的2种极端形式，也称“急骤近交”。     

转基因动物的研究进展与应用前景

转基因动物指通过人为的方法将外源目的基因导入到动物染色体基因组内,使之稳定表达并能遗传给后代的一类动物.转基因动物技术是近20年来发展起来的生命科学研究领域中的一个全新技术,目前,该技术已在分子生物学、生物制药、医学及畜牧育种等方面得到应用,展现出广阔的应用前景和潜在的经济效益.笔者主要对转基因动物的研究进展、应用及其发展前景进行综述.     

从猪血中提取高质量基因组DNA的研究

经研究改进 ,建立了一种从猪血中提取高纯度全基因组DNA的有效方法。经 2 %琼脂糖凝胶电泳检测 ,DNA带型整齐集中 ,无拖尾现象 ,证明DNA分子片段完整 ,没有降解。紫外分光光度计检测 ,DNA的OD2 60 /OD2 80 达 1.75± 0 .0 5 ,证明所提DNA质量较好 ,用于PCR扩增 ,可以得到满意的扩增效果 ,且避免了用苯酚等剧毒试剂 ,是一种理想的DNA提取法     

版纳微型猪近交系雄激素受体AR基因的克隆和表达分析

为探讨猪雄激素受体(Androgen receptor,AR)基因的序列、结构、表达和功能,以版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)睾丸组织为材料,用RT-PCR技术获得猪AR基因cDNA序列,进行生物信息学分析,应用荧光定量技术明确其mRNA的多组织表达特征。结果表明:BMI AR基因cDNA长3 257bp(GenBank登录号:KU705631),包含2 688bp的全长编码区,位于猪X染色体,含有9个外显子和8个内含子;推导出的BMI AR蛋白含有1个核定位信号、1个DBD结构域和1个LBD结构域,无信号肽,无跨膜螺旋;与黄牛、山羊、人、猩猩、大鼠和小鼠的AR蛋白依次有94.2%、94.0%、90.2%、89.0%、88.1%和87.5%的同源性;其二级结构中以无规则卷曲和α螺旋为主,延伸链和β转角只在局部出现;在二级结构预测结果的基础上利用同源建模构建了其三级结构;AR基因mRNA在被检测的BMI 15个组织中呈现差异表达现象,表达量最高的组织为睾丸。该研究结果为进一步研究AR基因在BMI中的生理功能及调节机制提供了依据。     

版纳微型猪近交系精子冷冻保存研究

在版纳微型猪近交系（BMI）公猪精液冷冻保存稀释液中添加不同浓度甘油,并对不同解冻液配方和解冻方法进行研究,对比解冻后的精子活力、质膜完整率和顶体完整率,优化BMI公猪精液冷冻保存方法。结果表明,解冻后,甘油浓度为2%和3%组的精子活力、质膜完整率、顶体完整率显著高于1%、4%和5%组（P<0.05）;Ⅰ号解冻液解冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率均显著高于Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ号解冻液（P<0.05）;在活力、质膜完整率和顶体完整率方面,40℃ 6 s和50℃ 6 s这两种程序的解冻效果都显著优于38℃ 30 s（P<0.05）。由此可见,2%或3%的甘油作为抗冻保护剂、Ⅰ号解冻液解冻、40℃ 6 s或50℃ 6 s水浴解冻是较为理想的BMI公猪精液冷冻保存方法。     

微卫星DNA分子标记技术及其在动物学研究中的应用

笔者阐述了微卫星DNA的结构及其多态性分析原理和微卫星标记DNA技术的实践方法．并简要介绍了近年采微卫星DNA分子标记技术在遗传多样性、遗传图谱构建和QTL定位、群体遗传结构分析和杂交优势预测以及疾病与疾病诊断研究等方面的应用。     

猪GSKIP基因ceRNA调控网络及其蛋白互作分析

利用RT-PCR技术从版纳微型猪近交系睾丸组织中扩增出GSKIP全长编码序列并分析其分子特征,对GSKIP基因进行功能注释,分析其与非编码RNA(miRNA和lnRNA)间的调控关系,并构建ceRNA转录调控网络,进一步分析GSKIP蛋白的基本功能,构建多物种进化树和相互作用蛋白网络.通过RT-PCR获得了BMI GSKIP CDS区全长420 bp,该基因含4个外显子;基因功能分析表明,GSKIP主要参与Wnt信号通路;基因靶向作用分析表明,猪GSKIP受ssc-miR-181c、ssc-miR-181b、ssc-miR-181a、ssc-miR-335和miR-644-5p等5个miRNA的靶向调控;蛋白质结构分析表明,GSKIP包含1个DUF727结构域,α螺旋在二级结构中占比最高;多物种进化分析表明,BMI GSKIP氨基酸序列在哺乳动物中较为保守,与绵羊和牛的亲缘关系最为接近;蛋白互作网络分析表明,BMI GSKIP与10个蛋白存在相互作用.